全 文 ：不同种植基地的溪黄草茎 、 叶及全草中 Z a 一轻基熊果酸的含量测定
吴剑峰 ’ , 刘斌 , ,祝晨陈’ , 赖 小平 , (l . 广东省佛山职工医学院 , 广东 佛山 5 28 姗 ; 2 . 天津医学高等专科学校 , 天津 3娜 2 ; 3 . 广州中
医药大学 ,厂东 广州 51 (川巧 )
摘要 : 目的 为确定溪黄草规范化种植基地及药用部位 、 制定相 关标准操作规程 ( so )P 并 实施推广应 用 ,提供基础研究资料 。
方法 采用 R p~ I I PI￡ 测定 不 同种植基地 、 不 同植株部位溪黄草中 Z-a 舟基 熊果酸的含量 。 色谱条件 二 K云〕 Il l as il Rp ` C l: 色谱柱
(4
.
6 ~
K
25 0 ~
,
5脚 ) ; 乙睛 一0 . 05 % 三 氟乙酸溶液 (7 0 . 5 : 29 . 5 )为流动相 ; 流速 0 . s rnL ·而 n 一 ’ ; 柱温 25 ℃ ;检测波长 Z 10 lun 。 结
果 清远种植基地溪黄草中 Z a 一在基熊果酸的含量高于饶平 ;清远 、饶平种植基地澳黄草不 同植株部位中 Za- 舟基熊果酸含量
均 以叶中为高。 结论 应结合其他研究结果进一步考察确立 溪黄草规范化种植基地 ;建议 以溪黄草的叶入药为佳 。
关键词 :澳黄草 ; C AP 基地 ; 高效液相色谱法 ; Za- 舟基熊果酸
中图分类号 : R931 . 6 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1 一 24 94 (2 (X科 )07 一 05 0 一 02
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溪黄草为习用草药 , 来源于香茶菜属 (尺口 6面沁 BI . ) Has -
sk
. 的线纹香茶菜 R . 及$ 〕产及山习ho ides ( uB hc 一 Haln . 0 D . oD n ) H一
Har
,线纹香茶菜两个变种狭基线纹香茶菜 R . 及p沪刃 瓜彻油
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. 邵m 八扳切醚 ( eB nt h am ) H
.
H。 ,细花线纹香茶菜 R . 却han -
hot 瀚 、 ar . 邵`双龙动~ ( Be n ht am ) H . Har 以及同属植物溪黄草
R
. 、
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.
) H ar
之’ 一 2 { , 广东省溪黄草药材的主流商品为
狭基线纹香茶菜3LJ , 临床上广泛应用于治疗 乙型病毒性肝
炎 ,疗效确切 ,且资源丰富 。 我们对狭基线纹香茶菜的抗鸭
乙肝病毒的有效成分群进行了初步研究 , 实验表明狭基线纹
香茶菜中的熊果酸类成分具有显著的抑制乙肝病毒作用 。
本实验以狭基线纹香茶菜的主要成分 a2 一经基熊果酸为指
标 , 应用 R P~ HP LC , 比较不同种植基地及不同植株部位狭基
线纹香茶菜中 2a 一轻基熊果酸的含量 , 以期为确定溪黄草规
范化种植基地及药用部位提供科学依据 , 为按中药材 C A P原
基金项目 : 国家重点科技攻关项 目 ( 9 一 9 29 一 0 1一 23)
作者简介 :吴剑峰 , 硕士 , 副主任药师 eT l : ( 07 5 7 ) 8 281 6 70 2 , 8 2 18 23 13
·
50 0
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则制定相关标准操作规程 ( SO )P 并实施推广应用 , 提供基础
研究资料。
1 仪器和试药
PH l o 高效液相色谱仪 ; PH 1G 31 5 A 二极管阵列检测
器 ; 乙睛为色谱纯 ;水为超纯水 ;其他试剂均为分析纯 ; Za- 经
基熊果酸对照品由广州中医药大学狭基线纹香茶菜课题组
从狭基线纹香茶菜 中提取分 离得到 , 并通过 IR , ’ H一 NM R ,
,
3C
一
N M R
,
M S光谱鉴定 ,经面积归一化法标定其纯度为 98 % ;
溪黄草药材采于广东清远与饶平 C A I〕 基地 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件及系统适应性
色谱柱 : K l l ” 1曰 5 11-RP C 18柱 (4
.
