全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2011，23:494-497
文章编号:1001-6880(2011)03-0494-04
收稿日期:2009-10-12 接受日期:2010-02-04
基金项目:创新药物研究开发技术平台建设(2009ZX09301-003)
* 通讯作者 Tel:86-10-57833286;E-mail:rlpan@ implad． ac． cn
HPLC法测定银州柴胡中五种皂苷的含量
符 颖，朱占军，黄 帅，斯建勇，魏建和，潘瑞乐*
中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193
摘 要:首次建立 HPLC法同时测定银州柴胡中柴胡皂苷 a、c、d、e和 f五种皂苷含量的方法。流动相为乙腈-水
梯度洗脱，柱子为 Hibar RT RP-18 (4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流速 1． 0 mL /min，柱温 30 ℃，检测波长 210 nm。
柴胡皂苷 a、c、d、e和 f的线性范围及相关系数分别为:21． 78 ～ 43． 56 μg (r = 0． 9993) ，3． 94 ～ 9． 85 μg (r = 0．
9994) ，20． 68 ～ 51． 70 μg (r = 0． 9998) ，1． 67 ～ 5． 57 μg (r = 0． 9997) ，1． 91 ～ 6． 70 μg (r = 0． 9992) ;柴胡皂苷 a、d
的加样回收率分别为 101． 5%和 98． 5%。该方法操作简便，结果准确，重现性好，为柴胡药材多指标质量分析方
法的建立和银州柴胡药用提供了参考依据。
关键词:HPLC;银州柴胡;柴胡皂苷 a;柴胡皂苷 c;柴胡皂苷 d;柴胡皂苷 e;柴胡皂苷 f
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
Determination of five saikosaponins in Bupleurum yinchowense by HPLC
FU Ying，ZHU Zhan-jun，HUANG Shuai，SI Jian-yong，WEI Jian-he，PAN Rui-le*
Institute of Medicinal Plant development，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 100193，China
Abstract:A method was established for determining five saikosaponins simultaneously，including saikosaponins a，c，d，e
and f in the root of Bupleurum yinchowense by HPLC for the first time． Separation was achieved by A Hibar RT C18
column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)using acetonitrile and water as the mobile phase with gradient elution at the f1ow
rate of 1． 0 mL /min，column temperature at 30 ℃ and the wavelength of UV detection was 210 nm． There were good lin-
ear correlations between the studied concentrations of the five saikosaponins and their chromatographic peak areas，and
the correlation coefficients were 0． 9992-0． 9998． The recoveries of saikosaponins a and d were 101． 5 and 98． 5%，re-
spectively． The RSD of precision and accuracy was less than 3% ． This method is simple，accurate and reproducible，and
also provides a reference for establishing the multiple-value quality control method for Radix Buplerui and the use of B．
yinchowense as a medicine．
Key words:HPLC;Bupleurum yinchowense;saikosaponin a;saikosaponin c;saikosaponin d;saikosaponin e;saikosapon-
inf
柴胡是一味疗效显著的常用中药，具有疏肝解
郁、升提中气之功能，主治感冒发热、寒热往来、胸胁
腹痛、黄疸肝炎及月经不调等。《中国药典》(2005
年版一部)收载柴胡原植物为伞形科植物北柴胡
Bupleurum chinense DC和狭叶柴胡 B． scorzonerifolium
Willd． 的干燥根［1］。由于柴胡临床用量大，而且主
