全 文 ：进展［J］． 药物评价研究，2012，6 (2) :147-149．
［6］ 林厚文，张 罡，赵宏斌，等． 黄药子的研究进展［J］．
中草药，2002，33 (2) :175-177．
［7］ 索 晴，崔立然，刘树民，等． 黄药子及配伍当归后含药
血清抗肿瘤作用的研究［J］． 中国中医药科技，2008，15
(2) :113-114．
［8］ 林 芳，华碧春． 中药黄药子抗肿瘤作用研究现状［J］．
亚太传统医药，2011，10 (10) :183-184．
［9］ 崔洪霞，程 佳，李开敏，等． 黄药子抗宫颈癌作用的初
探 ［C］ / /第六届全国化学工程与生物化工年会论文集．
湖南:长沙，2010:10-13．
［10］ 王 刚，林彬彬，刘劲松，等． 黄药子化学成分研究［J］．
中国中药杂志，2009，34 (13) :1681．
［11］ 赵 艳． 黄独有效部位抗肿瘤活性研究［J］． 齐齐哈尔医
学院学报，2009，30 (17) :2108-2109．
［12］ 王君明，崔大鹏，崔 瑛，等． 黄药子二萜内酯类成分化
学、药理及毒性研究进展［J］． 中医学报，2011，26
(11) :1319-1320．
［13］ Teponno Ｒ B，Tapondjou A L，Tane P，et al． Bafoudiosbulbins
F and G，further clerodane diterpenoids from Dioscorea bulbif-
era L． var sativa and revised structure of Bafoudiosbulbin B
［J］． Phytochemistry，2008，69 (12) :2374-2379．
［14］ Liu Hai，Chou Guixin，Guo Yinglong，et al． Norclerodane
diterpenoids from rhizomes of Dioscorea bulbifera． ［J］． Phyto-
chemistry，2010，71 (10) :1174-1180．
［15］ 谭兴起，阮金兰，陈海生，等． 黄药子抗炎活性成分的研
究［J］． 第二军医大学学报，2003，24 (6) :667-679．
［16］ 林 芳，碧 春． 中药黄药子抗肿瘤作用研究现状［J］．
亚太传统医药，2011，10 (7) :183-184．
［17］ 方 蓉，李芳秋，武建国，等． MTT 比色法的条件探讨
［J］． 临床检验杂志，2003，21 (1) :34-35．
［18］ 沈 耀，张晨辉，胡薇薇，等． 苯海拉明等有机胺类药物
干扰 MTT 还原法的应用［J］． 浙江大学学报:医学版，
2011，40 (2) :163-168．
［19］ 徐 霖，杨明飞，冉雪琴，等． 运用 MTT比色法检测印楝
素对果蝇 S2 细胞的毒力作用［J］． 河南农业大学学报，
2012，46 (1) :72-75．
［20］ 周 朋，刘晓谦，苏 君，等． MTT法体外检测脑胶质瘤
细胞对化疗药物的敏感性［J］． 哈尔滨医科大学学报，
2010，44 (6) :579-582．
［21］ 喻泽兰，刘欣荣，Michael McCulloch，等． 黄药子抗肿瘤
活性组分的筛选及作用分析［J］． 中国中药杂志，2004，29
(6) :563-567．
［22］ 高慧媛，卢 熠，吴立军，等． 中药黄独的化学成分研究
［J］． 沈阳药科大学学报，2001，18 (3) :185-188．
［23］ 侯 娟，何文辉，王明霞，等． 薯蓣皂苷的药理作用［J］．
河北医药，2004，26 (1) :71-72．
［24］ 李石生，邓京振，赵守训，等． 黄独块茎的甾体类成分
