全 文 ：书·实验研究·
基金项目:国家自然科学基金(No． 30772701);广东省科技计划项目(No． 2009C3104003) ;湛江市科技攻关项目(No． 2012C3104019，
2013A01008) ;广东医学院重点项目(No． Z2013001)、面上项目(No． M2013003)和博士启动项目(No． B2013019)
作者简介:叶华，女，讲师，研究方向:抗炎免疫药理学，E － mail:yehua2008@ foxmail． com
半边旗有效成分 5F对腹膜炎小鼠血清 NO和细胞因子的影响
叶 华，龚先玲，李 立，吴科锋，吕应年，符伟玉，郑学宝
(广东天然药物研究与开发重点实验室，广东医学院，广东 湛江 524023)
摘要:目的 研究半边旗有效成分贝壳杉烷型二萜类化合物 5F对腹膜炎小鼠血清一氧化氮(NO)和细胞因子 IL
－6、IL －10、TNF － α、MCP －1的影响。方法 预先给予 50和 100 mg·kg －1 5F溶液 3 d后，腹腔注射 50 mg·kg －1酵
母多糖建立腹膜炎模型，Griess法测一氧化氮含量，流式细胞术检测 IL － 6、IL － 10、TNF － α和 MCP － 1 的水平。结
果 与模型组比较，5F可以降低腹膜炎小鼠血清一氧化氮水平(P ＜ 0. 05)，减少 IL － 6、IL － 10、TNF － α和 MCP － 1
含量(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。结论 5F可以有效减少酵母多糖诱导的腹膜炎小鼠血清一氧化氮、TNF － α、IL － 6、
IL － 10 和 MCP － 1 含量。
关键词:半边旗;腹膜炎;一氧化氮;细胞因子
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:2095 －5375(2014)12 －0683 －003
Effect of 5F，an extract from Pteris semipinnata L． serum NO and cytokine levels
in zymosan A － induced peritonitis mice
YE Hua，GONG Xian-ling，LI Li，WU Ke-feng，LV Ying-nian，FU Wei-yu，ZHENG Xue-bao
(Guangdong Key Laboratory for Ｒesearch and Development of Natural Drugs，
Guangdong Medical College，Zhanjiang 524023，China)
Abstract:Objective To investigate the effect of 5F，an extract from Pteris semipinnata L． serum NO and cytokine
levels in zymosan A － induced peritonitis mice. Methods After pretreatment with 50 and 100 mg·kg －1 5F solution for 3
d，mice were intraperitoneal injection of 50 mg·kg －1 zymosan to induce peritonitis. The release of nitric oxide was meas-
ured by a Griess reagent system． The serum levels of IL － 6，IL － 10，TNF － α and MCP － 1 were determined by flow cytome-
try. Ｒesults Compared with model group，5F pretreatment could decrease the overproduction of NO，IL － 6，IL － 10，TNF －
α and MCP － 1(P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01). Conclusion 5F could significantly reduce the serum level of NO，TNF － α，IL －
6，IL － 10 and MCP － 1 in zymosan A － induced peritonitis mice．
Key words:Pteris semipinnata L．;Peritonitis;NO;Cytokine
半边旗(Pteris semipinnata L．，PsL)是一种传统
中药，广泛分布于我国南部，常被用于治疗各种炎症
性疾病，如肝炎、病毒性肠炎和毒蛇咬伤等［1］。我
们从半边旗中分离提取获得贝壳杉烷型二萜类化合
物 5F(ent － 11α － hydroxy － 15 － oxo － kaur － 16 － en
－19 － olic acid)，化学结构名为 11 － α －羟基 － 15
－氧 － 16 －烯 －对映贝壳杉烷 － 19 －酸［2］。前期
研究发现，5F 具有一定的抗炎作用，可以抑制脂多
糖诱导的 ＲAW264. 7 巨噬细胞活化。NO 和细胞因
子在炎症反应过程中具有重要作用。本实验通过建
立酵母多糖诱导的急性腹膜炎小鼠模型，观察 5F对
小鼠血清 NO、TNF － α、IL － 6、IL － 10 和 MCP － 1 的
影响，评价 5F的抗炎作用并初步探讨其作用机制。
1 材料和方法
1. 1 材料 5F 干粉由本实验室(广东天然药物研
究与开发重点实验室)提供，经丙二醇溶解，蒸馏水
稀释，制成丙二醇体积分数为 0. 15，5F 质量浓度为
1 000 mg·L －1的储备液，除菌过滤后冷藏保存，实
·386·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2014 Vol． 33，No． 12
DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2014.12.001
验时再以培养基稀释至所需浓度(丙二醇最终浓度
≤ 0. 012)。雌性 ICＲ小鼠，4 ～ 6 周龄，体重 18 ～ 22
