全 文 ：白藜芦醇与半边旗二萜类化合物 5F 对活体
血管生成的影响*
何振辉1 ,何太平1 ,莫丽儿2 ,梁念慈1
(1.广东医学院 ,广东 湛江 524023;2. 广东天然药物研究与开发重点实验室 ,广东 湛江 524023)
[ 摘　要] 目的:观察白藜芦醇(Res)、半边旗二萜类化合物 5F(以下简称 5F)对活体血管生成的影响。方法:采用
鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验 , 检测 Res 和 5F 对活体血管生成的影响。结果:与对照组相比 , Res 用药组(11. 4 μg /
egg 、45. 7 μg /egg)的血管生成抑制率分别为(32. 2±3. 6)%、(53. 7±4. 2)%, 5F 用药组(8. 3μg /eg g、33. 2 μg /egg)血
管生成抑制率分别为(19. 7±4. 0)%、(36. 5±3. 0)%。结论:Res 和 5F 可抑制活体血管生成 , 对肿瘤和其他病理情况
下的抗血管治疗可能具有重要应用价值。
[ 关键词] 血管;白藜芦醇;鸡胚绒毛尿囊膜
[ 中图分类号] R322. 12　[ 文献标识码] A　[文章编号] 1671-5098(2006)01-0001-03
Effect of Resveratrol and the Diterperoid Compound 5F Isolated
from Pteris Semipinnata L on Angiogenesis in Vivo
HE Zhen-hui1 , HE Tai-ping1 , MO Li-er2 , LIANG Nian-ci1
(1 . Guangdong Medical College , Zhan jiang , Guangdong 524023 , China;
2 . Guangdong Natural Drug Research and the Development Point Laboratory Zhanj iang ,Guang dong 524023 , China)
Abstract:Objective To inve stigate the effect o f resv era trol and the dite rpe roid compound 5F iso lated f rom P te ris
semipinnata L on angiog ene sis in viv o. Methods The chicken cho rioa llantoic membrane(CAM) assay was used to detect
the effect of resvera trol and compound 5F on angiogenesis in viv o. Results The inhibito ry rates of Res on angiogenesis
of CAM were(32. 2±3. 6)%、(53. 7±4. 2)% w ith the dose of 11. 4 μg /eg g、45. 7 μg /eg g;the inhibitory ra te s of 5F on
ang io genesis o f CAM w ere(19. 7±4. 0)%、(36. 5±3. 0)% with the dose of 8. 3 μg /eg g 、33. 2 μg /egg .Conclusion Res
and 5F can inhibit blood vessel fo rma tion in CAM , w hich implies their application in trea tment on angiog enesis in tumo r
or other pathological conditions.
Key words:Blood vessel;Resverat rol;Chorioallantoic membrane
　　白藜芦醇(Resve ratro l , Res), 化学名为芪三酚(3 , 4 , 5 -
trihydroxystibene), 分子式 C14H 12O3 , 分子量 228. 25 , 属于非
黄酮类多酚化合物。 Res 是种子植物在遇到紫外线照射 、真
菌感染等不利条件下产生的补体[ 1] ,具有抗菌 、抗血栓 、抗炎
等多种生物学活性 ,其中尤以抑制多种肿瘤的发生 、发展的作
用引人注意[ 2] ,但其作用机制仍未明确。 5F 是我们课题组从
草药半边旗中提取的二萜类化合物 , 化学名称为 11α- 羟基
- 15 - 氧 - 16 - 烯 - ent -贝壳杉烷 - 19 酸(Ent - 11α- hy-
droxy - 15 - oxo - kaur - 16 - en - 19 - oic - acid),分子式