［J］． 植物资源与环境，1999，8 (2) :61-62．
［25］ 张海谋，袁金玉． 黄药子的药理和毒理研究进展［J］． 医
药导报，2009，4 (28) :490-492．
［26］ 黄开毅，张冬松，高慧媛，等． 黄独的化学成分［J］． 沈
阳药科大学学报，2007，24 (3) :145-147．
［27］ 尹明华． 抗癌药用植物黄独研究进展［J］． 生物学教学，
2010，35 (12) :10-12．
乌蕨对乐果急性中毒的解毒活性研究
卢海啸， 李家洲， 郑玉华， 倪 林
(广西玉林师范学院，广西 玉林 537000)
收稿日期:2013-02-23
基金项目:玉林师范学院重点科研项目 (2011YJZD18)
作者简介:卢海啸 (1974—) ，男，讲师，博士，主要从事中药与天然药物活性成分及药效筛选的研究工作。Tel:15907758504，E-
mail:luhaixiao76@ 163． com
摘要:目的 研究乌蕨对解救乐果急性中毒的活性部位。方法 采用乐果中毒小鼠模型，观察乌蕨不同提取物对乐果
急性中毒的解救效果，测定乌蕨对中毒小鼠的乙酰胆碱酯酶活性的影响和存活率。结果 乌蕨水提部位组能提高小鼠
的存活率;并能显著提高乙酰胆碱酯酶的活力 (P ＜ 0. 01)。结论 乌蕨水提部位能改善小鼠的中毒症状，提高小鼠
的存活率和乙酰胆碱酯酶的活力。
关键词:乌蕨;解毒;活性部位
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)02-0390-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 02. 040
乌蕨为鳞始蕨科 Lindsaeaceae 乌蕨属 Stenoloma 植物， 又名大叶金花草［1-2］。乌蕨在民间有“万能解毒药”之称，
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广泛用于解食物和农药中毒，还用于治疮毒、毒蛇咬伤
等［3-4］。研究表明，乌蕨水提物的 70%乙醇溶解物可使砷
中毒的小鼠死亡率显著降低，并能提高其耐受性［5］。此
外，乌蕨还能防治四氯化碳肝损伤作用，并能降低血清中
ALT、MDA水平，升高 SOD 酶活性和抗氧化能力［6-8］。据
报道，乌蕨汤能很好的治疗慢性肾衰，疗效确切［9］。林向
东［10］用单味草药乌蕨治疗下肢顽固性溃疡 50 余例，均取
得良好疗效。关于乌蕨解救有机磷农药中毒的活性部位的
研究，目前尚未有报道。本实验探讨其醇提物解救有机磷
农药中毒的活性部位及其对乙酰胆碱酯酶活力的影响，为
筛选新的有机磷农药解毒剂提供一定的药效学依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体质量 (20 ±
4)g，购于广西医科大学实验动物中心，清洁级，许可证
号:SCXK桂 2009-0002。
1. 2 药物及试剂 乌蕨采于广西钦州市浦北县白石水镇陈
依村，经广西中医学院刘寿养教授鉴定为陵始蕨科植物乌
蕨 Stenoloma chusanum (Linn．)Ching in Sinensia。采后粉
碎，60℃烘干备用;乐果乳液 (广东汕头市西陇化工厂)、
阿托品溶液 (山东新华制药股份有限公司)、碘解磷定溶
液 (哈尔滨宏达动物药品厂)、氯化乙酰胆碱 (北京鼎国
昌盛生物技术有限责任公司)。所用试剂均为分析纯。
1. 3 主要仪器 HH-s 数显恒温水浴锅 (江苏省金坛市医
疗仪器厂) ;U1901 紫外-可见分光光度计 (北京谱析科学
