全 文 ：2006年 3月
M arch 2006
色 谱
Chinese Journa l of Chrom atography
Vo.l 24 No. 2
208
收稿日期:2004-12-27
第一作者:马雪梅 ,女 ,硕士 ,现工作单位为河南安阳工学院 , T el:(0372)2909876, E-m ail:maxm 2001@126. com.
反相高效相色谱法测定杜香嫩枝叶中的熊果酸
马雪梅 1, 2 , 　毛子军 1 , 　郑春英1　孙元发 1 , 　周　彪1
(1.东北林业大学 森林植物生态学教育部重点实验室 , 黑龙江哈尔滨 150040;2.安阳工学院 , 河南安阳 455000)
关键词:反相高效液相色谱法(high performance liqu id chroma tog raphy, HPLC);熊果酸(ursolic ac id);杜香(Ledum palustre L. )
中图分类号:O658　　文献标识码:B　　文章编号:1000-8713(2006)02-0208-01　　栏目类别:技术与应用
　　杜香(Ledum pa lustre L. )是杜鹃花科杜香属常绿小灌
木 , 其挥发油具有明显的镇咳 、祛痰作用 , 对皮肤瘙痒和脚气
等有较好的疗效 , 因而受到广大研究者的关注。我们在研究
杜香指纹图谱时发现杜香含有活性化合物熊果酸 , 其对应色
谱峰与熊果酸对照品的保留时间及吸收谱图基本一致 , 峰纯
度良好。本文报道了杜香中熊果酸的反相高效液相色谱
(RP-HPLC)测定方法 , 方法准确 、简便 ,能排除杂质干扰 , 重
复性好。
1　实验部分
1. 1　仪器 、材料及试剂
　　日本 Jasco公司生产的高效液相色谱仪及软件 , PU-980
型泵 , UV-975型紫外检测器;熊果酸对照品购自北京百灵威
生物化学技术有限公司(纯度为 95%);杜香嫩枝叶由大兴安
岭新林林业局提供。甲醇为色谱纯;乙醇为分析纯。
1. 2　色谱分析条件
　　色谱柱:英国 HPLC Techno logy 公司的 Techsphere
ODS色谱柱(250mm ×4. 6mm .i d. , 5 μm);流动相:甲醇-
水 (甲酸调 pH 值至 3. 0)( 体积比为 90∶10), 流速 1
mL /m in;检测波长:215 nm;进样量:10 μL;柱温:25 ℃。
1. 3　对照品溶液的配制
　　精密称取熊果酸标准品 11. 00 m g, 置于 5 mL容量瓶
中 , 用甲醇溶解并稀释定容 ,摇匀 ,制成质量浓度为 2. 20 g /L
的对照品储备液。 取适量储备液用甲醇分别稀释为 2. 20,
1. 65, 1. 10, 0. 55, 0.28, 0.14 g /L的标准溶液 ,摇匀 , 备用。
1. 4　样品溶液的制备
　　将杜香嫩枝叶阴干 、粉碎 , 过 200目筛 , 精密称取该粉末
10.00 g,置于 250mL容量瓶中 , 用 95%的乙醇 60 mL浸泡
12 h, 于 40 ℃下超声提取 0.5 h, 共提取 3次。合并提取液 ,
减压回收乙醇得浸膏 。浸膏中加适量水 , 用石油醚萃取。除
去醚层 , 将水层用 100mL乙醚萃取 ,共萃取 3次 。合并乙醚
萃取液 , 减压回收乙醚得浸膏 , 用甲醇溶解浸膏并定容至 50
mL。取适量离心 ,上清液即为供试品液。
2　结果与讨论
2. 1　熊果酸的提取方法及溶剂的选择
　　用回流提取法 、索氏提取法 、浸泡 24 h后超声提取法进
行提取 , 比较熊果酸的提取量 , 结果表明超声提取法所得熊
果酸提取量最高。
　　分别以乙醚 、氯仿 、乙醇 、甲醇作提取溶剂 , 前两者提取
率略低于乙醇;熊果酸在甲醇中也有很好的溶解度。权衡提
取溶剂 、产品价格 、操作难易程度及溶剂性质 , 本试验选择乙
醇作为提取溶剂。
2. 2　流动相比例及检测波长的选择
　　选择甲醇和水的体积比为 95∶5时 , 熊果酸峰的保留时
间为 8.07 m in,供试品溶液在该保留时间附近有较多的峰;
调整其比例为 90∶10,且用甲酸调节 pH值至 3. 0时 , 熊果酸
的保留时间为 14.87m in, 能与杂质峰分开 ,峰形较好 。
　　熊果酸甲醇溶液的紫外吸收光谱扫描结果表明 , 其最大
吸收波长为 203 nm , 但甲醇在此波长下有很强的背景吸收。
为了减少干扰 ,选择 210 nm作为熊果酸的检测波长。
2. 3　线性关系
　　分别精密吸取系列浓度对照品溶液 , 每个样品进样 5
次 , 测定峰面积 , 并取平均值。以溶液的质量浓度 (C , g /L)
为横坐标 , 峰面积 (A )为纵坐标 , 计算得到回归方程 A =
2 278 005.25C +93 966. 16, r=0. 998 4,可见熊果酸质量浓度
为 0. 14 ～ 2.20 g /L时与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4　重复性及回收率试验
　　取同一批杜香嫩枝叶 3份 ,按照 “ 1. 4”节所述方法制备
样品溶液 , 按照确定的色谱条件每份样品重复进样 3次 , 取
平均值 , 3份样品测定结果的相对标准偏差为 1.17%。
　　精密称取已知熊果酸含量的杜香粉 3份 ,分别加入一定
量的对照品 , 按照 “ 1. 4”节制备样品液 ,测得熊果酸的平均回
收率为 100. 48%。
2. 5　样品测定
　　取干燥杜香粉 ,按 “ 1. 4”节制成样品溶液。 精密吸取样
品溶液 10 μL, 测定 3次 , 取峰面积平均值 , 以外标法计算样
品溶液中熊果酸的含量 , 结果显示杜香中熊果酸的含量为
1. 30%(以干重计)。使用本方法对多批杜香样品进行测定 ,
样品与对照品保留时间符合性很好 ,且其他组分的干扰较小
(见图 1)。
图 1　(a)对照品溶液及(b)供试品溶液的色谱图