6 ~
x 25 0 ~
,
5脚 ) ; 乙睛
一
0
.
05 % 三氟乙酸溶液 ( 70 . :5 29 . 5) 为流动相 ; 流速 0 . s mL ·
而 n 一 ’ ;柱温 25 ℃ ;检测波长 Z10 nl 。 理论塔板数按 Z-a 经基
E
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熊果酸计不低于 or 《X幻 ; 2a 一羚基熊果酸的保留时间为 14 . 324
而 n , 并且 与其他成分分离良好 。
2
.
2 样品供试液的制备
精密称取干燥至恒重的狭基线纹香茶菜粉末 ( 40 ℃烘箱
中干燥 6 h , 过 团 目筛 )0 . 5 9 , 加甲醇 加毗 回流提取 30 m in ,
滤过 , 残渣再加人 20 m L 甲醇回流提取 30 而 n , 滤过 ,合并两
次滤液 , 水浴蒸干 , 残留物用甲醇溶解并于 or m L 的量瓶中
稀释至刻度 ,用 0 . 45 脚 的微孔滤膜滤过 , 备用 。
.2 3 标准曲线的制备及线性范围考察
精密称取干燥至恒重的 2a 一羚基熊果酸适量 , 加甲醇溶
解并于 l)I .ml 的量瓶中稀释至刻度 , 制备成浓度为 0 . 1 m g’
I
nl
一 ’ 的对照品溶液 。 精密吸取 上述对照品溶液 0 . 5 , 1 . 0 ,
2
.
0
,
4
.
0
,
6
.
0
,
8
.
0
,
10
,
20 拜L , 以选定的色谱条件进样测定 , 以
峰面积 ( )Y 对对照品质量 ( X )进行线性回归 , 回归方程为 : Y
=
5 2
.
57 x
一
0
.
19
, : =
0
.塑哭〕 9 , 线性范围 : 0 .伪 一 2 . 02 1 90
2
.
4 精密度实验
精密吸取上述对照品溶液 2 拜L , 连续进样 5 次 , 以峰面
积计算 ,结果 : RS D = 0 . 92 % ( n 二 5 ) 。
.2 5 重现性实验
取同批次狭基线纹香茶菜药材样品 5 份 , 按 “ 2 . 2’ 实验
方法制备供试液 ,进样 5 匹 ,结果 :测得 2* 经基熊果酸的平
均含量为 0 . 9 15 4 gm · g 一 ’ , sH D = 0 、 56 % ( n = 5 ) 。
2
.
6 稳定性实验
精密吸取同一批次样品溶液 5 拌L , 分别于样品溶液配制
后 。 , 1 , 2 , 4 , 8 , 12 , 24 , 4 8 h 进行测定 , 以峰面积计算 , 结果 :
SH D = 1
.
17 %
, 表明样品溶液放置 48 h 内测定物稳定 。
2
.
7 回 L友率实验
精密称取 5份已知 Za- 羚基熊果酸含量的狭基线纹香茶
菜 0 . 25 。 , 分别准确加入 a2 一经基熊果 酸对照品 。 . 5 m g , 按
,’2 . 2’ 实验方法制备供试液 , 进样 5 匹 , 测定峰面积 , 平均回
收率和 I6 D结果见表 l 。
表 1 a2 一经基熊果酸加样回收率结果
T a b 1 1飞e s l l lis of re e voe 甲 t
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一
h y d眯 y一~ lic ac id药材中的量 对照品加入量 检出量 回收率 平均回收率 E S I )
/雌 /呷 /雌 /% /% /%
0
.
45 0
.
5 0
.男 2 卯 . 2
。 4 0
.
5 0
.
920 97
.
9
0
.
4 0乃 0
.肠 3 102 4 卯 . 3 2 7 1
0
.
4 7 0
.
5 0
.
