全 文 ：满山红油液相色谱指纹特征的分析
方洪壮1，李百强2，方芳1，崔晓彪3，高旭光2
(1．佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007;2．黑龙江省药品不良反应监测中心，黑龙江 哈尔滨 150076;
3．黑龙江龙桂制药有限公司，黑龙江 绥化 152051)
摘 要:目的:比较分析满山红油 HPLC指纹特征，为满山红油的质量控制提供基础性研究资料。方法:
采用 Hypersil C18色谱柱，以乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速:1. 0mL·min
－1，检测
波长:210nm，测定了 19 批不同来源满山红油的 HPLC － UV 指纹图谱。用化学计量学的聚类分析和主
成分分析方法结合相似度，比较分析全息指纹特征。结果:不同批次的满山红油按其指纹特征可分成两
类。结论:牻牛儿酮峰对满山红油指纹特征类别的划分与指纹特征的相关性影响极大。
关键词:满山红油;指纹图谱;化学计量学;牻牛儿酮
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2010)06 － 0068 － 03
Fingerprint Analysis of Farrerol Rhododendri Daurici Liquid Chromatogram
FANG Hong － zhuang1，LI Bai － qiang2，FANG Fang1，CUI Xiao － biao3，GAO Xu － guang2
(1． Jiamusi University，Jiamusi 154007，China;2． Heilongjiang Adverse Drug Reaction Monitoring
Center，Harbin 150076，China;3． Longgui Pharmaceutical Co． Lid，Suihua 152051，China)
Abstract:Objective:Comparative analysis of chromatographic fingerprint of Farrerol Rhododendri daurici in
order to provide basis research material for the quality control of the volatile oil． Methods:19 batches of sam-
ples were detected at 210 nm and separated on a Hypersil C18 column with a gradient elution of acetonitrile and
0. 1% aqueous phosphoric acid at a flow rate of 1. 01mL·min －1 ． The multi － data fingerprint was analyzed by
the two Chemometrics methods，cluster analysis and principal components analysis，combined with similarity．
Result:The study showed that the samples can be divided to into two classes according to the HPLC profiles．
Conclusion:The classification and similarity of chromatographic fingerprint were obviously affected by the ger-
macrone peak in the chromatogram of Farrerol Rhododendri daurici．
Key words:Farrerol Rhododendri daurici;Fingerprint;Chemometrics;Germacrone
基金项目:黑龙江省中医药重点科研项目(ZHY06 － Z43)
作者简介:方洪壮(1956 －) ，男，教授，硕士研究生导师，主要研究方向:
药物分析。
通讯作者:李百强(1966 －) ，男，副主任药师，主要研究方向:药品检验
和药品不良反应监测。
收稿日期:2010 － 03 － 24
修回日期:2010 － 04 － 15
杜鹃花科植物兴安杜鹃(Rhododendron dauricum
L．)广泛分布于大小兴安岭，从其干燥叶(中药满山
红)中经水蒸气提取的挥发油 －满山红油，具有止咳、
祛痰之功效，常用于治疗急、慢性气管炎［1］，临床上现
有胶丸剂及多种复方制剂。满山红油含有复杂的化学
成分［2］，有必要采用中药指纹图谱来鉴定其真伪与优
劣及控制相关制剂产品的质量。近年来，化学计量学
这门借助于计算机技术解析复杂系统的新兴学科，已
被用于中药这一复杂混合体系的质量控制及色谱指纹
图谱的信息提取和处理［3］。本文获取了满山红油的
液相色谱指纹特征，并利用化学计量学中的聚类分析
和主成分分析两种方法，结合指纹图谱的相关系数评
价指标，比较分析了黑龙江省 19 批满山红挥发油的指
纹图谱全部信息，为满山红油的药学相关研究提供
