全 文 ：图 2 天麻定量测定中红外光谱模型
表 2 天麻中天麻素含有量的预测结果
序号 预测值 /% 实测值 /% 绝对误差 /% 相对误差 /%
1 0. 63 0. 67 0. 04 5. 97
2 0. 75 0. 72 0. 03 4. 17
3 0. 73 0. 69 0. 04 5. 80
4 0. 89 0. 92 0. 03 3. 26
5 0. 67 0. 71 0. 04 5. 63
4 结论
本实验通过中红外光谱衰减漫反射技术，采用偏最小
二乘法建立了天麻中天麻素含有量的中红外模型，可快速
测定天麻中天麻素含有量，为饮片企业的质量检验降低了
成本，便于推广使用。
参考文献:
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HPLC法测定烫狗脊配方颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛
周燕园
(桂林医学院，广西 桂林 541004)
收稿日期:2011-06-23
作者简介:周燕园 (1978—) ，女 (回族) ，副教授，理学硕士，研究方向:药物、天然药物、中药及民族药的质量与成分分析及药理
活性。Tel: (0773)5891880，E-mail:zyy@ glmc． edu． cn
摘要:目的 建立同时测定烫狗脊配方颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的高效液相色谱法。方法 运用正交试验对样品的
提取条件进行优化，采用高效液相色谱法测定原儿茶酸和原儿茶醛。色谱柱为 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 (4. 6
mm × 150 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 1%磷酸水溶液 (10 ∶ 90) ;体积流量为 1. 0 mL /min;检测波长为 258 nm;柱
温为 35 ℃。结果 优化得到的样品提取方法为 50%甲醇 10 倍量，超声提取 60 min。原儿茶酸和原儿茶醛的线性范围
分别是0. 028 2 ～ 0. 282 mg /mL (r = 0. 999 94)、0. 009 52 ～ 0. 095 2 mg /mL (r = 0. 999 93) ，平均回收率分别是 98. 45%
(RSD为 1. 33%) ，98. 76% (RSD为 1. 51%)。结论 结果表明该方法准确可靠，重复性好，结果稳定。
关键词:HPLC;烫狗脊配方颗粒;原儿茶酸;原儿茶醛
中图分类号:R927. 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)09-1822-04
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第 34 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2012
Vol． 34 No． 9
烫狗脊配方颗粒是狗脊饮片经砂烫、水提、浓缩、干
燥、制粒等工序制成的单味中药配方颗粒剂［1］。狗脊为蚌
壳蕨科植物金毛狗脊 Cibotium barometz (L．)J． Sm． 的干燥
根茎，味苦、甘，性温，归肝、肾经，具有祛风湿、补肝
肾、强腰膝的功效，用于治疗风湿痹痛，腰膝酸弱，下肢
无力等症［2-3］。《中国药典》采用砂烫法对其进行炮制。砂
烫使狗脊易于去毛和粉碎及有效成分的煎出，狗脊炮制后
有效成分含有量增加，刺激性成分含有量降低，故狗脊炮
制可起到减毒增效的双重作用［4］。原儿茶酸和原儿茶醛是
狗脊的活性成分，现代药理研究证实［5-7］，原儿茶酸具有增
加冠脉流量，抑制体外血小板聚集和抗菌活性，原儿茶醛
具有扩张冠状动脉，降低心肌耗氧量，抑制血小板聚集，
抗肿瘤，清除自由基和抗脂质过氧化、抗炎的作用。烫狗
脊活血、镇痛、抗炎的药理作用与原儿茶酸和原儿茶醛的
药理作用相吻合。根据《中国药典》2010 年版一部附录中
药质量标准的研究要求，本实验参考文献 ［8-13］，建立了
同时测定原儿茶酸和原儿茶醛含有量的 HPLC 方法，为烫
狗脊配方颗粒的质量控制提供科学实验依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司) ;
Agilent 8453 紫外-可见分光光度计 (美国安捷伦公司) ;
BP211D电子分析天平 (德国赛多利斯) ;LG16-W 型高速