仪器有限公司) ;ＲE-2000 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器
厂) ;SHZ-D (Ⅲ)循环水式真空泵 (巩仪市予华仪器有
限责任公司) ;电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有
限公司)等。
2 方法
2. 1 乌蕨提取物的制备 称取 300 g 乌蕨干草，加入
6 000 mL 65%乙醇，加热回流 1 h，用四层纱布过滤，得到
提取液。重复提取 4 次，合并提取液，减压回收溶剂，得
膏状提取物，即粗提物。将所得粗提物分散于蒸馏水中，
依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚部分、乙
酸乙酯部分、水部分。再将各部分分别减压回收溶剂，得
到石油醚部位、乙酸乙酯部位、水部位。
2. 2 实验动物分组 将 100 只小鼠进行乙酰胆碱酯酶活性
测定，计算每只小鼠的乙酰胆碱酯酶活力，剔除差异较大
的，选取 60 只按乙酰胆碱酯酶活力分层，再按随机数字表
分为 6 组 (空白对照组、模型组、阳性对照组、石油醚部
位组、乙酸乙酯部位组、水部位组) ，每组 10 只。实验前，
将所有实验用的小白鼠在实验室内饲养 1 周，使其熟悉实
验环境，自由饮水和取食。
2. 3 乌蕨不同提取部位对乐果中毒小鼠的活性筛选 实验
组 (模型组、阳性对照组、石油醚部位组、乙酸乙酯部位
组、水部位组)通过灌胃给予乐果溶液 (45 mg /kg) ，空
白对照组灌胃等体积的生理盐水。
上述操作结束后立即给药解救，乌蕨石油醚部位组、
乙酸乙酯部位组、水部位组 (给药量均为 100 mg /kg) ，阳
性对照组每只小鼠立即静脉注射按 1 mg /kg 的阿托品溶液
和按 75 mg /kg的碘解磷定溶液，30 min 后，进行尾静脉取
血，备用。最后记录小鼠的死亡率。
2. 4 乌蕨水提物对乐果中毒小鼠的影响 将 100 只小鼠进
行乙酰胆碱酯酶活性测定，计算每只小鼠的乙酰胆碱酯酶
活力，剔除差异较大的，选取 60 只按乙酰胆碱酯酶活力分
层，再按随机数字表分为 6 组 (空白对照组、模型组、阳
性对照组、水部位低剂量组 (100 mg /kg)、水部位中剂量
组 (150 mg /kg)、水部位高剂量组 (300 mg /kg) ，每组 10
只。按表 3 ～ 4 分组和灌胃给药，其中空白对照组灌胃等量
的生理盐水，按“2. 3”项的方法进行实验，记录小鼠的
死亡率。
2. 5 乙酰胆碱酯酶活力的测定 采用乙酰胆碱酯酶试剂盒
进行测定。
按下式计算酶活性的绝对值:
Xs = (C + B + A)× 7C
式中:Xs———水解乙酰胆碱的活力;A———样品管的吸光度
值;B———对照管的吸光度值;C———标准管的吸光度值。
2. 6 数据处理与统计分析 数据用 (珋x ± s)表示，采用
SPSS 17. 0 统计软件进行分析，实验结果采用单因素方差分
析法进行分析，组间比较用 t检验。
3 结果与分析
3. 1 小鼠的死亡率 结果如表 1、表 2 所示，阳性对照组
和水部位组的小鼠死亡率与模型组比差别很明显。水部位
的高剂量组的死亡率最低，水部位组的死亡率与阳性对照
组相当。说明乌蕨的水部位具有明显的解毒作用。该部位
应为乌蕨的抗乐果中毒的活性部位。且水部位组的死亡率
随剂量的增大而降低。
表 1 小鼠的死亡率
组 别 药物剂量 / (mg·kg －1) 死亡率 /%
空白对照组 — 0
模型组 45 100
阳性对照组 1. 00 (阿托品)、75. 0 (碘解磷定) 20
石油醚部位组 100 100
乙酸乙酯部位组 100 100
水部位组 100 40
表 2 水部位不同剂量小鼠的死亡率
