全 文 ：文章编号:1005-1139(2000)04-0248-03
小红参醌对低温储存皮肤活力的影响
贾晓明 ,纪晓峰 ,朱兆明 ,孔秋华
(解放军 304医院烧伤研究所 , 北京　100037)
　　[ 摘要] 　目的:探讨小红参醌作为抗冻剂添加剂 , 在皮肤的低温储存中对皮肤活力折影响。方法:皮肤的低温
储存采用速冻玻璃化法和慢冻法 ,将小红参醌分别按照 0.5μg/ml和 1μg/ ml的浓度加入抗冻液中 , 每种方法分为
常规组 、 0.5μg/ ml小红参醌组和 1μg/ ml小红参醌组。利用三个实验组分别对小块离体豚鼠皮和异体尸体皮进行
处理 ,然后在液氮温度下进行深低温储存。对储存后皮肤分别进行氧耗量 、琥珀酸脱氢酶活性的测定 , 并计算平均
活力 。结果:对于豚鼠皮和异体尸体皮 , 无论速冻法和慢冻法两种浓度的小红参醌对低温储存后皮片的活力均未
发现有明显的提高。除大块异体皮慢冻组琥珀酸脱氢酶 , 小块异体皮慢冻组耗氧量之间尚有差异以外 , 其他组别
氧耗量 、琥珀酸脱氢酶活性测定值以及平均活力之间均无显著差异。结论:抗氧化剂小红参醌在皮肤的低温储存
中对皮肤的活力没有影响 ,表明深低温储存中过氧化损伤不同于 4℃下保存 , 可能存在其他机制 , 需要进一步研
究。
关键词:小红参醌;低温储存;皮肤;活力
中图号:R644　　文献标识码:A
The effect of Rubiaquinone on viability of cadaver cryopreservated skin
Jia Xiao-ming , Ji Xiao-feng , Zhu zhao-ming , Kong Qiu-hua(Burn Research inst itute , PLA 304 th
Hospital , Beijing 100037 , China)
[ Abstract] 　Objective:To discuss the effect of Rubiaquinone on the cry opreservation of skin as a additive to cryoprotectent.
Methods:Low-speed cooling method and vitrification were adopted as the method of skin cryopreservation.Three g roup which
contain none , 0.5μg/ ml , 1μg/ml Ruibiaquinone w ere created for each method.After preserved at liquid nitrogen , the viability
of small sheet of guinea pig and cadaver skin were assessed by oxygen consumption and SDH.Then average viability is also cal-
culated.Results:.Our results showed that Rubiaquinone had no effect on whatever guinea pig and cadaver skin with low-speed
coo ling o r vitrification.Conclusion:Our data indica ted that the pero xide injury in cyropreservation was different from that at
4℃.Further research should be carried out fo r understanding its inherent machanism.
Key words:rubiaquinone;cryopreservation;skin;viability
　　皮片离体在低温下储存时 ,由于缺乏有效的血
供 、代谢能力下降以及细胞的进行性衰老过程 ,都有
可能启动氧自由基的产生并导致细胞和组织的损
伤。我们以往的研究表明 ,当皮片在 4℃储存时皮
片氧自由基(SOD)的含量增加 ,SOD活性下降[ 1] 。
基金项目:“九五”军队科研基金项目(97H30)
作者简介:贾晓明(1954-),男 ,四川广元人 , 1973 年第三军医大学毕
业 , 1996年军医进修学院博士毕业 , 19951996年加拿大阿尔伯塔
大学医学院博士后 ,解放军 304医院全军烧伤研究所临床部副主
任 、主任医师 、教授 、硕士生导师;从事烧伤救治、异体皮储存研究 ,
发表论著 60余篇 ,获国家 、军队科技进步二等以上奖项 5 项。电
话:(010)66867758
收稿日期:2000-06-07;　修回日期:2000-07-09