离心机 (北京医用离心机厂) ;SB3200-T 超声清洗仪 (上
海必能信超声有限公司) ;电热恒温鼓风干燥箱 (上海跃
进医疗器械厂) ;SHZ-D 循环水式真空泵 (巩义市予华仪
器有限公司)。烫狗脊配方颗粒 (江阴天江药业有限公司，
批号:0906059、0912104、1003085，规格:每包 1 g，相当
于 10 g药材饮片) ，原儿茶酸对照品 (中国药品生物制品
检定所，批号:110809-200604) ;原儿茶醛对照品 (中国
药品生物制品检定所，批号:110810-200205) ;甲醇、乙
腈为色谱纯 (Fisher公司) ，水为高纯水，其余试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 采用 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 1%磷酸水溶
液 (10 ∶ 90) ;体积流量 1. 0 mL /min;检测波长 258 nm;
柱温 35 ℃。在此条件下，样品中原儿茶酸、原儿茶醛与其
它峰均能达到基线分离，阴性无干扰，见图 1。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取原儿茶酸和原儿
茶醛对照品适量，用 50% 甲醇溶解分别制成 0. 282，
0. 095 2 mg /mL的溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取烫狗脊配方颗粒 1 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 10 mL，称定
质量，超声 60 min，放冷，再称定质量，用 50%甲醇补足
质量，摇匀，滤过，取续滤液离心即得。
2. 2. 3 阴性对照溶液的制备 按处方工艺制备缺烫狗脊的
阴性样品，按 2. 2. 2 项下方法制备阴性对照溶液。
1. 原儿茶酸 2. 原儿茶醛
图 1 混合对照品 (A)、阴性对照样品
(B)和烫狗脊配方颗粒样品 (C)
HPLC色谱图
2. 3 专属性试验 分别精密吸取原儿茶酸和原儿茶醛混合
对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液各 10 μL，进样
分析，结果阴性对照溶液在原儿茶酸和原儿茶醛对照品保
留时间处，无色谱峰，实验表明其他成分不干扰原儿茶酸
和原儿茶醛的测定。
2. 4 供试品处理的正交试验
2. 4. 1 因素水平的确定 预试验结果显示，影响烫狗脊配
方颗粒的主要提取工艺条件为含甲醇量、溶剂用量和超声
提取时间，因此，采用 L9(3
4)正交设计法对这 3 个影响
因素进行考察和优化，样品用量为 1 g，因素水平表见表
1。按正交表设计方案进行试验，以原儿茶酸和原儿茶醛的
含有量为评价指标，试验结果见表 2。
表 1 提取工艺因素水平
水平
因素
(A)含甲醇量 /% (B)甲醇体积 /倍 (C)超声时间 /min
1 50 10 30
2 75 20 60
3 100 30 90
2. 4. 2 最佳提取工艺的确定 表 2 极差大小显示，各因素
影响程度依次为:A ＞ C ＞ B，由极差分析应选择最佳工艺
为 A1C2B1。由表 3 可知，因素 A有显著性差异，即含甲醇
量对提取率有显著性影响。综合直观分析和方差分析结果，
可得出最佳提取工艺条件，即 50%甲醇 10 倍量，超声提取
60 min。
2. 4. 3 验证试验 按上述优化的最佳条件，烫狗脊配方颗
粒 (批号:0906059)制备 3 份供试品溶液，每份 1 g，进
样 10 μL分析。结果样品中的原儿茶酸、原儿茶醛的平均
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表 2 L9(3
4)正交试验设计及结果 (n =3)
试验号
因素
A B C D (误差)
原儿茶酸 / (mg·g － 1) 原儿茶醛 / (mg·g － 1) 质量分数 / (mg·g － 1)
1 1 1 1 1 1. 503 0 0. 496 5 1. 999 5
2 1 2 2 2 1. 602 2 0. 648 7 2. 250 9
3 1 3 3 3 1. 608 1 0. 502 1 2. 110 2
4 2 1 2 3 1. 253 0 0. 463 8 1. 716 8
5 2 2 3 1 1. 103 9 0. 403 7 1. 507 6
6 2 3 1 2 1. 185 3 0. 418 9 1. 604 2