98 2 10 1
.
2
0
.
45 0
.
5 0
.明龙 95 . 6
2
.
8 样品测定
取广东清远 、饶平种植基地狭基线纹香茶菜全株 、茎 、 叶
0
.
5 9 (
n 二
3)
,按 “ 2 . 2’ 实验方法制备供试液 , 进样 or 沙 ,进行
测定 , 按外标法以峰面积积分值计算 2 。 一羚基熊果酸的含量 ,
结果见表 2 。
表 2 不同种植墓地及 不同植株部位狭基 线纹 香茶菜中 Z a -
经基熊果酸的含量 . n = 3
T a b Z C
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.
n = 3
三丝
清远
药用部位 2a 一经基熊果酸 含量 ( .雌 )/ % 115 )/ %
920854-nUI
饶平
全株
叶
茎
个株
叶
草
0
.
7 1 1 2
1
.
363 4
0
.
4 29 6
0
.
236 1
0
.
45 6 3
O
:奖
3 讨 论
3
.
1 本实验首次建立 了 B P ~川 〕L〔; 测定狭基线纹香茶菜中
ZQ
一羚基熊果酸含量的色谱条件 。 实验比较了不同溶剂系统
和 比例的流动相 , 如甲醇 一水 、 乙睛 一甲醇 一水 、 乙睛一 0 . 1% 盐酸
溶液 、 乙睛 一0 . 05 % 三氟乙酸溶液 , 结 果表明 . 在波 长 2均 nm ,
流速 0 . 8 mI J · im n 一 ’ , 柱温 25 ℃ . 乙睛 一0 . 05 % 三氟乙 酸溶液
(70
.
5
:
29
.
5) 为流动相的条件下 , 可 以 对狭基线纹香茶菜中
2a
一经基熊果酸定量测定 , 且简便 、快速 、 无干扰 , 重现性好 , 结
果准确 。
3
.
2 本实验以狭基线纹香茶菜中 2 。 一羚基熊果酸的含鼠为
指标 , 用正交试验法考察不同提取溶媒 ( 甲醇 、丙酮 、氯仿 ) ,
不同提取时间`30 , 45 , 60 im 。 ) , 不同提取次数 ( 1 一 3 次 )对指
标成分含量的影响 , 结果表明 ,提取溶媒为主要影响因素 , 筛
选并确定了用甲醇 30 m in 重复提取两次的最佳提取方法 。
3
.
3 实验结果表明 , 清远种植基地狭基线纹香茶菜中的 a2 -
经基熊果酸含量高于饶平 , 还需继续跟踪样本 , 进行重复实
验 , 并可结合其他研究结果进 一步考察确立溪黄草规范化种
植基地 ; 清远 、饶平种植基地狭基线纹香茶菜不同植株部位
中 Z a 一经基熊果酸含量测定结果均为 : 叶中的含量最高 , 其次
是狭基线纹香茶菜药材 (茎 、叶自然混合 ) , 而茎中含量最低 ;
叶和茎的含量差异较大 , 提示 , 目前溪黄草人药部位为植物
全株 (茎 、 叶自然混合 ) , 因不同植株的茎 、 叶比例不一 , 故导
致药材质量不稳定 , 难以控制 , 由此建议 以狭基线纹香茶菜
的叶入药为佳 。
参考文献
「1〕 江苏新医学院 . 中药大辞典 ( 下册 )〔M ] . 七海 : 卜海科学技术出
版社 , 19 88 : 25 11 .
「2] 湖南省卫生厅 . 湖南省中药材标准仁S〕. 长沙 : 湖南科学出版
社 , 19 3 : 32 3 .
仁3〕 陈建南 ,赖小平 , 刘念 . J卜东溪黄草药材的原植物调查及商品
鉴定「J ] . 中药材 , 一9 6 . 19 ( 2 ) : 7 3 .
(收稿日期 : 入” 3一 05 一2 6 )
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中国药学杂志 2。 拜年 7 月第 39 卷第 7 期 l(j ,川 hP u mr j , 2〔火拜 uIJ 飞 , Vo l . 3 9 肠 . 夕 · 501