为 C20H 28O 4 , 分子量为 332. 4。以往的研究表明 , 5F 具有强
的抗肿瘤活性[ 3 , 4] 。我们最近的研究表明 Res 和 5F 在体外
具有抑制肿瘤转移[ 5] 和抑制人脐静脉内皮细胞 ECV-304 增
殖 、迁移等抗血管生成作用。鸡胚绒毛尿囊膜(cho rioallantoic
membrane , CAM)试验是一种广泛用于血管生成的研究方
法。本研究采用 CAM 法 ,研究 Res 和 5F 在体内对血管生成
的影响 ,为阐明 Res 和 5F 抗肿瘤血管生成及其临床应用提
供依据。
1　材料与方法
1. 1　材料和药物　新鲜种蛋购自湛江海洋大学家禽育种中
心 ,白藜芦醇(反式)购自南京学子医化研发中心 , 半边旗二萜
类化合物 5F 由广东天然药物研究与开发重点实验室提供。
白藜芦醇和 5F 用 DMSO 配成原液 , 分装冻存 ,临用前用 PBS
稀释成所需浓度。药物作用于 CAM 时 , DMSO 的终浓度小
于或等于 0. 5%(V /V),实验表明该浓度对 CAM 的血管生成
无影响。
1. 2　方法
1. 2. 1　鸡胚准备　把表面光泽 、干净的种蛋放入 0. 01%的
新洁尔灭中浸泡 3 min ,拭干后置于 38℃～ 39℃隔水式电热
恒温培养箱内孵育 , 相对湿度为 40%～ 80%。鸡蛋气室向
上 , 鸡蛋的长轴与蛋托成 80°角。 每 4 h 翻蛋一次。孵育 4 d
后 , 用检卵灯观察鸡胚发育的情况。未受精卵只见模糊阴影 ,
不能找到胚头 , 应予淘汰;如出现胚影活动吊滞或胚影固定于
卵壳 , 或血管昏暗模糊者 , 说明鸡胚将要死亡或已死亡 ,应随
时淘汰。生长良好的鸡胚一直孵育到适当的胚龄。
1. 2. 2　加测试物　参照高勇 、王杰军等[ 6] 的方法 , 取 8 d 龄
鸡胚 , 通过检卵灯找到气室 ,并用记号笔标出。用尖锥在气室
和壳膜上锥一小孔 , 用无菌镊子剥去直径约为 1cm 的蛋壳 ,
将无菌的滤纸片贴在暴露的 CAM 上。将受试药物加于滤纸
片上。实验分为对照组和药物组。对照组加 PBS , 药物组每
个鸡胚加相应剂量的药物 , 每组至少存活 5 个鸡胚。最后用
无菌胶带封口 , 放入恒温箱内继续孵育。以上操作均在超净
台内进行。
1. 2. 3　固定 、取膜和计数　3 d 后取出鸡胚 , 局部采用甲醛和
丙酮 1∶1 混合的固定液固定 15 min。固定完成后剪下覆盖
1 实用医技杂志 2006年 1月第 13卷第 1期(半月刊)　JPMT , J anuary. 2006 , Vol. 13 , No. 1(Semimon th ly)
* 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No. 39870900)
滤纸的 CAM , 将附贴鸡胚绒毛尿囊膜的滤纸在清水中铺开 ,
弃去滤纸 ,把 CAM 置于干净的载玻片上 , 加上适量封片胶 ,
盖上盖玻片 ,制成永久保存的标本。在普通显微镜或解剖显
微镜下随机选取 5 个视野 ,计算滤纸覆盖范围内可见的血管
分支点的数量 ,以 x±s表示。血管生成抑制率按照下面的公
式计算:
血管生成抑制率(%)=(1 -给药组血管分支点数 /对照
组血管分支点数)×100%
1. 2. 4　统计学分析　本实验数据资料用 x ±s 表示 , 采用
S AS V8. 1 统计软件进行 One - Way ANOVA 。 P <0. 05 表
示差别有统计学意义 , P<0. 01 表示差别有非常显著的统计
学意义。
2　结果
2. 1　CAM 血管生成的大体观察　对照组血管呈树枝状走
行 ,细小分支多且血管密度大(见图 1)。 45. 7 μg /eg g 的 Res
和 33. 2 μg /egg 的 5F 与对照组相比 , 血管细小分支明显减
少 ,血管密度明显减小(见图 2 , 图 3)。 Res 和 5F 用药组鸡胚
的存活率也有下降。
图 1　对照组鸡胚 CAM(40×)可见丰富的血管及毛细血管网
图 2　Res组 45. 7μg鸡胚 CAM(40×)测试区血管和毛细
血管显著减少
图 3　5F组 33. 2μg鸡胚 CAM(40×)测试区血管
和毛细血管明显减少
2. 2　CAM 血管生成的定量分析　计数 CAM 上可见的血管
分支点 ,计算血管生成抑制率。 Res 和 5F 均能明显抑制鸡胚
绒毛尿囊膜的血管生成(见表 1)。
表 1　白藜芦醇和 5F对鸡胚绒毛尿囊膜血管
生成的影响( x±s , n=5)
组别 用药(μg /egg) branches count Inhibitory rate(%)
Cont rol 106. 2±5. 1
0. 5%DMSO 102. 4±3. 8 0±3. 8
Res 11. 4 69. 4±3. 6** 32. 2±3. 6