7 3 1 3 2 0. 820 3 0. 421 6 1. 241 9
8 3 2 1 3 0. 717 8 0. 393 7 1. 111 5
9 3 3 2 1 0. 701 3 0. 388 9 1. 090 2
K1 2. 120 1. 653 1. 572 1. 532
K2 1. 610 1. 623 1. 686 1. 699
K3 1. 148 1. 602 1. 620 1. 646
R 0. 972 0. 051 0. 114 0. 167
表 3 方差分析
方差来源 离方差平方和 自由度 方差 F值 P 显著性
A 1. 419 2 0. 710 32. 650 ＜ 0. 05 *
B 0. 004 2 0. 002 0. 091 ＞ 0. 05
C 0. 020 2 0. 010 0. 454 ＞ 0. 05
D (误差) 0. 043 2 0. 022
质量分数分别为1. 614 3 mg /g、0. 684 8 mg /g，平均总质量分
数为2. 299 1 mg /g，表明烫狗脊配方颗粒提取工艺稳定
可行。
2. 5 线性关系考察 精密吸取原儿茶酸、原儿茶醛对照品
溶液 1、2、4、6、8 mL分别置 10 mL量瓶中，加 50%甲醇
溶解并稀释至刻度，制成不同质量浓度的两种对照品溶液，
所得质量浓度标准液及原质量浓度标准溶液各取 10 μL，
进样分析。分别以进样质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐
标，计算得回归方程:原儿茶酸为 Y = 41 365. 833 5X +
11. 254 089，r = 0. 999 94;原儿茶醛为 Y = 16 390. 286 7 X －
3. 798 771 3，r = 0. 999 93。结果表明，原儿茶酸在 0. 028 2 ～
0. 282 mg /mL，原儿茶醛在0. 009 52 ～ 0. 095 2 mg /mL范围
内，均与峰面积呈良好的线性关系。
2. 6 精密度试验 上述色谱条件下，取混合对照品溶液
(原儿茶酸质量浓度:0. 17 mg /mL，原儿茶醛质量浓度:
0. 078 mg /mL) ，连续进样 5 次，每次 10 μL，记录峰面积，
计算精密度。原儿茶酸、原儿茶醛峰面积的 RSD 值分别为
0. 69%和 0. 58 %，表明仪器精密度良好。
2. 7 重复性试验 精密称取同一批号供试品 (批号:
0906059) ，按定量测定方法操作，进行 6 次平行实验，结
果原儿茶酸的平均质量分数为 1. 617 8 mg /g，RSD 为
1. 26%;原儿茶醛的平均质量分数为0. 694 5 mg /g，RSD 为
1. 58%，表明含有量测定方法重复性良好。
2. 8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 (批号:
0906059)10 μL，分别于 0、2、6、12、18、24 h进样，记
录所测组分峰面积，计算原儿茶酸、原儿茶醛色谱峰面积
的 RSD 分别为 1. 19%、1. 83%，表明供试品溶液在 24 h
内稳定性良好。
2. 9 加样回收试验 精密称取已知含有量的烫狗脊配方颗
粒样品 (批号:0906059)约 0. 5 g，6 份，置具塞锥形瓶
中，分别精密加入对照品溶液 (原儿茶酸质量浓度为
0. 164 mg /mL，原儿茶醛质量浓度为 0. 07 mg /mL)5mL，
按供试品溶液方法制备，进样 10 μL，测定峰面积，计算
含有量，结果原儿茶酸和原儿茶醛的平均回收率 (n = 6)
98. 45% (RSD为 1. 33% )及 98. 76% (RSD 为 1. 51%)。
结果见表 4。
表 4 加样回收率测定结果 (n =6)
化合物
样品原有
量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
原儿茶酸 0. 810 7 0. 82 1. 622 1 98. 95 98. 45 1. 33
0. 823 3 0. 82 1. 624 5 97. 71
0. 823 2 0. 82 1. 622 8 97. 51
0. 822 0 0. 82 1. 648 7 100. 81
0. 821 2 0. 82 1. 619 2 97. 32
0. 818 5 0. 82 1. 625 6 98. 43
原儿茶醛 0. 345 3 0. 35 0. 689 5 98. 34 98. 76 1. 51
0. 350 7 0. 35 0. 690 5 97. 09