小红参醌是茜草科人参属植物小红参的有效成分 ,
我们曾用于对烧伤所致 PMN 功能损伤的动物实
验 ,证实其抗氧化效果优于其他种类的抗氧化
剂[ 2] 。对于皮肤的储存 ,我们对 4℃条件下也利用
小红参醌进行应用研究 ,发现可以提高储存后皮片
的活力[ 1] 。受此启发 ,本研究将小红参醌作为抗氧
化剂加入抗冻液中 ,探讨它对深低温储存的皮片活
力的影响。
1　材料和方法
1.1　实验材料
1.1.1　豚鼠皮 　豚鼠 500g 左右 , 处死 , 剃毛 ,
1∶1 000苯扎溴铵(新洁尔灭)溶液浸泡15min ,无
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菌条件下取鼠皮断层皮片 0.3 mm 。
1.1.2　尸体皮　将死后 6 h 内的尸体皮全层剥下 ,
剃毛 ,刷洗 ,1∶1000 苯扎溴铵溶液中浸泡 15 min ,无
菌条件下鼓式取皮机将皮片修薄为 0.3 mm厚 。
1.2　方法
1.2.1　实验分组　①按皮片大小分为小块皮组和
大块皮组 ,小块皮组使用 12.5 mm皮冲子切割的豚
鼠皮和异体皮小圆块 ,大块皮组使用 400 cm2 大小
的异体皮;②按冷冻方法分为速冻玻璃化组和慢冻
储存组;③每种冷冻方法按加入小红参醌剂量不同
分为常规组 , 0.5μg/ml小红参醌抗冻液组 1μg/ml
小红参醌抗冻液组。
1.2.2　步骤 　速冻各组皮片用抗冻液处理 30
min ,尔后直接投入液氮中储存 。慢冻各组皮片在
抗冻液中处理 15 min ,置入 -80℃低温冰箱 4h后 ,
再投入液氮中。
以上各组皮片冷冻 24 h后 ,在 40℃水浴中复
温 ,然后检测皮片的活力 。
1.2.3　皮片活力的检测　皮片活力的检测采用氧
耗量和琥珀酸脱氢酶(SDH)的测定 。平均活力的计
算以储存前皮片的氧耗值和琥珀酸脱氢酶含量的绝
对值为 100%,储存后相应活力指标的检测结果除
储存前的结果求得平均活力 。
1.3　数据处理　所有结果采用 F 检验 ,组间比较
采用 t 检验。统计处理采用 Microsof t EXCEL 97
进行处理。
2　结　果
2.1　对储存的豚鼠皮活力的影响
2.1.1　活力指标的变化　我们观察了不同浓度的
小红参醌对两种储皮方法的影响 ,结果发现速冻法
3 组之间氧耗值和 SDH 结果差异不显著(P >
0.05);慢冻法 3 组之间无论氧耗量和 SDH 比较也
不显著(F =1.108 , 0.106 , P >0.05), 各组间两两
比较不显著(P >0.05)。
2.1.2　平均活力的比较　无论速冻法和慢冻法 ,3
组之间氧耗值和 SDH 的平均活力相差不大 ,经统
计学检查无显著差异(P >0.05),见表 1。
表 1　不同浓度小红参醌对小块豚鼠皮储存后活力的影响
氧耗值
(kPa/ 60s)
氧耗值平均活力
(%)
SDH
(×10-6OD/mg)
SDH平均活力
(%)
两种指标平均活力
(%)
常规速冻组 8.28±0.92 96.7 3790±454 73.9 75.9
速冻+0.5μg/m l小红参醌 8.73±1.50 81.9 4372±856 88.3 83.7
速冻+1μg/m l小红参醌 9.17±2.49 85.9 4188±1303 81.7 83.5
常规慢冻组 6.36±2.19 54.9 3831±1261 80.9 66.7
慢冻+0.5μg/m l小红参醌 5.97±2.35 59.1 3645±1681 77.9 67.2
慢冻+1μg/m l小红参醌 6.57±2.73 64.3 3617±1532 78.5 70.3
　　小红参醌组与常规组比较＊P<0.05
2.2　对储存的小块异体皮活力的影响
2.2.1　活力指标的变化　我们观察了不同浓度的
小红参醌对两种储皮方法的影响 ,结果发现速冻法
3组之间氧耗值及 SDH 相差均不显著(P >0.05);
两种储皮法各组间两两比较 ,除慢冻法的常规组与
1.0 μg/ml小红参醌氧耗值之间差异显著外 , 其余
比较亦不显著;慢冻法 3组之间无论氧耗量和 SDH
比较也不显著(P >0.05),各组间两两比较不显著
(P>0.05)。
2.2.2　平均活力的比较　无论速冻法和慢冻法 , 3
组之间氧耗值和 SDH 的平均活力相差不大 ,经统
计学检验无显著差异(P >0.05)。以上结果见表
2。
表 2　不同浓度小红参醌对异体小块皮活力储存后的影响
氧耗值
(kPa/ 60s)
氧耗值平均活力
(%)
SDH
(×10-6OD/mg)
SDH平均活力
(%)
两种指标平均活力
(%)
常规速冻组 8.06±2.05 72.3 1169±616 48.3 60.3
速冻+0.5μg/m l小红参醌 7.79±2.02 69.9 1538±722 63.5 66.6