组 别 药物剂量 / (mg·kg －1) 死亡率 /%
空白对照组 — 0
模型组 45 100
阳性对照组 1. 0 (阿托品)、75. 0 (碘解磷定) 20
水部位低剂量组 100 40
水部位中剂量组 150 20
水部位高剂量组 300 0
3. 2 试验前后小鼠血液胆碱酯酶活力的变化 结果如表
3、4 所示，给药后各组的酶活力与空白对照组相比有不同
程度的提高 (P ＜ 0. 05) ，阳性对照组、乌蕨水部位组与模
型组比有统计学意义 (P ＜ 0. 01)。故乌蕨的解毒活性部位
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应该为乌蕨水部位。
乌蕨水部位的不同剂量组的酶活力与阳性对照组、模
型组、空白对照组相比均有统计学意义 (P ＜ 0. 01) ，且随
着剂量的增大呈现出一定的线性关系。乌蕨水部位低剂量
组与阳性对照组相比无统计学意义，提示其药效强度与阳
性对照组相近 (P ＞ 0. 05)。而中高剂量组的药效强于阳性
对照组 (P ＜ 0. 01)。
表 3 乌蕨不同提取部位对小鼠血液胆碱酯酶活力的影响
(珔x ± s，n =10)
组 别 药物剂量 / (mg·kg － 1) 给药前 给药后
空白对照组 — 13. 59 ± 0. 28 13. 86 ± 0. 29●●▲▲○○
模型组 45 13. 37 ± 1. 80 12. 54 ± 0. 35＊＊▲▲○○
阳性对照组
1. 00 (阿托品)、
75. 0 (碘解磷定)
14. 05 ± 0. 89 15. 43 ± 0. 19●●＊＊
石油醚部位组 100 14. 21 ± 0. 87 13. 65 ± 0. 39＊＊▲▲○○
乙酸乙酯部位组 100 13. 67 ± 0. 81 12. 84 ± 0. 41＊▲▲○○
水部位组 100 14. 09 ± 0. 49 15. 27 ± 0. 36＊＊●●
注:与空白对照组相比，* P ＜ 0. 05，＊＊ P ＜ 0. 01;与模型组
比，●P ＜ 0. 05，●●P ＜ 0. 01;与阳性对对照组比，▲P ＜ 0. 05，▲▲P ＜
0. 01;与水部位组比，○P ＜ 0. 05，○○P ＜ 0. 01
表 4 乌蕨水部位对小鼠血液胆碱酯酶活力的影响 (珔x ± s，
n =10)
组 别 药物剂量 / (mg·kg － 1) 给药前 给药后
空白对照组 — 13. 59 ± 0. 28 13. 87 ± 0. 31●●▲▲
模型组 45. 0 13. 37 ± 1. 80 12. 57 ± 0. 39＊＊▲▲
阳性对照组
1. 00 (阿托品)、
75. 0 (碘解磷定)
14. 05 ± 0. 89 15. 48 ± 0. 21＊＊●●
水部位低剂量组 100 14. 09 ± 0. 49 15. 40 ± 0. 30＊＊●●
水部位中剂量组 150 13. 40 ± 1. 45 15. 81 ± 0. 35＊＊●●▲
水部位高剂量组 300 14. 09 ± 0. 76 15. 97 ± 0. 56＊＊●●▲▲
注:与空白对照组相比，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与模型组
比，●P ＜ 0. 05，●● P ＜ 0. 01;与阳性对照组比，▲ P ＜ 0. 05，
▲▲P ＜ 0. 01
4 讨论
乐果为有机磷酸酯类农药，是难逆胆碱酯酶抑制剂。
目前，有机磷酸酯类农药中毒主要是采用胆碱酯酶复活药
和阿托品解救。但胆碱酯酶复活药使酶复活的效果因不同
的有机磷酸酯类而异，一般来说，它对内吸磷、马拉硫磷、
对硫磷中毒的疗效好，对敌百虫、敌敌畏中毒有一定的疗