0. 350 6 0. 35 0. 693 4 97. 94
0. 350 2 0. 35 0. 702 5 100. 66
0. 349 8 0. 35 0. 692 7 97. 97
0. 348 6 0. 35 0. 700 6 100. 57
2. 10 样品测定 分别精密称取 3 批号的烫狗脊配方颗粒，
按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液，进样 10 μL，记录原儿
茶酸和原儿茶醛的峰面积，由线性方程计算各自质量分数，
测定结果见表 5。
表 5 样品中原儿茶酸和原儿茶醛测定结果 (n =3)
批号
原儿茶酸 /
(mg·g － 1)
RSD /% 原儿茶醛
/
(mg·g － 1)
RSD /%
0906059 1. 619 8 1. 25 0. 697 8 1. 18
0912104 1. 717 2 1. 41 0. 775 3 1. 35
1003085 1. 662 8 1. 37 0. 659 7 1. 43
3 讨论
3. 1 本研究考察了甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液流
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动相系统，以及不同磷酸的量对分离效果的影响，最后结
合文献报道［8-13］和实验结果选择了甲醇-0. 1% 磷酸溶液
(10 ∶ 90)作为流动相，流动相中含有 0. 1%的磷酸可以使
原儿茶酸和原儿茶醛得到了良好的分离，各组分色谱峰的
峰形和分离度均达到要求。
3. 2 经紫外扫描，原儿茶酸在 258 nm 处有最大吸收峰，
原儿茶醛在 280 nm 处有最大吸收峰，因供试品溶液在
280 nm处干扰峰相对较多，原儿茶酸和原儿茶醛在 258 nm
处都有较好的吸收，且干扰峰较少，峰形良好，故本试验
采用 258 nm的检测波长对原儿茶酸和原儿茶醛的含有量进
行准确检测。
3. 3 本实验考察了含甲醇量、溶剂用量和超声提取时间 3
个因素对烫狗脊配方颗粒中原儿茶酸与原儿茶醛提取率的
影响，并进行了正交试验。结果表明，在 10 倍量 50%甲
醇，超声提取 60 min的条件下，原儿茶酸与原儿茶醛的提
取率最高。
3. 4 《中国药典》2010 年版一部狗脊项下规定了原儿茶
酸的检测标准，本实验结果表明，原儿茶酸与原儿茶醛成
分的含有量可同时作为狗脊不同配方颗粒的质量评价指标，
其含有量标准尚需结合多厂家、多批次的配方颗粒含有量
测定结果而定。
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包小红， 周 娟， 伍丕娥
(四川省食品药品检验所，四川 成都 610097)
收稿日期:2011-07-25
作者简介:包小红 (1977—) ，女，主管药师，研究方向:药物质量标准。Tel: (028)87877195，E-mail:baoxiaohong114@ tom． com
摘要:目的 针对 4 种不同剂型的益母草制剂，建立统一的盐酸水苏碱定量测定方法，快速有效的评价当前益母草制
剂的质量情况。方法 采用 HPLC-UV法，色谱柱为强阳离子交换色谱柱 (SCX柱) ，流动相为乙腈-0. 05mol /L磷酸二
氢钾-磷酸 (15 ∶ 85 ∶ 0. 15) ，检测波长 192 nm。结果 盐酸水苏碱在 0. 238 ～ 19. 04 μg的范围内，线性关系良好 (r =
0. 999 7)。平均回收率分别为 99. 0% (益母草颗粒)、98. 1% (益母草膏)、99. 5% (益母草片)、102. 0% (益母草胶
囊) ，RSD均小于 2%。结论 建立的定量测定方法专属性强、重复性好，操作简便，可以有效地评价不同样品之间
的质量差异。
关键词:益母草;盐酸水苏碱;高效液相色谱法;标准
中图分类号:R927. 2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)09-1825-04
益母草为唇形科益母草属植物 Leonurus japonicus Houtt． 的地上部分，原名茺蔚，据文献 ［1-2］可知，其主要化学
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2012 年 9 月
第 34 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2012
Vol． 34 No． 9