速冻+1μg/m l小红参醌 7.05±3.5 63.3 1283±593 52.5 57.0
常规慢冻组 5.5±1.48 49.3 731±366 29.6 38.4
慢冻+0.5μg/m l小红参醌 4.72±2.19 42.5 672±412 26.4 34.4
慢冻+1μg/m l小红参醌 4.3±2.19 38.6 783±296 34.3 36.3
　　小红参醌组与常规组相比较＊P<0.05为差异显著
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2.3　对储存的大块异体皮活力的影响
2.3.1　活力指标的变化　我们观察了不同浓度的
小红参醌对两种储皮方法的影响 ,结果除慢冻法
SDH差异显著外(P <0.05),发现其他各组之间氧
耗值及 SDH 相差不显著(P >0.05);两种储皮法各
组间两两比较 ,除常规慢冻组 、1.0 μg/ml小红参醌
与 0.5 μg/ml小红参醌组的 SDH 结果之间差异显
著外 ,其余比较亦不显著。
2.3.2　平均活力的比较　无论速冻法和慢冻法 ,3
组之间氧耗值和 SDH 的平均活力以小红参醌组略
高 ,经统计学检验无显著差异(P >0.05)。以上结
果见表 3。
表 3　不同浓度小红参醌对大块异体皮储存后活力的影响
氧耗值(kPa/ 60s) 氧耗值平均活力(%)
SDH
(×10-6OD/mg)
SDH平均活力(%) 两种指标平均活力(%)
常规速冻组 8.4±1.9 76.2 869±282 37.6 50.5
速冻+0.5μg/m l小红参醌 10.0±1.8 90.7 887±267 40.6 57.3
速冻+1μg/m l小红参醌 8.75±2.0 79.4 1111±442 47.4 58.0
常规慢冻组 4.2±0.8 38.9 374±84 25.0 34.5
慢冻+0.5μg/m l小红参醌 5.2±1.59 46.5＊ 500±63＊ 33.4 42.8
慢冻+1μg/m l小红参醌 4.20±1.87 37.6 506±88＊ 33.8 36.4
　　小红参醌组与常规组相比较＊P<0.05
3　讨　论
　　小红参是茜草科属植物 ,属活血化淤类药物 ,经
过动物实验发现可以作为抗氧化剂使用[ 3 , 4] 。小红
参醌是其中的有效成分 ,经证实其抗氧化效能优于
维生素 E[ 5] 。本实验目的旨在借助小红参醌的药理
抗氧化作用 ,探讨对改善离体断层皮片低温储存后
活力的变化。
通过本实验证实 , 0.5μg/ml和 1.0μg/ml 浓度
的小红参醌加入到抗冻液中处理皮片 ,未发现对慢
冻或速冻两种储存方法储存的皮片活力有明显的提
高。除大块异体皮慢冻组 SDH 指标 ,小块异体皮慢
冻组氧耗值之间比较尚有差异外 ,其他大部分组别
的两种指标以及平均活力比较均未得出统计学意
义。
研究表明 ,器官组织的缺血和再灌注损伤与氧
自由的产生有密切的关系 ,另外血液中的白细胞也
是释放氧自由基的重要来源 。我们以前的研究表
明 ,皮肤在 4℃储存后 1 周内氧自由基的含量明显
升高 ,但在深低温储存中由于离体时间短 ,是否有氧
自由基的产生尚需进一步探讨[ 1] 。
小红参醌在体内应用可以缓解心绞痛 ,减少心
肌梗塞的损伤程度和范围 ,对全身和局部的缺血缺
氧有良好作用;还有较强的抗氧化作用 ,可以明显减
轻烧伤所致 PMN 功能损伤[ 2] 。我们以前的研究发
现小红参醌可以提高 4℃储存皮肤的活力[ 1] ,其机
制可能与小红参醌的抗氧化功能有关 。但在低温保
存过程中 ,降温过程时间很短 ,到达液氮温度后 ,所
有细胞内外生化反应停止 ,氧自由基产生减少 ,因而
小红参醌在深低温保存中的作用并不明显 。由于低
温条件下细胞的各种生化变化目前了解较少 ,因此
仍需进一步进行相关的实验研究和探讨。
[参考文献]
[ 1] 朱兆明.4℃冰箱储存皮肤中几个问题的研究[ J] .中华整形
烧伤外科杂志 , 1989 , 5:139-140.
[ 2] 柴家科 ,盛志勇 ,朱兆明.抗化剂对烧伤所致 PMN 功能损伤
的治疗作用[ J] .中华整形烧伤外科杂志 , 1995 , 6(1):213-215.
[ 3] 怒江傈傈族自治州药品标准办公室 ,昆明市药品检验所.普米
族药———小红参及其他[ J] .云南医药 , 1977 , 1:54-58.
[ 4] 宋书元 ,王淑仙 ,李连达 , 等.小红参Ⅱ-A 对狗实验性心肌梗
塞的保护作用及对心脏血流动力学的影响[ J] .科技工作年
报 , 1982 , 20-23.
[ 5] 宋书元 ,丁林茂 ,王淑仙 ,等.抗缺氧药物的筛选研究[ J] .科
技工作年报, 1981 , 46-49.
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