全 文 ：HPLC法测定烟台柴胡中芦丁和槲皮素的含量
陈海霞1，刘向红2* ，梁宏臣3
(1．山东大学药学院，山东济南 250012;2．山东大学齐鲁医院，山东济南 250012;3．海阳市中医院，山东海阳 265100)
摘要 ［目的］采用高效液相色谱测定烟台柴胡全草提取物中芦丁和槲皮素的含量。［方法］色谱柱为 Agilent C18 ( 250 mm × 4． 6 mm，5
μm)，流动相为乙腈 －水(含浓度 0． 1%磷酸)，采用梯度洗脱方法，流速为 1． 0 ml /min;检测波长为 360 nm。［结果］平均回收率分别为
100． 47%和 99． 50%，RSD分别为 1． 34%和 0． 41%。烟台柴胡全草中的芦丁和槲皮素的平均含量分别为 83． 00 和 102． 68 μg /g。［结论］
该方法准确可靠，可用于测定烟台柴胡全草中的芦丁和槲皮素的含量。
关键词 HPLC;梯度洗脱;芦丁和槲皮素;烟台柴胡［BupLeururn chinense DC． f． vanheurckii( Muell． － Arg． ) Shan et Y． Li］
中图分类号 S567． 7 + 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 08 －03382 －02
HPLC Determination of Rutin and Quercetin Content in Bupleururn chinense
CHEN Hai-xia et al ( Pharmaceutical Sciences School of Shandong University，Jinan，Shandong 250012)
Abstract ［Objective］To determine rutin and quercetin content in the whole plant of Bupleururn chinense by using HPLC method． ［Method］
Agilent C18 column ( 250 mm ×4． 6 mm，5 μm) was applied with a mobile phase of acetonitrile-0． 1% phosphoric acid solution，gradient elution
was selected with the flow rate of 1． 0 ml /min，the UV detector was set at 360 nm． ［Result］ The average recovery rate are 100． 47% and
99． 50%，RSD are 1． 34% and 0． 41% ． The average content of rutin and quercetin in the whole plant of BupLeururn chinense are 83． 00 and
102． 68 μg /g． ［Conclusion］The method is fast，accurate and reliable． It is suitable for content determination of rutin and quercetin in the whole
plant of Bupleururn chinense．
Key words HPLC; Gradient elute; Rutin and quercetin; Bupleururn chinense
基金项目 山东省中医药科技发展项目( 编号 2011-202) 。
作者简介 陈海霞( 1965 － ) ，女，山东章丘人，主管药师，从事药物成分
分析研究。* 通讯作者，主任药师，从事药物成分分析研
究，E-mail: wenjun1965@ 163． com。
收稿日期 2013-03-20
柴胡(RADIX BUPLEURI)为清虚热中药，具有解表、退
热、疏肝解郁和升举阳气的功效，用于感冒发热、寒热往来、
疟疾、肝郁气滞、胸肋胀痛、脱肛、子宫脱落和月经不调等症。
2005年版《中国药典》规定柴胡为伞形科植物柴胡(北柴胡)
(Bupleurm chinense DC． 或)狭叶柴胡(南柴胡) (Bupleurm
