全 文 ：China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 47 中国药房 2011年第22卷第47期
皮中芍药苷。因供试品杂质干扰较大，影响芍药苷斑点的检
视，故用氧化铝柱对供试品进行洗脱、精制，以消除背景干扰。
采用TLC法鉴别本品中牡丹皮、青黛、冰片，采用HPLC法
测定胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ的含量，经方法学考察，证明方
法灵敏、专属、快速，可用于愈溃贴膜的质量控制。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010
年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录34.
[ 2 ] 段晓颖，张 辉，高卫芳.复方牛蒡子含片质量标准研究
[J].中国药房，2009，20（15）：1 158.
[ 3 ] 郑启占，董泽红，余 靖，等.中药现代研究与应用[M].北
京：学苑出版社，1998：3 232.
[ 4 ] 国家中医药管理局中草药情报中心站.植物有效成分手
册[M].北京：人民卫生出版社，1986：799、1 108.
（收稿日期：2010-12-06 修回日期：2011-07-30）
Δ贵州省中药、民族药炮制技术研究平台建设项目（黔科合社字
[2009]5001号）
＊高级实验师。研究方向：中药炮制。电话：0851-5652239。
E-mail：wjk-66@163.com
竹叶柴胡药材HPLC指纹图谱研究Δ
王建科＊，张永萍，李 玮，郭建民，张正敏，赵晓兰（贵阳中医学院，贵阳市 550002）
中图分类号 R284.1；R927 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）47-4462-03
摘 要 目的：建立竹叶柴胡药材的高效液相色谱指纹图谱。方法：色谱柱为Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙
腈-0.2％磷酸水溶液（梯度洗脱），流速为 1.0 mL·min-1，柱温为 30℃，检测波长为 203 nm。结果：建立了竹叶柴胡药材的指纹图
谱，确定了22个共有峰，各峰的相似度均＞0.800。结论：该指纹图谱建立方法简单、重复性好，可为竹叶柴胡药材的鉴别和质量评
价提供参考。
关键词 竹叶柴胡；指纹图谱；高效液相色谱法
Study on HPLC Fingerprints of Bupleurum marginatum
WANG Jian-ke，ZHANG Yong-ping，LI Wei，GUO Jian-min，ZHANG Zheng-min，ZHAO Xiao-lan（Guiyang Col-
lege of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the HPLC fingerprints of Bupleurum marginatum. METHODS：The chromatographic col-
umn was Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）and the mobile phase consisted of acetonitrile-0.2％H3PO4 at the flow rate of 1.0
mL·min-1. The column temperature was 30 ℃ and the detection wavelength was set at 203 nm. RESULTS：The fingerprints of B.
marginatum were established，involving 22 common peaks. The similarity of each peak was more than 0.800. CONCLUSION：The
method is simple and reproducibile，which can be used for the quality control and species identification of B. marginatum.
KEY WORDS Bupleurum marginatum；Fingerprints；HPLC
􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐
竹叶柴胡为伞形科柴胡属植物竹叶柴胡 Bupleurum
marginatum Wall.ex.DC的干燥全草 [1]，性味苦寒，具有散风退
热、疏肝解郁之功效，可用于治疗感冒发热等症[2]。竹叶柴胡
主要分布于贵州、四川、云南、湖北等省，在我国西南地区常当
作柴胡药材使用[3]，是常用中药柴胡的三大来源之一。近年来
有关竹叶柴胡的实验研究资料为数不多，就其研究的内容看，
主要集中在化学成分等研究上。中药指纹图谱作为一种有效
的质量控制模式，以其科学的理论依据获得国际上的一致认
可[4]。因此，本试验采用高效液相色谱（HPLC）法对竹叶柴胡
药材的指纹图谱进行研究，以为其质量标准的制定及进一步
综合开发利用提供参考。
1 仪器与试药
LC-20AT HPLC仪、SPD-20A UV检测器（日本岛津公司）；
AUW220D全自动电子天平（岛津仪器（苏州）有限公司）；
HS10260D超声波清洗器（天津恒奥科技公司，工作频率：40
kHz，功率：250W）。
柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d对照品（中国食品药品检定研究
院，批号分别为 110777- 200507、110778-200506，供含量测定
用）；氨水、甲醇、磷酸、无水乙醇均为分析纯，乙腈、甲醇为色
谱纯，水为纯净水；竹叶柴胡药材 S1～S10号分别购自贵州贵
阳、贵州兴义、陕西西安、四川彭州、四川绵阳、四川荣县、重
庆、湖北武汉、云南禄丰、云南昆明，经贵阳中医学院生药教研