要依靠采挖野生资源，因此，随着北柴胡和南柴胡资
源的减少，该属多种植物在产地当柴胡药用，造成商
品来源十分混杂，质量难以控制。现代研究表明柴
胡皂苷是柴胡的主要有效成分，具有解热、抗炎、抗
肿瘤、免疫调节等多种作用，目前多以柴胡皂苷 a、
柴胡皂苷 d的含量作为柴胡质量控制的指标，但不
同品种柴胡所含的柴胡皂苷 a、d 有很大差别，有些
甚至检测不出［2-10］。因此，建立科学客观反映柴胡
质量的评价标准已成为当前柴胡研究的热点，其中
多指标分析方法是主要的研究模式。
银州柴胡 B． yinchowense Shan et Y． Li广泛分布
于甘肃、青海等西北省区，是当地柴胡的主流品种，
但银州柴胡的化学成分和质量分析未见报道。本文
采用从银洲柴胡中分离得到的 5 个柴胡皂苷单体作
为对照品，对甘肃产 10 批银州柴胡含量进行测定，
为柴胡多指标质量分析方法的建立和银州柴胡药用
提供了参考依据。
DOI:10.16333/j.1001-6880.2011.03.023
1 实验方法
1． 1 仪器与试剂
Waters系列高效液相色谱仪，Waters 600 con-
troller，Waters 600 pump，Waters 2487 dual absorbance
detector，Waters Empower 工作站。电子分析天平
(上海天平仪器厂) ，KQ5200B 型超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司) ，乙睛、甲醇为色谱纯
(Fisher公司)。Wahaha纯净水(市售) ，提取用甲醇
为分析纯(北京化工厂)。
柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d对照品均由中国药品
生物制品检定所提供(批号分别为:110777-200406
和 110778-200505) ，柴胡皂苷 c、e 和 f 为本实验室
自制，经 IR、MS 和 NMR 等光谱鉴定结构，HPLC 纯
度检测均大于 98%。银州柴胡样品从甘肃不同产
地收集，经作者鉴定为植物银州柴胡 B． yinchowense
的干燥根。
1． 2 色谱条件
色谱柱:Hibar RT RP-18 (4． 6 mm ×250 mm，5
μm) ;保护柱:SecurityGuard(美国 Phenomenex 公
司) ;流动相:乙腈-水梯度洗脱，洗脱程序见表 1
(Table 1) ;流速:1． 0 mL /min;柱温:30 ℃;检测波
长:210 nm;进样量:20 μL。在此条件下，五种柴胡
皂苷分离良好。
表 1 乙腈-水洗脱梯度表
Table 1 Elution program
时间(Time，min) 0 5 15 40 60 65 75 80 90
乙腈(MeCN，%) 5 10 15 33 67 90 90 5 5
水(H2O，%) 95 90 85 67 33 10 10 95 95
1． 3 对照品溶液制备
精密称定柴胡皂苷 a 21. 78 mg、柴胡皂苷 c
10. 37 mg、柴胡皂苷 d 20. 68 mg、柴胡皂苷 e 5. 99
mg和柴胡皂苷 f 10. 19 mg，分别置于 2 mL 容量瓶
中，用色谱甲醇定容得对照品原液。分别吸取不同
体积的对照品原液于 1 mL容量瓶中，用色谱甲醇稀
释定容，即得系列混合对照品稀释溶液，其中柴胡皂
苷 a 的浓度依次为 1. 089，1. 361，1. 633，1. 905，
2. 178 mg /mL ，柴胡皂苷 c 为 0. 197，0. 271，0. 345，
0. 419，0. 493 mg /mL，柴胡皂苷 d 为 1. 034，1. 422，
1. 810，2. 198，2. 585 mg /mL，柴胡皂苷 e 为 0. 0835，
0. 132，0. 181，0. 230，0. 279 mg /mL，柴胡皂苷 f 为
0. 0955，0. 155，0. 215，0. 275，0. 335 mg /mL。
1． 4 供试品溶液制备
取柴胡药材粉末(40 目)约 1 g，精密称定，置
100 mL 三角瓶中，精确加入 5%氨水甲醇溶液 50
mL，密闭，于 30 ℃水温超声提取 0． 5 h，过滤，滤渣
用甲醇润洗两次，每次 10 mL，合并滤液，回收至干，
残渣用色谱甲醇定容于 5 mL 容量瓶，摇匀，微孔滤
膜过滤(0． 45 μm) ，弃初滤液，取续滤液，即得供试
品溶液。
1． 5 测定方法
分别精密吸取对照品稀释溶液和供试品溶液各
20 μL，注入液相色谱仪，记录 90 min 的色谱图，外
标法定量。
2 结果与讨论
2． 1 检测波长选择
柴胡皂苷类成分无紫外吸收，仅在末端 203 nm
处有最大吸收波长，但在该波长基线噪音大，梯度洗
脱时基线漂移严重，若选择 210 nm 作为检测波长，
乙腈 －水系统作为流动相，基线噪音和漂移均较小，
且色谱图与 203 nm 比较无显著差别，因此，选择
210 nm为检测波长。
2． 2 样品制备方法的确定
由于柴胡皂苷 a、d在提取过程中受酚类或酸性
成分的影响，易使环氧醚键开环，转化为柴胡皂苷
b1、b2，因而通常采用弱碱性溶剂提取原生柴胡皂苷
a、c、d。本研究考察了甲醇、30%甲醇、60%甲醇作
为提取溶剂(三种提取溶剂中均加入 5% 氨水) ，
HPLC 测定结果表明五种皂苷含量无显著性差异，
但用 30%甲醇和 60%甲醇提取时杂质过多，定容困
难，并且对色谱柱损害大，故选 5%氨水甲醇作为提
取溶剂。
以 5%氨水甲醇为提取溶剂，考察了加热回流