scorzonerifilium Wild)的干燥根［1］。在我国，柴胡属植物有 40
种，17个变种，主要生长在辽宁、甘肃、河北、河南、山东、湖
北、江苏、四川和安徽等地［2］。烟台柴胡［BupLeururn chinense
DC． f． vanheurckii(Muell． － Arg．)Shan et Y． Li］为山东特有
植物，分布于山东烟台的牙山、艾山、昆嵛山等地，生于海拔
200 ～950 m的山坡草地。民间常用其全草煮水治疗感冒，效
果明显。笔者采用高效液相色谱法对烟台柴胡中所含芦丁
和槲皮素的含量进行测定，以期为烟台柴胡的开发利用和药
材质量控制提供参考依据，为扩大柴胡新药源建立基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。烟台柴胡，采自烟台市昆嵛山，时间为
2010 年 8 月 25 日，经山东省中医药高等专科学校药学系主
任张钦德教授鉴定为伞形科植物烟台柴胡［Bupleurum
chinense DC． f． vanheurckii(Muell． － Arg．)Shan et Y． Li］。
1． 1． 2 主要仪器。Agilent Technologies 1200 Series型高效液
相色谱仪，DAD检测器，SK5200H型超声波清洗器和 DZTW
型电热套，均购自北京市永光明医疗仪器厂;CP2250 型分析
天平，购自奥豪斯国际贸易有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁对照品(含量 90． 5%)和槲皮素对照
品(含量 96． 5%) ，由中国食品药品检定研究院提供;乙腈为
色谱纯，水为哇哈哈纯净水，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件。Agilent C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)色
谱柱;流动相为乙腈 －水(含浓度 0． 1%磷酸) ，流速为 1． 0
ml /min;检测波长为 360 nm;柱温为 25 ℃;进样量为 20 μl。
梯度洗脱条件见表 1。
表 1 梯度洗脱条件
时间∥min A(乙腈)∥% B(水 －浓度 0． 1%磷酸)∥%
0 82 18
15． 00 82 18
20． 00 70 30
30． 00 70 30
35． 00 5 95
40． 00 82 18
1． 2． 2 溶液的制备。(1)对照品溶液的制备。分别准确称
取 0． 020 0 g芦丁和槲皮素标准品，置 100 ml容量瓶中，用无
水甲醇溶解并定容，即得。(2)供试品溶液的制备。精密称
取药材粗粉(过二号筛)5． 000 g，置 250 ml 圆底烧瓶中，加
入浓度 60%乙醇 100 ml，回流提取 1 h，趁热过滤，将滤液浓
缩挥干，将浓缩物甲醇复溶后置 10 ml容量瓶中，用无水甲醇
定容，即得。
1． 2． 3 方法学考察。(1)系统适应性考察。取供试品溶液
和对照品溶液适量，在上述色谱条件下进行测定，记录色谱
图，考察系统适应性。(2)线性关系的考察。分别精密吸取
对照品溶液(200 μg /ml)0． 5、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0和 5． 0 ml，置
10 ml容量瓶中，用无水甲醇定容，分别得到 10、20、40、60、80
和 100 μg /ml的系列标准溶液，于 0． 22 μm微孔滤膜过滤后
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(8):3382 － 3383，3479
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.08.088
进样，按拟定色谱条件测定其峰面积。以芦丁和槲皮素的浓
度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，计算
回归方程。(3)精密度试验。取混合对照品溶液(60 μg /ml)
按上述色谱条件，连续进样 5 次，测定芦丁和槲皮素的峰面
积，计算其 RSD。(4)稳定性试验。精密吸取同一供试品溶