信息。
1 仪器及材料
高效液相色谱仪(Agilent 1100 系列) :四元泵，二
极管阵列紫外检测器，色谱工作站;牻牛儿酮对照品
(中国药品生物制品检定所 111665 － 20060508)。19
批满山红样品 2006 年采集于黑龙江省不同地区，经佳
木斯大学王良信教授鉴定为兴安杜鹃(Rhododendron
dauricum L) ;19 批样品中，4 ～ 8 号来源同一地点，采
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集时间为 6 ～ 10 月，其它不同采集地的样品采集时间
均为 9 月份(见表 1) ;乙腈(色谱纯) ;其它试剂均为分
析纯。
表 1 满山红样品来源
编号(采集月份) 采集地 编号(采集月份) 采集地
01(9)
02(9)
03(9)
04(6)
05(7)
06(8)
07(9)
08(10)
09(9)
10(9)
伊敏林场
翠岗林场
呼中林业局
伊春浩良河
伊春浩良河
伊春浩良河
伊春浩良河
伊春浩良河
汤源林业局
方正林业局
11(9)
12(9)
13(9)
14(9)
15(9)
16(9)
17(9)
18(9)
19(9)
七台河林业局
桦南林业局
清河林业局
朗乡林业局
亮子河林场
绥化林业局
汤旺河林业局
伊春仙翁山
佳木斯四丰山
2 方法与结果
2. 1 挥发油的提取
满山红经粉碎，过筛。称取粗粉 100g ，置 2000mL
圆底烧瓶中，加 10 倍水浸泡 12h。照挥发油测定法
(2005 版药典一部附录 XD) ，提取 8h 后测定，所得挥
发油为浅黄绿色至黄棕色，不同来源满山红油提取率
在 0. 4% ～2. 0%之间。
2. 2 HPLC测定条件
色谱柱:Hypersil ODS C18分析柱(5μm，250mm ×
4. 6mm) ;Hypersil Uniphse C18保护柱(5μm，12. 5mm ×
4. 6mm) ;流动相:体积分数为 1‰磷酸水溶液(A) ，乙
腈(B) ，洗脱梯度(见表 2) ;检测波长:210nm，柱温:室
温;流速:1. 0mL·min －1;进样体积:20μL。
表 2 梯度洗脱条件
T(min) A(%) B(%)
0
15
40
60
61
70
35
35
10
10
0
0
65
65
90
90
100
100
2. 3 指纹图谱建立
2. 3. 1 图谱获取 精密量取满山红油适量，用乙腈
溶解并稀释 1000 倍，摇匀，按设定条件测定，记录
70min色谱。另取牻牛儿酮对照液(50. 50μg·mL －1)
相同条件进样洗脱，记录相应色谱。根据对照品牻牛
儿酮色谱峰位标记满山红油图谱中牻牛儿酮峰。其中
5 个批号供试品色谱图如图 1，保留时间 20. 60 min 处
的色谱峰 s为牻牛儿酮峰。
2. 3. 2 方法验证 取同一批次供试品(17 号样品挥
发性油) ，分别在 0、4、8、12、24、36h不同时间点进行检
图 1 满山红油 HPLC图
a． 17 号 b． 16 号 c． 10 号 d． 18 号 e． 11 号 s．牻牛儿酮峰
测，进行稳定性考察。0h 后的各时间点的色谱与 0h
色谱的相关系数分别为:0. 9976、0. 9964、0. 9892、
0. 9881、0. 9787，指纹图谱在所考察的时间内有很好的
稳定性。另取相同供试品，连续 5 次进样，考察方法精
密度。结果，各进样色谱与其均值的相关系数均大于
0. 9950，在测定的条件下色谱有良好的精密度。取 17
号的满山红，按上述条件平行提取和测定 5 次，考察方
法的重复性。结果，各次测定的色谱与其均值的相关
系数分别为 0. 9970、0. 9946、0. 9915、0. 9972、0. 9850，
提取测定方法有很好的重复性。
2. 4 指纹特征分析
表 3 满山红油供试品间的相关系数(× 100)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
93 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
32 45 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
79 89 54 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
76 87 62 96 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
63 74 75 81 87 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
48 64 87 81 86 89 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
86 91 54 85 87 77 71 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
90 95 49 92 94 79 71 95 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
