全 文 ：ＲP-HPLC法测定 5 种剂型的九味羌活制剂中紫花前胡苷、异欧前胡素
张幸福， 范莹莹， 王 菲， 杨凤梅， 骆桂法， 刘海青
(青海省食品药品检验所，青海 西宁 810016)
收稿日期:2013-09-18
作者简介:张幸福 (1975—) ，男，副主任药师，从事中成药、藏成药的检验研究和标准提高工作。E-mail:happydrug@ 163． com
摘要:目的 建立九味羌活 (羌活、防风、苍术、黄芩、川芎、白芷、地黄、细辛和甘草)5 种不同剂型 (大蜜丸、
小蜜丸、浓缩丸、水丸、颗粒剂)中紫花前胡苷和异欧前胡素的测定方法。方法 HPLC 分析采用 Diamonsil C18色谱
柱 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm);乙腈-0. 5% 冰乙酸水溶液为流动相，非线性梯度洗脱;柱温 30 ℃;体积流量
1. 0 mL /min;检测波长 330 nm。结果 采用的方法对 5 种剂型中紫花前胡苷和异欧前胡素的测定均适用，其中紫花前
胡苷在 9. 38 ～ 469. 20 ng、异欧前胡素在 12. 56 ～ 167. 48 ng范围内线性良好，相关系数均为 0. 999 9。结论 本法分离
效果好，专属性强，准确，可用于九味羌活系列制剂的质量控制。
关键词:九味羌活方;紫花前胡苷;异欧前胡素;高效液相色谱;梯度洗脱
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)07-1458-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 07. 025
Determination of nodakenin and isoimperatorin in five kinds of Jiuwei Qianghuo
preparation by ＲP-HPLC
ZHANG Xing-fu， FAN Ying-ying， WANG Fei， YANG Feng-mei， LUO Gui-fa， LIU Hai-qing
(Qinghai Institute for Food and Drug Control，Xining 810016，China)
ABSTＲACT:AIM To develop an HPLC method for determining nodakenin and isoimperatorin in five kinds of
Jiuwei Qianghuo preparation (Notopterygii Ｒhizoma et Ｒadix， Saposhnikoviae Ｒadix，Atractylodis Ｒhizoma，
Scutelarxae Ｒadix，Chuanxiong Ｒhizoma，Angelicae dahuricae Ｒadix，Ｒehmanniae Ｒadix，Asari Ｒadix et Ｒhiz-
ma，Glycyrrhizae Ｒadix et Ｒhizoma)，including major and minor honeyed pills，concentrated pills，water pills，
and granules． METHODS The analysis was performed on diamonsil C18 column (250 mm × 4. 6 mm，5 μm)
with the mobile phase consisted of acetonitrile-0. 5% acetic acid in nonlinear gradient elution manner． The flow
rate was 1. 0 mL /min，the column temperature was maintained at 30 ℃ and the detection wavelength was set up at
330 nm． ＲESULTS The linear ranges of nodakenin and isoimperatorin were 9. 38 ～ 469. 20 ng，12. 56 ～
167. 48 ng，respectively． Both the correlation coefficient were more than 0. 999 9． CONCLUSION The method
is accurate，reliable． It can be used as the quality control of Jiuwei Qianghuo preparations．