液，分别在 0、2、4、6、8、10和 12 h测定其峰面积，计算芦丁和
槲皮素的峰面积和 RSD。(5)重复性试验。取同一样品 5
份，按上述方法制备供试品溶液，进样测定，计算芦丁和槲皮
素的峰面积的 RSD。(6)加样回收率试验。精密称取已知含
量的同一样品(芦丁和槲皮素的含量分别为 83． 48和 103． 06
μg /g)5． 000 g，共 6份，分别精密加入混合对照品储备液(40
μg /g)各 10 ml，按上述供试品溶液的制备方法操作，计算芦
丁和槲皮素的平均回收率和 RSD。
1． 2． 4 样品的含量测定。取对照品溶液与供试品溶液，各
20 μl，进样，测定 3份烟台柴胡样品中芦丁和槲皮素的含量。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察 (1)系统适应性考察。图 1 ～ 2 表明，供
试品溶液和对照品溶液在相同的时间有对应的吸收峰，各峰
之间的分离度良好，表明系统适应性良好。(2)线性关系的
考察。计算得芦丁的线性回归方程为:Y = 6． 235X +
12． 608，R = 0． 999 9;槲皮素的线性回归方程为:Y =
20． 424 X +26． 752，R =0． 999 7。试验结果表明，在 10 ～ 100
μg /ml范围内，芦丁和槲皮素浓度与峰面积的线性关系良
好。(3)精密度试验。计算得芦丁和槲皮素峰面积的 RSD
图 1 混合对照品图谱
注:1为芦丁，2为槲皮素。
图 2 供试品图谱
分别为0． 68%和 0． 78%，说明该方法精密度良好。(4)稳定
性试验。计算得芦丁和槲皮素的峰面积平均值分别为
267． 64和1 075． 96，RSD分别为 1． 67%和 1． 07(n = 7) ，表明
供试品溶液在 12 h 内相对稳定。(5)重复性试验。计算得
芦丁和槲皮素的峰面积 RSD分别为 1． 41%和 0． 86%，表明
该方法的重复性较好。(6)加样回收率试验。计算得芦丁和
槲皮素的平均回收率分别为 100． 47%和 99． 50%，RSD 分别
为 1． 34%和 0． 41%，表明该方法准确可靠，可用于测定烟台
柴胡全草中的芦丁和槲皮素的含量。
2． 2 样品的含量测定 由表 2 可知，烟台柴胡全草中的芦
丁和槲皮素的平均含量分别为 83． 00 和 102． 68 μg /g，RSD
分别为 1． 61%和 1． 32%。
表 2 样品测定结果
样品 编号
含量
μg /g
平均含量
μg /g
RSD
%
芦丁 1 84． 49
2 82． 57 83． 00 1． 61
3 81． 93
槲皮素 1 103． 82
2 103． 04 102． 68 1． 32
3 101． 18
3 结论与讨论
试验分别考察了提取方法、提取溶剂，料液比，提取时间
及粉碎粒度等因素对烟台柴胡中芦丁和槲皮素含量的影响。
(1)提取方法。试验比较了超声提取、热回流提取 2 种
提取方法对芦丁和槲皮素的提取效率的影响。试验结果表
明，热回流提取测得芦丁和槲皮素的含量明显高于超声处理
所得含量，故采用热回流提取的方法。但热回流提取也有不
足之处，与超声提取相比，提取出的杂志含量明显增大，给目
标成分的检测带来了一定的困难。杂质的提取量还与烟台
柴胡全草的粉碎程度有关，在考察粉碎粒度时，发现粉碎的
粒度越小，提取出的杂质成分越多，而目标成分的含量提高
不是很大，故研究将烟台柴胡全草粉碎过 2号筛即可。
(2)提取溶剂。试验分别考察了浓度 50%、60%、70%、
80%和 100%乙醇回流提取对芦丁和槲皮素提取率的影响，
发现乙醇浓度为 60%时两者的提取率最大;进一步增大浓
度，提取率反而下降，这可能与黄酮类化合物的极性有关［3］。
(3)料液比。试验分别按料液比为 1∶ 10、1∶ 20 和 1∶ 30
(W/V，g /ml)依次加入浓度 60%的乙醇进行回流提取，结果
发现料液比为 1∶ 20时提取率较理想，当料液比增加到 1∶ 30
时，提取率变化不明显，所以试验选用的料液比 1∶ 20。
(4)提取时间。按料液比为 1∶ 20 依次加入浓度 60%的
乙醇浸泡 30 min，分别回流提取 30、60和 90 min，发现 60 min
时芦丁和槲皮素的提取率达最大值，90 min时芦丁的提取率