g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许
可证号:SCXK(湘)2011 － 0003。酵母多糖购自 Sig-
ma 公司，Cytometric Bead Array (CBA)Mouse In-
flammation Kit 购自 BD － PharMingen 公司，NO 试剂
盒购自碧云天生物技术研究所。
1. 2 方法
1. 2. 1 腹膜炎小鼠模型的制备及分组给药 雌性
ICＲ小鼠 32只，随机均分为 4 组，空白组、模型组、5F
低剂量组和高剂量组。5F 低、高剂量组分别灌胃给
予 50和 100 mg·kg －1 5F溶液，模型组灌胃给予等体
积 PBS，连续给药 3 d。最后一次给药 6 h 后，除空白
组外，其余各组小鼠腹腔注射 50 mg·kg －1酵母多糖。
6 h后断头采血，收集血清，4 ℃保存备用。
1. 2. 2 Griess法测 NO含量 按照 NO 试剂盒说明
书操作，于 550 nm处测定吸光度值，根据所测亚硝
酸盐浓度推算 NO含量。
1. 2. 3 流式细胞术检测小鼠腹腔渗出液中 IL － 6、
IL － 10、TNF － α 和 MCP － 1 的含量 取 50 μL 血
清，与 50 μL包被特异抗体的捕获微球、50 μL 生物
素标记的检测抗体混合物预混合，反应 2 h。按照
CBA 试剂盒说明书操作，流式细胞仪进行样本和标
准品检测，绘制标准曲线，计算样本含量。
1. 2. 4 统计学处理 实验结果均以 x ± s 表示，用
SPSS 17. 0 软件处理数据，采用单因素方差分析和
Tukey HSD多重比较。
2 结果
2. 1 5F抑制腹膜炎小鼠 NO 的释放 Griess 法测
腹膜炎小鼠血清 NO含量，结果显示，5F 组血清 NO
有所下降，其中 100 mg·kg －1剂量组与模型组相
比，差异具有显著性(见图 1，P ＜ 0. 05)。
图 1 5F对腹膜炎小鼠血清 NO含量的影响
注:与正常组比较，#P ＜ 0. 01;与模型组比较，* P ＜ 0. 05
2. 2 5F对腹膜炎小鼠分泌细胞因子的影响 取各
组动物血清，流式细胞术检测 TNF － α、IL － 6、IL － 10
和 MCP －1水平，结果显示，与模型组相比，5F 50 和
100 mg·kg －1剂量组 TNF － α、IL －6和 MCP －1 含量
明显减少(P ＜0. 05或 P ＜0. 01)，5F 100 mg·kg －1剂
量组 IL －10含量明显减少(P ＜0. 01)(见表 1)。
表 1 5F对腹膜炎小鼠血清 TNF － α、IL － 6、IL － 10
和 MCP － 1 含量的影响
Group 细胞因子水平
(pg·mL －1)
TNF － α IL － 6 IL － 10 MCP － 1
Normal 19. 13 ± 4. 71 120. 22 ± 18. 41 41. 58 ± 6. 64 150. 98 ± 18. 11
Model 51. 57 ± 6. 08# 329. 92 ± 24. 57# 98. 42 ± 9. 83# 437. 28 ± 35. 84#
5F(L) 32. 93 ± 5. 66* 269. 73 ± 36. 70* 83. 60 ± 10. 66 366. 07 ± 35. 91*
5F(H) 28. 37 ± 5. 47* 206. 98 ± 27. 32* 66. 68 ± 9. 23* 280. 92 ± 33. 67*
注:与正常组比较，#P ＜ 0. 01;与模型组比较，* P ＜ 0. 01
3 讨论
酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎是一个比较经典的
动物急性炎症模型，发作快、攻击 30 min 后即可检
出炎症反应，是一种炎症反应程度较轻的非致死性
炎症［3 ～ 5］。本实验观察 5F 对酵母多糖诱导的腹膜
炎小鼠血清 NO 和细胞因子的影响，结果显示，5F
可以调节小鼠血清中异常的 NO、TNF － α、IL － 6、IL
－ 10 和 MCP － 1 含量，与模型组相比，5F 50 和 100
mg· kg －1剂量组 NO、TNF － α、IL － 6、IL － 10 和
MCP －1 含量均有不同程度降低。
NO是炎症反应与免疫调节的效应因子，也是
关键的调节因子，参与多种炎症信号传导，并与多种
炎症因子相互作用［6］。研究发现，腹膜炎患者和动
物模型的透出液和血清中 NO 升高，增高的 NO 进
而调节腹膜血流，提高腹膜渗透性，影响腹膜转运功
能［7，8］。本实验结果表明，模型组小鼠血清 NO含量
较正常对照组明显升高，与文献报道结果一致，而
5F可以明显降低小鼠升高的血清 NO含量，提示 5F
对腹膜炎小鼠的保护作用可能与降低 NO 水平
有关。
腹膜炎发生发展过程中单核巨噬细胞作为第一
道防线，产生 TNF － α 和 IL － 1，进而刺激生成 IL －
6，激活并集聚白细胞［9，10］。这些前炎性细胞因子的
释放实际是一种抵御炎症的宿主反应，然而释放过
量会导致组织损伤。因此，机体还释放 IL － 4、IL －
10 等抗炎细胞因子，调节前炎性细胞因子的作用，
平衡前者的损伤效应［11］。TNF － α和 IL － 6 等促炎
因子可显著增强 MCP － 1 表达，并与相应受体结合
启动炎性细胞的活化与迁移，并通过浓度梯度引导
炎性细胞迁移到病灶发挥作用清除病原体［12］。在
腹膜炎患者和动物模型都存在高水平的 TNF － α、IL
·486· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2014 Vol． 33，No． 12
－ 6、IL － 10 和 MCP － 1，这些细胞因子继而刺激机
体产生其他炎症介质，如活性氧、NO、自由基、花生
四烯酸代谢产物等，并活化内皮细胞和中性粒细胞
产生微循环损伤和组织损害［13 ～ 15］;药物治疗可以降
低这些细胞因子的水平，减轻病情［16 ～ 18］。本实验结
果显示，5F可以有效降低腹膜炎小鼠血清 TNF － α、
IL － 6、IL － 10 和 MCP － 1 水平而减轻脏器损伤，研
究结果为进一步探讨 5F 的抗炎作用机制及新药开
发提供了试验依据。
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