KEY WOＲDS:Jiuwei Qianghuo preparation;nodakenin;isoimperatorin;HPLC;gradient elution
九味羌活方出自金代名医张元素，后元代医家
王好古师从张元素之徒李杲学医，首次将九味羌活
汤录于《此事难知》一书中［1］。具解表散寒，祛
风除湿之功效［2］，为风寒感冒的首选良药。经现
代制药技术制成九味羌活丸 (大蜜丸、小蜜丸、
浓缩丸、水丸)和九味羌活颗粒［3-4］，在 2009 年
收入国家基本药物目录。该系列制剂处方相同，由
羌活、防风、苍术、黄芩、川芎、地黄、细辛、白
芷和甘草等九味中药材组成。方中羌活、白芷均含
有紫花前胡苷和异欧前胡素，为两味药材的主要成
分［5-7］和活性成分［8-10］，查阅文献尚无该系列制剂
中紫花前胡苷的测定方法［11-14］。本实验应用高效
液相色谱梯度洗脱，对九味羌活 5 种剂型的紫花前
胡苷和异欧前胡素进行了定量测定，方法涵盖市售
的九味羌活系列的全部品种，可以为九味羌活制剂
的质量控制提供参考。
1 仪器与材料
岛津 LC-20ATVP型高效液相色谱仪，Sartrious
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BT224S 电子天平 (德国 Sartrious 公司) ，Ohaus
AＲ5120 电 子 天 平 (奥 豪 斯 公 司) ，Hangping
FA1004 电子天平 (上海天平仪器厂) ，超声波清
洗器 (KQ5200B，功率 200 W，频率 40kHz，昆山
市超声仪器有限公司)。
紫花前胡苷、异欧前胡素 (供含量测定用，
批号 111821-201001、110827-201008，均购自中国
食品药品检定研究院)。液相用甲醇、乙腈为色谱
纯，其余试剂为分析纯 (市售)，水为超纯水。九
味羌活系列制剂样品来自生产企业、经营单位及使
用单位，包括大蜜丸、小蜜丸、浓缩丸、水丸和颗
粒剂共 5 种剂型 24 批次。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件［13-16］ Diamonsil C18 色谱柱 (4. 6
mm ×250 mm，5 μm);流动相 A 相为乙腈，B 相为
0. 5% 冰乙酸水溶液，梯度洗脱 (0 ～35 min，10%→
50% A;35 ～ 50 min，50% A→55A%;50 ～ 60 min，
55%→80%A);柱温30 ℃;体积流量1. 0 mL/min;检
测波长330 nm;进样量10 μL;记录时间60 min。理论
塔板数按异欧前胡素峰计算不低于2 000。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取紫花前胡苷
0. 011 73 g置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，即得紫花前胡苷对照品贮备液。精密称
取异欧前胡素对照品 0. 010 53 g (纯度 99. 4%)置
25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
即得异欧前胡素对照品贮备液。精密量取紫花前胡
苷贮备液 5. 0 mL，异欧前胡素贮备液 1. 0 mL 置
50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得 (每1 mL
含紫花前胡苷 23. 46 μg、异欧前胡素 8. 37 μg)。
2. 3 供试品溶液的制备 取各九味羌活制剂，研
细混匀 (大蜜丸剪成细小碎粒)，取 1 g，精密称
定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇 50 mL，称定
质量，超声 30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补
足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 4 专属性试验 根据九味羌活制剂的处方，取
除去羌活和白芷的样品，照 “2. 3”项方法制备阴
性供试品溶液。按 “2. 1”项色谱条件，分别精密
吸取对照品溶液、阴性样品溶液、供试品溶液各
10 μL，分别注入液相色谱仪，测定，即得。供试
品色谱中，在与紫花前胡苷、异欧前胡素对照品色
谱峰相应的位置上，有保留时间相同的色谱峰，阴
性无干扰，见图 1。
1． 紫花前胡苷 2． 异欧前胡素 1． nodakenin 2． isoimperatorin