45. 7 47. 4±4. 3** 53. 7±4. 2
5F 8. 3 82. 2±4. 1** 19. 7±4. 0
33. 2 65. 0±3. 1** 36. 5±3. 0
　　注:**P<0. 01 vs control group
3　讨论
从种类浩如烟海的天然药物中筛选血管生成抑制剂(an-
giog enesis inhibito r , AI),工作量大且繁琐。要研究 AI , 一般
可以用分子模型 、细胞模型 、组织器官模型来筛选和研究其作
用机制。体外模型的优点是针对性强 ,简便经济 , 实验过程易
于控制 , 效率较高。但有时容易漏筛 ,而且在体外有作用的物
质在体内不一定有相同的作用。体内模型主要有 CAM 试
验 , 兔耳皮肤 、角膜移植试验 , 以及近年来发展的基质胶塞
(matrigel plug)、纤维凝胶植入皮下[ 7]等方法。 1975 年 Folk-
man 等首先把 CAM 法应用与肿瘤诱发血管生成的实验中。
CAM 试验方法简单 , 实验周期相对其他模型来说较短 , 是目
前常用的体内模型。本研究采用这一模型。体内模型的优点
是药物作用跟机体用药近似 ,不容易漏筛 ,但缺点也很明显 ,
主要是操作麻烦 、实验费用较高。 所以筛选 AI 的一般方法
是先经体外模型筛选 , 再经体内模型(组织器官水平)筛选 , 有
必要时再用动物肿瘤模型观察其疗效。在体外实验的基础
上 , 我们运用 CAM assay 观察了 Res 和 5F 对活体血管生成
的影响。我们发现 Res 和 5F 在用药组明显抑制了 CAM 上
的血管生成 , Res 和 5F在 45. 7 μg 、33. 2 μg 的剂量下抑制率
分别为 53. 7%和 36. 5%。
我们最近的研究表明 Res 和 5F 抑制人脐静脉内皮细胞
增殖 , 对内皮细胞的迁移也有影响。 Res 和 5F 均能下调血管
内皮生长因子受体 2(KDR/F lk - 1)的表达(另文发表), 后者
在血管生成中起重要作用[ 8] ,这可能是这两种药物抑制 CAM
血管生成的原因。
CAM 试验的方法有很多种 , 颜春洪等介绍了无壳的鸡胚
体外培养的方法 , 认为操作和观察更简便。在鸡胚中植入待
测物的时间 , 不同的文献有不同的报道。有文献报道 4 日植
入待测物的方法 , 但刘秀萍等[ 9]认为 4 d ～ 5 d 龄鸡胚还处于
“单珠”期 , 胚胎的活动度大 ,接种后血管丰富的一面常会移到
接种点的对面 , 影响了药物的作用。 Schltter 等认为鸡胚发育
的 8 d ～ 12 d , 血管生成以套叠式生长(intussusceptive micro-
va scular gr ow th)为主 , 在此时鸡胚血管正处于生长的高峰
期 , 胚龄 8 d～ 14 d 的 CAM 便成为血管生成相关研究的极好
模型。鉴于此我们采用第 8日加入测试药物的方法。
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2 实用医技杂志 2006年 1月第 13卷第 1期(半月刊)　JPM T , J anu ary. 2006 , Vol . 13 , No. 1(S emim on th ly)
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(收稿日期:2005-09-17)
MS23对大鼠胸主动脉环舒张作用的研究
相晓军1* ,吕吉元2 ,张明升3 ,贾永平2
(1.运城市急救中心 ,山西 运城 044000;2. 山西医科大学第一医院 ,山西 太原 030001;
3. 山西医科大学 ,山西 太原 030001)
[ 摘　要] 目的:探讨 MS23 舒张血管平滑肌作用及其机制。方法:采用离体血管张力实验方法 , 观察 MS23 的舒
血管作用和对不同浓度 KCl引起大鼠胸主动脉环收缩作用的影响。结果均用 x±s表示。资料分析:加用 M S23 前后
进行配对 t检验。制图用Graph Pad P rism4 Demo软件。统计分析用 SPSS11. 5软件。 P<0. 05 为有统计学意义。结
果:高浓度的 MS23可降低血管环的静息张力(P<0. 05);MS23对 KCl(60 mmol / L)和 NE(1×10 - 5)mo l /L)引发的血
管环收缩具有拮抗作用(P<0. 01);M S23 能使 20 mmol /L ～ 70 mmol /L KCl对动脉环收缩作用减弱或明显减弱(P<
0. 05 或 P<0. 01);随着 MS23 浓度的增加 ,其作用逐渐增强 , KCl的浓度效应曲线向右下移位:半数有效浓度有增加
(P<0. 05 或 P<0. 01)。结论:高浓度的 MS23可减小动脉环的静息张力;MS23 可抑制 KCl和 NE 引起的缩血管作
用;MS23 对动脉环的舒张作用随着其浓度的增加而增强 ,MS23对 KCl收缩血管作用的抑制不是竞争性抑制。