效，而对乐果中毒几乎无效。原因是乐果中毒所形成的磷
酰化胆碱酯酶比较稳定，几乎是不可逆的，加以乐果乳剂
含有苯，可能同时有苯中毒。本实验结果表明，乌蕨水部
位可明显降低乐果致小鼠急性中毒的死亡率，提高血液胆
碱酯酶的活力。乌蕨水部位的低剂量 (100 mg /kg)的药效
强度与阳性对照组相当，而中剂量 (150 mg /kg)、高剂量
(300 mg /kg)的药效强于阳性对照组。其可能的解毒机理
如下:①乌蕨水部位和乐果迅速结合，从而影响乐果的吸
收，阻止乐果与乙酰胆碱酯酶的结合，防止乐果在体内形
成毒性更强的氧化乐果，加速乐果在体内的消除。②乌蕨
水部位和苯结合，阻止苯的吸收并加速苯在体内的消除。
国内外学者对乌蕨的化学成分的研究表明，乌蕨主要含有
黄酮类、有机酸等化学成分［11-15］，黄酮类化合物具有明确
的抗氧化能力，而乌蕨的解毒作用是否与其有关，尚不得
而知。至于乌蕨水部位具体的解毒活性成分及具体的解毒
机制，本课题组正在进行相关的研究中。
参考文献:
［1］ 秦仁昌． 中国植物志:第 2 卷［M］． 北京:科学出版社，
1959:275-279．
［2］ 江苏新医学院． 中药大辞典:上册［M］． 上海:上海人民
出版社，1977:157-158．
［3］ 国家中医药管理局． 中华本草:第 2 卷［M］． 上海:上海
科学技术出版社，1999:110-112．
［4］ 全国中草药汇编编写组． 全国中草药汇编:上册［M］． 2
版． 北京:人民卫生出版社，1996:545．
［5］ 杨敬格，周 俐，刘铭勋，乌蕨对砷和铵的解毒作用［J］．
中国中药杂志，1989，14(3) :46-48．
［6］ 陆定奕，张汉明，罗勤誉． 乌蕨对小鼠 CCl4 肝损伤防治
作用的研究［J］． 上海预防医学杂志，1997，9(4) :
190-191．
［7］ 蔡建秀，黄晓冬． 乌蕨总黄酮水提液的药理试验［J］． 福
建中医学院学报． 2004，14(1) :13-14．
［8］ 周 青，熊小琴，周 俐，等． 乌蕨对四氯化碳诱导肝损
伤小鼠脂质过氧化反应的影响［J］． 四川中医，2006，24
(1) :19-20．
［9］ 刘德章． 乌蕨汤治疗慢性肾衰的临床观察［J］． 江西中医
药，1999，30(3) :21-22．
［10］ 林向东． 乌蕨治疗下肢顽固性溃疡［J］． 海峡药学，1999
(1) :87．
［11］ 陶 晨，杨小生，罗载刚． 乌蕨中抑菌活性成分核磁共振
波谱分析［J］． 贵阳医学院学报，2004，29(6) :495-496．
［12］ Ueno A，Oguri N，Hori K，et al． Pharmaceutical studies on
ferns． 18． Chemical components in leaves of Sphenomeris chu-
sana Copel． and Cyathea fau-Copel［J］． Jpn J Pharmacol，
1963，83:420-422．
［13］ 罗娅君，肖新峰，王照丽． 大叶金花草化学成分的研究
［J］． 中草药，2009，40(2) :190-192．
［14］ 吴晓宁，张春椿． 乌蕨不同部位总黄酮和元素的分析［J］．
浙江中医药大学学报，2009，33(4) :587-588．
［15］ 李明芳，罗娅君，李光辉． 大叶金花草黄酮类化学成分的
研究［J］． 四川师范大学学报:自然科学版，2009，32
(3) :358-360．
293
2014 年 2 月
第 36 卷 第 2 期
中 成 药
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Vol． 36 No． 2