略有降低，而槲皮素的提取率略有提高，这可能与芦丁水解
为槲皮素有关。
(5)流动相的选择。无水甲醇 －水系统不能使样品中的
芦丁和槲皮素完全分离，故选择乙腈 －水系统，此系统可以
使供试品中的芦丁和槲皮素完全分离，但是等度洗脱时槲皮
素保留时间过长，故改用梯度洗脱程序，获得了较为合适的
( 下转第 3479 页)
383341 卷 8 期 陈海霞等 HPLC法测定烟台柴胡中芦丁和槲皮素的含量
图 3 中间高两侧低型
2． 2． 4 综合型。滨水区绿地的断面处理也可以采用多种形
式的结合，因地制宜，灵活运用，以取得更好的景观效果。
3 护岸模式
驳岸是一面临水的挡土墙，是支持和防止坍塌的水工构
筑物。护坡可保护坡面(一般在自然安息角以内) ，防止雨水
径流冲刷及风浪拍击对岸坡的破坏。当岸边土地狭窄时，多
采用驳岸型护岸［3］。驳岸与护坡是水和陆域的交接线。城
市水体要求有稳定、美观的水岸以维持陆地和水面的一定比
例，防止陆地被淹没或水岸坍塌而扩大水面。同时作为水景
组成的驳岸与护坡，直接影响整个景观效果，在设计时可遵
循实用、经济、美观的原则。由于受到各种因素，如防洪、防
汛的制约，城市滨水区绿地与园林内人造水景的驳岸与护坡
处理方式会有很大不同，一般有以下几种模式:直立式、倾斜
式、台阶式［4］。
3． 1 直立式 直立式适合这种岸地的地方有 3 种情况:水
面和陆地的平面差距很大;水面涨落高差较大的水域;建筑
面积受限，没有充分的空间而不得已建的护岸。如上海浦东
滨江大道、浦西外滩、苏州河以及北京的坝河，采用的就是这
种护岸模式(图 4)。
图 4 直立式护岸
3． 2 倾斜式 倾斜式护岸比较容易使人接触到水面，有较
高的亲水性，从安全方面来讲也比较理想。适用这种设计
的地方需有足够的空间容纳护岸，随倾斜度的不同及表面堆
砌方法的不同可形成不同的景观效果，同时有利于营建生态
驳岸，如块石护坡、地被护坡、地被与块石结合的护坡等
(图 5)。
图 5 倾斜式护岸
3． 3 台阶式 台阶式通常只在小范围内使用，使人很容易
接触到水，并可坐在台阶上眺望水面，是亲水性最高的护岸，
不足之处是容易给人一种人工性的感觉。松花江哈尔滨段
滨洲铁路大桥至松花江公路大桥段采用的就是这种护岸模
式(图 6)。
图 6 台阶式护岸
4 结语
城市滨水区绿地生态空间的构建模式包括竖向模式和
护岸模式。竖向设计和护岸设计应在满足防洪及交通安全
的前提下，充分发挥滨水区的资源优势，展现其亲水性的独
特魅力，因地制宜，营造景观丰富、层次多变的滨水区竖向模
式和护岸模式。
参考文献
［1］宗跃光．生态空间的研究方法 －现代生态学透视［M］．北京:科学出版
社，1990:1．
［2］张宇星．城镇生态空间理论初探［J］．城市规划，1995，19(2):17 －19．
［3］毛培林，李雷．水景设计［M］．北京:中国林业出版社，1995:146．
［4］镇列评．汉口沿江滨水区亲水空间研究［J］．华中建筑，2000，18(3):95
－99．
［5］何红芸，李占祥．延安生态绿地空间体系构建探析［J］．安徽农业科学，
2012，40(14):8181 －8183．
［6］赵婷婷，何娇，唐凯，等．长株潭城市群生态空间结构优化研究［J］．内
蒙古农业科技，2012(1):
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
88 －90．
(上接第 3383 页)
保留时间。加入适量的酸可以抑制芦丁和槲皮素色谱峰的
拖尾现象［4］，故在流动相中加入浓度 0． 1%的磷酸，峰形得到
较大的改善，获得了较好的分离效果。用高效液相色谱法测
定烟台柴胡中芦丁和槲皮素的含量是切实可行的。
参考文献
［1］国家药典委员会．中国药典． 2005 一部［S］．北京:化学工业出版社，
2005:263．
［2］孙云，朱燕．柴胡古今应用概述［J］．山东中医学院学报，1994，18(6):
421 －423．
［3］王海宁，谢印芝，樊飞跃，等．微波辅助提取竹叶柴胡总黄酮的正交实
验筛选［J］．解放军药学学报，2008，24(4):311 －313．
［4］卫星星，王转花．高效液相色谱法测定苦荞籽中芦丁和槲皮素的含量
［J］．药物分析杂志，2007，27(12):1909 －1910．
974341 卷 8 期 张 涵 城市滨水区绿地生态空间的构建模式研究