提取 1 h 、30 ℃水温超声提取 0． 5 h 和 1 h三种提取
方法，HPLC 测定结果表明五种皂苷含量无明显差
异，故选用 30 ℃水温超声提取 0． 5 h 作为提取方
法。
2． 3 方法学考察
594Vol. 23 符 颖等:HPLC法测定银州柴胡中五种皂苷的含量
2． 3． 1 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液 20 μL，分别于 0、1、
2、4、8、12、24 h 进样，记录 HPLC 色谱图，柴胡皂苷
a、柴胡皂苷 c、柴胡皂苷 d、柴胡皂苷 e和柴胡皂苷 f
的色谱峰的相对峰面积 RSD 值分别为 1． 24%、1．
19%、1． 05%、1． 29%、1． 34%，均小于 2%，表明样
品在 24 h内稳定性良好。
2． 3． 2 精密度考察
精密吸取同一供试品溶液 20 μL，连续重复进
样 6 次，记录五种柴胡皂苷的峰面积，其 RSD 值分
别为 0． 82%、0． 57%、0． 71%、0． 68%、0． 92%，表明
仪器的精密度良好。
2． 3． 3 线性关系考察
精密吸取对照品稀释溶液 20 μL 注入 HPLC
仪，记录峰面积，以对照品质量为横坐标，峰面积值
为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程分别为:
柴胡皂苷 a:Y = 424446X-2177190． 7，r = 0． 9993
柴胡皂苷 c:Y = 333923X-178898． 8，r = 0． 9994
柴胡皂苷 d:Y = 396098X-1621571． 8，r = 0． 9998
柴胡皂苷 e:Y = 366247X-121553． 3，r = 0． 9997
柴胡皂苷 f :Y = 314689X-108767． 8，r = 0． 9992
结果表明柴胡皂苷 a 在 21． 78 ～ 43． 56 μg，柴胡
皂苷 c 在 3． 94 ～ 9． 85 μg，柴胡皂苷 d 在 20． 68 ～
51． 70 μg，柴胡皂苷 e在 1． 67 ～ 5． 57 μg，柴胡皂苷 f
在 1． 91 ～ 6． 70 μg范围内对照品含量与峰面积呈良
好的线性关系。
2． 3． 4 重复性考察
取同一样品 5 份，按供试品溶液制备方法，处理
样品，记录色谱图，各主要色谱峰的相对峰面积
RSD 分别为:2． 94%、2． 89%、2． 87%、3． 51%、
3. 95%，方法重复性良好。
2． 3． 5 回收率试验
精密称取已知含量的柴胡样品共 6 份，每份
0. 25 g，分别加入柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 对照品
原液各 100 μL，按供试品溶液制备方法处理，测定
柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d 的含量，计算二者平均回
收率分别为 101． 5% (RSD 为 2． 33%)和 98． 5%
(RSD为 2． 56%)。由于柴胡皂苷 c、e、f 对照品量
比较少，未进行回收率试验研究。
2． 4 样品测定
根据测定方法对 10 批银州柴胡进行含量测定，
对照品及样品的色谱图见附图 1 及图 2，测定结果
见 Table 2(SSa、SSb、SSc、SSe 及 SSf 分别为柴胡皂
苷 a、b、c、e和 f)。
694 天然产物研究与开发 Vol. 23
表 2 银州柴胡中五种柴胡皂苷的含量(%)
Table 2 The contents of five saponins in root of B． yinchowense
样品编号 Sample No． SSa SSc SSd SSe SSf SS(a + c + d)
Pc96 0． 81 0． 22 0． 95 0． 10 0． 14 1． 98
Pc97 0． 72 0． 17 0． 84 0． 11 0． 11 1． 73
Pc98 0． 66 0． 22 0． 92 0． 07 0． 14 1． 80
Pc99 0． 72 0． 24 1． 05 0． 09 0． 18 2． 01
Pc100 0． 62 0． 18 0． 82 0． 09 0． 13 1． 62
Pc101 0． 57 0． 15 0． 68 0． 06 0． 10 1． 40
Pc102 0． 79 0． 22 1． 09 0． 09 0． 17 2． 10
Pc103 0． 69 0． 19 0． 89 0． 08 0． 15 1． 77
Pc104 0． 69 0． 19 0． 89 0． 08 0． 15 1． 77
pc105 0． 77 0． 20 1． 04 0． 09 0． 12 2． 01
3 结论
首次建立了 HPLC法同时测定五种柴胡皂苷含
量的分析方法，并用该方法对 10 批银州柴胡中五种
皂苷的含量进行了测定，结果表明银州柴胡中柴胡
皂苷 a、c和 d的含量较高，而柴胡皂苷 e和 f的含量
较低。本研究为建立柴胡药材多指标质量分析方法
及银州柴胡药用提供了参考依据。
从表 2 中可知银州柴胡中柴胡皂苷 a、c、和 d
的含量之和为 1． 40% ～ 2． 01%，与文献［8］报道的不
同产地北柴胡中这三种皂苷的含量之和接近。从柴
胡皂苷 a、c 和 d 含量这一指标，银州柴胡与北柴胡
相似，但银州柴胡能否作为法定药材，尚需对其药
效、毒性等多学科综合研究。
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