图 1 九味羌活制剂的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of Jiuwei Qianghuo preparations
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2. 5 线性关系考察 精密量取紫花前胡苷对照品
贮备液 (0. 2346 mg /mL)20 mL，置 50 mL 量瓶
中，甲醇定容摇匀 (93. 84 μg /mL)，取异欧前胡
素贮备液 (41. 87 μg /mL)适量，逐步稀释成含紫
花前 胡 苷 质 量 浓 度 为 0. 938、2. 815、7. 507、
18. 768、37. 536、46. 920 μg /mL，异欧前胡素质量
浓度为 1. 256、2. 512、4. 187、8. 374、12. 561、
16. 748 μg /mL的混合对照品溶液，分别精密吸取
10 μL，按 “2. 1”项条件，注入色谱仪测定，以
进样量 (ng)为横坐标、峰面积为纵坐标进行线
性回归处理，得紫花前胡苷回归方程为 Y =
2. 659 × 103X － 2. 539 × 103，r = 0. 999 9;异欧前
胡素回归方程为 Y = 1. 660 × 103X － 38， r =
0. 999 9，紫花前胡苷在 9. 38 ～ 469. 20 ng、异欧前
胡素在 12. 56 ～ 167. 48 ng范围内线性关系良好。
2. 6 定量限和检出限 检出限是指从背景干扰中
区分出被测物的最低质量浓度。进 1 针甲醇，测出
噪音的峰高，取紫花前胡苷和异欧前胡素对照品溶
液，用甲醇逐级稀释进样测出峰高，按 3 倍和 10
倍信噪比计算出紫花前胡苷和异欧前胡素的检出限
分别为 0. 28、1. 34 μg /mL，定量限分别为 0. 75、
2. 51 μg /mL。
2. 7 稳定性试验 取九味羌活水丸，按选定方法
制备供试品溶液，室温下保存，分别于配置后 0、
3、5、10、18、49 h 进样，按 “2. 1”项条件，注
入液相色谱仪，测定并记录色谱图，考察其稳定
性。紫花前胡苷峰面积的 ＲSD为 0. 7%，异欧前胡
素峰面积的 ＲSD为 0. 6%。
2. 8 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，连
续进样 5 次，每次 10 μL，测定紫花前胡苷峰面积
的 ＲSD 为 1. 5%、异欧前胡素峰面积的 ＲSD 为
1. 2%，表明精密度好。
2. 9 重复性试验 取同一批次九味羌活制剂样品，
平行 6 份，取约 1 g，精密称定，照 “2. 3”项方
法制成供试品溶液，按“2. 1”项色谱条件进样测
定。结果紫花前胡苷的 ＲSD为 1. 6%，异欧前胡素
的 ＲSD为 1. 7%。
2. 10 回收率试验 采用加样回收法，取已知含有
量的九味羌活水丸 (紫花前胡苷为 1. 254 9 mg /g、
异欧前胡素为 0. 475 3 mg /g)约 0. 5 g，平行 6 份，
精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入紫花前
胡苷 (15. 26 μg /mL)、异欧前胡素对照品溶液
(5. 024 μg /mL)50 mL，密塞，称定质量，超声处
理 30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的
质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述测定
方法进行测定，计算回收率，结果见表 1。
表 1 回收率考察结果
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests
成分
称样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率
%
平均回
收率 /%
(ＲSD /%)
紫花前胡苷
异欧前胡素
0. 491 2 0. 616 4 0. 763 2 1. 347 0 95. 7
0. 499 9 0. 627 3 0. 763 2 1. 375 2 98. 0
0. 491 1 0. 616 3 0. 763 2 1. 351 1 96. 3
0. 5137 0. 644 6 0. 763 2 1. 404 5 99. 6
0. 499 6 0. 626 9 0. 763 2 1. 364 8 96. 7