室魏升华副教授鉴定为伞形科植物竹叶柴胡 B. marginatum
Wall.ex DC.的干燥全草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙
腈-0.2％磷酸水溶液，梯度洗脱（线性梯度见表 1）；检测波长：
203 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称取柴胡皂苷 a对照品 1.27 mg、柴胡皂苷 d对照品
1.22 mg，置于同一5 mL容量瓶中，用甲醇定容，即得。
··4462
中国药房 2011年第22卷第47期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 47
2.3 供试品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的竹叶柴胡药材粉末（过40目筛）约
0.5 g，置具塞平底烧瓶中，精密加入 25 mL5％氨水甲醇，超声
60 min，静置，放冷，过滤，残渣用20 mL提取溶剂洗涤3次，合
并滤液，置恒温水浴锅上 60℃挥干溶剂，用甲醇定容至 5 mL
容量瓶中，用0.45 μm微孔滤头滤过，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 精密称取干燥至恒重的竹叶柴胡药材粉
末 0.5 g，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱
条件进行测定，连续进样5次。将所得数据采用国家药典委员
会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”软件进行
处理，结果表明，其相似度均＞0.95，符合指纹图谱测定的要
求，方法精密度良好。
2.4.2 稳定性试验 精密称取干燥至恒重的竹叶柴胡药材粉
末 0.5 g，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱
条件分别于0、2、4、6、10 h进样测定。将所得数据采用国家药
典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”软
件进行处理，结果表明，其相似度均＞0.95，符合指纹图谱测定
的要求，供试品溶液在10 h内稳定。
2.4.3 重复性试验 精密称取干燥至恒重的竹叶柴胡药材粉
末 6份，每份 0.5 g，分别照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按
“2.1”项下色谱条件进样测定。将所得数据采用国家药典委员
会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”软件进行
处理，结果表明，其相似度均＞0.95，符合指纹图谱测定的要
求，方法重复性良好。
2.5 指纹图谱及其技术参数
2.5.1 指纹图谱的建立及共有指纹峰的标定 精密称取干燥
至恒重的S1～S10号竹叶柴胡药材粉末，每份0.5 g，照“2.3”项下
方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录
HPLC图。通过比较10批供试品HPLC图的检测结果，选定其
中 22个共有的色谱峰为共有指纹峰，建立竹叶柴胡药材的
HPLC指纹图谱共有模式图（见图1）。经对照品定性，13号色
谱峰为柴胡皂苷a，16号色谱峰为柴胡皂苷d（见图2）。其中柴胡
皂苷a比柴胡皂苷d峰面积大、分离度好，因此选其为参照峰。
2.5.2 共有峰的相对保留时间与相对峰面积 将各色谱峰保
留时间与同一图谱中柴胡皂苷 a的保留时间进行比较，其比值
为各色谱峰的相对保留时间；将各色谱峰峰面积与同一图谱
中柴胡皂苷 a的峰面积进行比较，其比值为各色谱峰的相对峰
面积。10批次不同产地样品中各共有峰相对保留时间见表2；
各共有峰相对峰面积见表3。由表2、表3可知，10批次不同产
地样品基本均一、稳定。
表1 指纹图谱流动相线性梯度
Tab 1 The linearity of mobile system of fingerprints
t/min
0～8
8～15
15～25
25～40
40～53
53～55
55～75
乙腈/％
5～19
19～30
30～35
35～47
47～62
62～85
85～95
0.2％磷酸水/％
95～81
81～70
70～65
65～53
53～38
38～15
15～5
0 10 20 30 40 50 60 70 min
A B
图2 混合对照品的HPLC
A.柴胡皂苷a；B.柴胡皂苷d
Fig 2 HPLC chromatograms of mixture control
A. saikosaponin a；B. saikosaponin d
0 10.87 21.74 21.81 43.48 54.35 65.22 76.09 min
图1 共有模式图
Fig 1 Common pattern
表2 10批样品指纹图谱共有峰的相对保留时间
Tab 2 Relative retention times of common peaks for 10 batches of samples
峰1
峰2
峰3
峰4
峰5
峰6
峰7
峰8
峰9
峰10
峰11
峰12
峰13
峰14
峰15
峰16
峰17
峰18
0.082 4
0.103 8
0.153 9
0.277 3
0.331 0
0.428 9
0.468 5
0.490 6
0.552 9
0.652 8
0.768 3
0.933 7
1.055 6
1.169 9
1.184 2
1.196 2
1.215 7
1.259 4
0.082 4
0.103 0
0.155 4
0.279 2
0.332 4
0.430 0
0.469 1
0.492 4
0.554 6
0.657 4
0.759 8
0.948 1
1.055 2
1.171 5
1.186 1
1.197 5
1.217 2
1.265 1