[ 关键词] MS23;氯化钾(KCl);去甲肾上腺素(NE);动脉环
[ 中图分类号] R331. 3　[ 文献标识码] A　[ 文章编号] 1671-5098(2006)01-0003-04
The Effects of MS23 on Isolated Rat Thoracic Aorta Rings
XIANG Xiao-jun1 , LV Ji-yuan2 ,ZHANG Ming-sheng 3 , et al
(1 .Y uncheng E mergency Centre ,Y uncheng , S hanx i 044000 , China;
2 . The1st Hospital of S hanx i Medical University , Taiyuan , S hanx i 030001 , China;
3 . The Medical University o f Shan xi , Taiyuan , Shan xi 030001 , China)
Abstract:Objective To study the mechanisms of MS23 on vessel smooth muscle cell by means o f the obse rva tion o f
MS23 on high K +c ont racted o r norepinphrine(NE)-contracted the iso lated ra t thoracic aor ta ring s on this experiment.
Methods The effects of the drugs on r at isolated tho racic aor tic ring scontr action induced by KCl with different consis-
tencies or by no repinph rine(NE) w ere obse rved w ith MS4000 computer sy stem. The ring s were iso lated f rom Wista r
rats , w hich were 250-280 g ram s heavy .ResultsM S23 can relax the re sting tone of the isolated r at tho racic ao rtic rings
at high consistency (P<0. 05). MS23 produced relax ations o f the high K+ contraction and no repinphrine(NE)-contr ac-
tion on aor tic ring s of ra ts(P<0. 01). The rela xations to KCl are prog ressive enhancing w ith the increasing consistency
of MS23. The quantity-effect cur ve of KCl moves right and dow n and the EC50 of KCl w ere g row ing w ith the consisten-
cy of MS23 increasing. Conclusion MS23 can decr ease the re sting tone of the iso la ted rat tho racic aor tic ring s at high
consistency , MS23 showed relaxa tions on the high K+ contraction or norepinphrine(NE)-contraction and the relaxa-
tions are prog re ssiv e weakening with consistency increa sing .
Key words:MS23;KCl;Norepinphrine(NE);Tho racic ao rta rings
　　许多生理功能需要环一磷酸核苷酸(cAMP 和 cGMP)的
调控 ,其作为第二信使在信号转导途径中起着关键的作用。
细胞内 cAMP 和 cGM P 的水平受腺苷酸环化酶和鸟苷酸环
化酶与磷酸二酯酶(pho sphodiesterase , PDEs)调节。近年来 ,
3 实用医技杂志 2006年 1月第 13卷第 1期(半月刊)　JPMT , J anuary. 2006 , Vol. 13 , No. 1(Semimon th ly)
* 作者简介:相晓军(1974 -),男 ,山西夏县人 , 2005年毕业的硕士研究生 ,主治医师。