0. 504 3 0. 632 8 0. 763 2 1. 372 3 96. 9
0. 491 2 0. 233 5 0. 251 2 0. 480 2 98. 2
0. 499 9 0. 237 6 0. 251 2 0. 487 7 99. 6
0. 491 1 0. 233 4 0. 251 2 0. 487 2 101. 0
0. 513 7 0. 244 2 0. 251 2 0. 492 2 98. 7
0. 499 6 0. 237 5 0. 251 2 0. 484 2 98. 2
0. 504 3 0. 239 7 0. 251 2 0. 488 5 99. 0
97. 2
(1. 4)
99. 1
(1. 1)
2. 11 样品测定 取九味羌活制剂样品，照
“2. 3”项方法制成供试品溶液，按 “2. 1”项色谱
条件进样测定，计算紫花前胡苷、异欧前胡素的
量。测定结果见表 2。
表 2 样品测定结果
Tab. 2 Determination results of samples
编号 生产厂家 剂型
紫花前胡苷
/(mg·g － 1)
异欧前胡素
/(mg·g － 1)
二者总量
/(mg·g － 1)
1 厂家 A 水丸 1. 66 0. 93 2. 59
2 厂家 B 水丸 0. 01 1. 24 1. 25
3 厂家 B 水丸 0. 01 0. 05 0. 06
4 厂家 C 水丸 0. 22 0. 46 0. 68
5 厂家 D 水丸 0. 50 0. 08 0. 58
6 厂家 E 水丸 0. 06 0. 09 0. 15
7 厂家 E 水丸 0. 19 0. 05 0. 24
8 厂家 F 水丸 0. 23 0. 16 0. 39
9 厂家 F 水丸 0. 20 0. 36 0. 56
10 厂家 G 水丸 0. 18 0. 44 0. 62
11 厂家 G 水丸 1. 25 0. 48 1. 73
12 厂家 H 浓缩丸 0. 49 0. 24 0. 73
13 厂家 H 浓缩丸 0. 52 0. 24 0. 76
14 厂家 I 大蜜丸 0. 19 0. 36 0. 55
15 厂家 I 大蜜丸 0. 29 0. 26 0. 55
16 厂家 J 大蜜丸 0. 41 0. 17 0. 58
17 厂家 J 大蜜丸 0. 42 0. 20 0. 62
18 厂家 J 小蜜丸 0. 39 0. 16 0. 55
19 厂家 J 小蜜丸 0. 40 0. 17 0. 57
20 厂家 K 颗粒剂 0. 01 — 0. 01
21 厂家 K 颗粒剂 0. 01 — 0. 01
22 厂家 L 颗粒剂 0. 16 — 0. 16
23 厂家 M 颗粒剂 0. 01 — 0. 01
24 厂家 N 颗粒剂 0. 08 — 0. 08
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3 讨论
3. 1 黄芩、羌活、川芎、白芷、苍术和地黄等六
味药材的特征峰在此色谱系统中均能体现，因此该
系统分析时间较长。由于处方药材多，成分复杂，
本实验只选取紫花前胡苷和异欧前胡素进行定量测
定，尝试用甲醇-0. 1% 磷酸溶液、乙腈-0. 5%冰乙
酸溶液等多种流动相，最后选择甲醇-0. 1%冰乙酸
为流动相梯度洗脱，在该条件下被测组分的峰形和
分离度良好。本实验共测定不同生产企业的水丸
11 批，浓缩丸 2 批，大蜜丸 4 批，小蜜丸 2 批，
颗粒剂 5 批，并以紫花前胡苷和异欧前胡素的总量
来分析比较。
3. 2 白芷的主要药效成分为挥发性成分，挥发性
成分在放置过程中极易损失。紫花前胡苷和异欧前
胡素的总量在大蜜丸、小蜜丸、浓缩丸中相对稳
定。在水丸中二者总量差异明显，既表现在同一企
业内，也表现在不同企业间。而在颗粒剂中的单独
含有量及总量均较低。
3. 3 水丸和蜜丸均为药材细粉用水泛丸或加炼蜜
制丸;颗粒剂和浓缩丸中羌活、防风、苍术、细
辛、川芎提取挥发油，白芷进行渗漉 (颗粒剂)
或部分原粉 (浓缩丸)。同为喷入挥发油，浓缩丸
中紫花前胡苷和异欧前胡素的量远远高于颗粒剂。
据文献报道，欧前胡素长时间受热会损失高达
40%［17］。曲永胜［18］认为挥发油是否影响九味羌活
颗粒的疗效，需要进一步更深入的研究。目前对药
物中挥发油的稳定性研究以 β-环糊精包合
为主［19-21］。
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第 36 卷 第 7 期
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July 2014
Vol． 36 No． 7