0.079 2
0.106 5
0.155 2
0.278 5
0.331 9
0.429 9
0.469 1
0.487 1
0.554 4
0.653 0
0.765 9
0.916 7
1.047 5
1.175 5
1.185 4
1.196 1
1.209 9
1.264 0
0.079 3
0.106 6
0.156 3
0.279 9
0.332 6
0.430 2
0.469 3
0.492 9
0.550 4
0.651 5
0.759 7
0.947 6
1.054 8
1.170 9
1.185 6
1.196 7
1.216 7
1.264 5
0.082 6
0.103 9
0.157 1
0.280 8
0.333 6
0.430 9
0.469 7
0.493 3
0.551 4
0.653 1
0.761 7
0.957 6
1.055 9
1.172 7
1.187 3
1.198 2
1.218 3
1.265 8
0.082 3
0.102 9
0.151 8
0.273 2
0.328 3
0.426 7
0.468 8
0.490 6
0.553 9
0.646 4
0.769 2
0.946 0
1.053 8
1.165 3
1.179 6
1.191 9
1.211 6
1.259 5
0.079 3
0.107 1
0.151 1
0.271 6
0.327 9
0.426 9
0.466 9
0.487 6
0.549 5
0.652 8
0.762 4
0.918 1
1.054 6
1.167 4
1.192 7
1.212 5
1.224 8
1.260 5
0.082 0
0.103 1
0.150 7
0.273 2
0.329 6
0.430 4
0.471 2
0.494 7
0.557 1
0.652 7
0.767 9
0.895 6
1.042 3
1.176 2
1.197 1
1.211 7
1.228 1
1.267 6
0.082 4
0.106 5
0.154 5
0.277 7
0.331 4
0.429 0
0.468 5
0.491 2
0.552 8
0.652 0
0.766 5
0.920 7
1.054 6
1.169 6
1.195 0
1.215 1
1.227 0
1.263 2
0.082 4
0.106 6
0.155 7
0.279 0
0.332 4
0.430 3
0.469 3
0.492 9
0.555 1
0.654 1
0.767 7
0.894 0
1.052 5
1.185 7
1.198 7
1.209 8
1.229 0
1.264 6
1.84
1.70
1.46
1.16
0.58
0.34
0.23
0.50
0.42
0.41
0.48
2.41
0.42
0.49
0.53
0.72
0.57
0.22
共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD/％
··4463
China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 47 中国药房 2011年第22卷第47期
表3 10批样品指纹图谱共有峰的相对峰面积
Tab 3 Relative areas of common peaks for 10 batches of samples
共有峰
峰1
峰2
峰3
峰4
峰5
峰6
峰7
峰8
峰9
峰10
峰11
峰12
峰13
峰14
峰15
峰16
峰17
峰18
峰19
峰20
峰21
峰22
S1
6.641 5
1.290 5
0.231 9
1.048 5
3.960 9
20.684 0
3.941 0
1.301 9
1.278 2
0.960 3
0.667 7
0.432 5
1.706 5
0.294 2
0.243 2
4.229 0
3.569 2
0.057 6
0.103 5
0.705 5
1.060 2
0.259 3
S2
7.804 9
1.162 2
0.316 4
1.186 4
4.452 0
13.838 0
3.976 2
18.419 1
1.465 1
0.630 2
0.802 6
0.388 5
0.872 8
2.513 9
4.527 8
3.270 5
1.813 6
1.086 5
0.235 3
0.570 8
0.745 7
0.473 9
S3
1.241 3
0.373 6
0.687 8
0.337 4
0.299 6
4.910 6
3.003 7
0.955 0
1.276 2
0.985 5
2.604 8
0.383 8
2.021 5
1.993 0
0.864 4
6.264 4
0.424 5
1.159 1
0.181 1
0.333 2
1.050 7
0.066 3
S4
1.230 1
0.198 9
0.922 6
0.491 1
0.963 0
5.036 6
1.226 7
5.058 4
1.457 0
0.533 4
0.942 4
0.476 9
1.332 1
1.641 7
2.927 7
2.768 9
1.866 0
0.410 6
0.174 6
0.353 2
0.948 0
0.074 3
S5
7.687 5
1.715 5
0.516 0
1.662 9
3.128 5
5.250 1
2.003 9
13.469 2
2.565 5
0.693 4
1.294 8
0.522 8
0.771 0
2.180 8
3.890 4
3.123 3
1.540 7
0.623 4
0.615 2
1.053 3
1.221 0
0.254 7
S6
5.890 6
0.768 8
0.182 1
1.033 5
3.063 9
8.169 1
2.659 8
11.348 2
1.916 7
0.440 1
0.933 4
0.328 8
0.471 5
1.365 5
2.463 7
2.189 6
1.080 0
0.518 8
0.545 2
0.725 1
0.957 2
0.281 3