4 8 11 8 8 9 12 10 9 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0
57 50 26 45 41 44 27 42 46 3 100 0 0 0 0 0 0 0 0
55 70 73 86 88 89 91 72 76 21 40 100 0 0 0 0 0 0 0
60 68 74 69 69 81 76 65 65 35 44 72 100 0 0 0 0 0 0
80 88 68 85 85 82 79 89 86 12 59 79 77 100 0 0 0 0 0
79 87 64 93 92 82 84 91 91 9 38 86 67 88 100 0 0 0 0
24 30 33 29 30 31 36 35 30 93 12 41 55 39 34 100 0 0 0
48 62 65 85 86 80 85 67 72 17 36 95 61 70 83 35 100 0 0
10 15 15 15 15 15 17 16 16 98 7 26 41 17 14 91 23 100 0
94 97 47 88 84 71 64 94 94 6 46 67 66 89 90 31 61 12 100
2. 4. 1 相似性比较 先对色谱漂移的部分进行线性
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背景扣除，而后以一色谱为标准，进行保留时间的校
正，完成数据的预处理。将每一样品的色谱数据作为
一矢量，构造色谱全部信息矩阵，计算各矢量间各种组
合的相关系数，结果见表 3。由表 3 可知，10 号、18 号
样品与其它样品的相似程度极低，但两样品之间相似
度很高。
2. 4. 2 聚类分析 对经预处理的全部数据信息，采用
标准欧氏距离计算样品间的相似性近邻矩阵 X，用类
平均法计算样品的同现矩阵 Y ，由 X 和 Y 计算得同
现相关系数为 0. 9479［4］。进行系统聚类，绘制系统聚
类树图，结果见图 2。由图 2 的分析可知，满山红油样
品的全部指纹特征可分为两类，即 10 号、18 号样品可
归为一类，其余的 17 个样品可归为另一类，两类间最
接近的样品为 16 号。
图 2 满山红油的层次聚类树图
2. 4. 3 主成分分析 将经预处理的色谱数据矩阵奇
异值分解后，利用特征值信息计算主成分方差贡献，第
1 和第 2 个主成分分解的方差分别为 68. 88% 及
21. 92%，接近总方差的 90%。取载荷矩阵前两个主
成分绘制投影图，结果见图 3。图 3 显示，19 个供试品
可分成两类，其中 10 与 18 号明显组成同一类，去除
10、18、16 号余下的 16 个供试品可视为第 2 类，16 号
供试品即可归为第 1 类，也可归作第 2 类。主成分分
析的结果同聚类分析的结果基本一致。
图 3 满山红油主成分投影图
2. 4. 4 共有模式分析 以 1、3、7、9、12、13、14、15、
17、19 号 10 个供试品的全部信息，按均值方式建立指
纹图谱共有模式，各供试品与共有模式的相似度分别
为 0. 7674、0. 7711、0. 9102、0. 9001、0. 9191、0. 8271、
0. 9288、0. 9529、0. 8611、0. 8740。余下的 9 个供试品
(2、4、5、6、8、10、11、16、18 号)与共有模式的相似度分
别 为，0. 8708、0. 9296、0. 9423、0. 9101、0. 8911、
0. 1592、0. 6710、0. 4119、0. 2222。由相似度计算结果
可知，10 号、18 号供试品与共有模式的相似度极低。
3 讨论
3. 1 聚类分析、主成分分析及相似度比较的结果均表
明，满山红油的指纹特征可分作两类，19 个供试品大
部分可归为一类，仅 10 号与 18 号组成另一类，16 号
介于两类之间，究其原因，是来自于供试品中牻牛儿酮
的含量。从图 1 可见，10 号、18 号供试品的牻牛儿酮
峰强度极高，16 号供试品的牻牛儿酮峰强度虽不及
10、18 号，但远高于其它供试品。
3. 2 化学计量学及相似性分析的结果还表明，同一地
点不同月份采集的满山红油在色谱指纹特征上差别不
大，这点与满山红药材可夏秋两季采集的药典规定相
吻合。供试品分析结果中，第一类中的 11 号样品较异
常，从其色谱特征中(图 1)可知，11 号供试品 36. 7min
处的色谱峰较其它供试品明显增高。
3. 3 牻牛儿酮一直被认为满山红油中的有效成分，但
实验中所涉及的满山红样品，牻牛儿酮高含量的仅占
少数。有必要结合色谱指纹特征，对满山红油进行深
入的药学研究。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］. 北京:化学工业出
版社，2005:283.
［2］ 中国医学科学院药物研究所 . 中草药现代化研究［M］. 北京:北
京医科大学与协和医科大学联合出版社，1996:327.
［3］ 谢培山 . 中药色谱指纹图谱［M］. 北京:人民卫生出版社，2005:
144.
［4］ Theodoridis S，Koutroumbas K. 模式识别［M］. 英文版．第 2 版．北
京:机械工业出版社，2003:
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