S7
0.464 9
0.099 4
0.178 5
0.105 4
0.235 4
2.735 6
0.566 2
0.788 3
0.025 5
0.189 5
0.258 6
0.113 8
0.532 9
0.125 1
1.390 1
0.742 6
0.056 8
0.041 3
0.542 9
0.241 4
0.508 3
0.038 0
S8
2.551 6
0.262 2
1.833 5
0.693 4
1.769 3
16.801 2
2.456 1
2.187 3
1.242 2
0.345 9
0.173 6
0.137 8
0.348 5
0.309 5
0.328 9
0.622 2
0.060 1
0.027 5
0.501 0
0.535 4
0.858 7
0.223 6
S9
0.916 4
0.137 8
0.373 0
0.193 3
0.223 2
2.753 3
0.531 8
0.263 4
0.466 1
0.430 9
0.270 3
0.392 9
1.260 2
0.182 8
2.214 6
2.076 8
0.035 5
0.033 8
0.503 9
0.224 5
0.886 6
0.046 3
S10
1.278 0
0.436 4
0.256 9
0.193 5
0.902 1
2.434 8
3.023 1
3.072 9
0.424 1
1.455 7
1.478 2
0.562 5
1.247 2
2.318 2
3.348 0
0.736 6
0.222 4
0.808 8
0.295 3
0.257 9
0.589 6
0.129 6
RSD/％
85.35
87.51
92.99
74.94
85.34
79.05
53.39
112.64
61.80
56.31
77.32
39.64
52.23
75.23
67.08
67.91
107.81
92.20
51.34
54.00
24.75
75.45
峰19
峰20
峰21
峰22
1.568 8
1.599 9
1.685 4
1.798 3
1.570 5
1.602 3
1.689 1
1.802 3
1.568 8
1.601 5
1.688 1
1.800 6
1.568 7
1.601 4
1.688 1
1.800 9
1.569 2
1.601 8
1.688 2
1.801 0
1.567 4
1.597 5
1.681 4
1.793 2
1.567 2
1.597 2
1.680 8
1.791 4
1.567 6
1.598 5
1.683 1
1.795 2
1.568 0
1.599 4
1.684 8
1.797 7
1.568 8
1.601 5
1.688 2
1.801 0
0.06
0.12
0.18
0.21
共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD/％
续表2
Continued tab 2
2.6 指纹图谱相似度计算
将 10批次不同产地的竹叶柴胡药材指纹图谱数据导入
“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）”软件，计算均
值相似度。结果，10批样品相似度分别为0.821、0.839、0.803、
0.909、0.755、0.805、0.887、0.802、0.861、0.828。竹叶柴胡药材
的HPLC指纹图谱见图3。
3 讨论
3.1 试验条件的选择
通过对竹叶柴胡不同提取方式、不同提取溶剂等内容的
考察，确定本试验以 5％氨水甲醇超声提取 60 min的方法最
好；对不同流动相系统及不同检测波长的考察结果表明，本试
验在203 nm的检测波长下，以流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液
进行梯度洗脱分离的方法最佳。
3.2 参照峰的选择
竹叶柴胡主要含有柴胡皂苷、黄酮、挥发油等成分。本文
确定了柴胡皂苷 a（13号峰）、柴胡皂苷d（16号峰）的色谱峰位
置，经HPLC图谱比较，柴胡皂苷 a峰面积较大，为竹叶柴胡的
主要成分之一，在 2010年版《中国药典》（一部）柴胡项下以其
为含量控制指标，故选择柴胡皂苷a为参照峰。
3.3 指纹图谱的评价
通过对来自不同产地的10批次竹叶柴胡药材进行指纹图
谱分析，发现其指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致，相
似度计算结果均在0.800以上，相对保留时间也有相当好的相
似性；比较不同产区药材各共有峰相对保留峰面积，结果有一
定的差异性，原因可能与药材生长过程中受到土壤、气候、环
境等诸多因素的影响有关。本方法简单、稳定、可靠、重复性
好，可为竹叶柴胡药材的质量分析、评价与控制提供参考。
参考文献
[ 1 ] 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标
准（2003年版）[S].贵阳：贵州科技出版社，2003：165.
[ 2 ] Chiang LC，Ng LT，Liu LT，et al. Cytotoxicity and anti-
hepatitis B virus activities of saikosaponins from Buple-
um species[J].Planta Med，2003，69（8）：705.
[ 3 ] 中国医学科学院药物研究所.中药志（第2册）[M].北京：
人民卫生出版社，1979：116.
[ 4 ] 刘 文，蒋世云.中药指纹图谱研究与应用进展[J].中国
药房，2011，22（19）：1 820.
（收稿日期：2011-06-15 修回日期：2011-10-14）
0 10.87 21.74 32.61 43.48 54.36 65.22 76.09 min
图3 竹叶柴胡药材的HPLC指纹图谱
Fig 3 HPLC fingerprints of B. marginatum
s10
s9
s8
s7
s6
s5
s4
s3
s2
s1
··4464