全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:贵州省卫生厅 －黔南民族医学高等专科学校科技联合基金项目 (gzwkj2013 － 2 － 006)。
作者简介:陈明 (1965 －)，男，副教授，主要从事药理学及药物分析的研究。E-mail:462050602@ qq. com
通信作者:段萍 (1964 －)，女，副主任药师，主要从事化学药及中成药制剂分析的研究。E-mail:Duanping1964@ 163. com
HPLC法测定乌蕨中原儿茶酸及原儿茶醛的含量
陈 明1 段 萍2 徐作刚2 万红才2
1. 黔南州民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558000;
2. 黔南州食品药品检验所，贵州 都匀 558000
【摘 要】 目的:建立乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛的含量测定方法。方法:采用 HPLC 法测定，色谱柱:迪马 Diamonsil ODS C18
(4. 6mm ×150mm，5μm);Agilent ODS C18 (4. 6mm × 250mm，5μm);流动相:0. 4% 磷酸溶液 (A) － 乙腈 (B)，梯度洗脱;流速:
1. 0ml /min，进样量:5μl;柱温 30℃;检测波长:280nm。结果:原儿茶酸在 0. 16176 － 1. 2132μg /ml 内呈良好的线性关系，r = 0. 99996;
平均回收率为 96． 70%，ＲSD为 1. 30%;原儿茶醛在 0. 06030 － 0. 45225μg /ml内呈良好的线性关系，r = 0. 99996，平均回收率为 96. 18%，
ＲSD为 1. 10%。结论:该方法测定乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛的含量，结果准确，重复性、稳定性好。
【关键词】 HPLC;乌蕨;原儿茶酸;原儿茶醛
【中图分类号】Ｒ284. 2 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2014)18 － 0011 － 02
乌蕨 Stenoloma chusanum (L. )Ching 为鳞始蕨科乌蕨
属的多年生草本植物，别名乌韭、石发、土川连、孔雀尾、
大叶金花草、小叶野鸡尾、蜢蚱参、细叶凤凰尾等，分布
较为广泛，是一种常见的中草药。其具有一定的抗菌活性，
有“万能解毒药”之称［1 － 3］。乌蕨中含有荭草苷、荭草苷
－ 2 － O － B － D －吡喃葡萄糖苷、牡荆素、芹菜素、丁香
酸、原儿茶酸、原儿茶醛、香草酸和龙胆酸等化合物。目
前采用紫外分光光度法测定乌蕨中总黄酮、总酚酸含
量［4 － 7］。未见报道测定原儿茶酸、原儿茶醛的含量。为此，
本文采用 HPLC法测定乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛的含量。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 岛津 LC － 2010A高效液相色谱仪;Agilent1260
高效液相色谱仪;岛津 2401 紫外分光光度计;SK250LHC
超声波清洗器 (上海科导仪器有限公司);梅特勒 AG135、
AL204 电子天平。
1. 2 试剂与材料 原儿茶酸 (批号:0809 － 200604)、原
儿茶醛 (批号:110810 － 200506)对照品由中国药品生物
制品检定所提供;乙腈 (色谱纯)、水为娃哈哈纯净水、其
余试剂均为分析纯。乌蕨样本共 7 批，自然干燥 10 天后，
地下部分洗净，全草于 90℃干燥 5 小时，取地上部分、地
下部分分别粉碎，过 10 目筛，即得供试样品，见表 1。
表 1 乌蕨样本采集表
N0 批号 产地 备注
1 20130728 贵州省都匀市马鞍山 自采
2 20130915 贵州省都匀市茶园水库 自采
3 20130930 重庆市永川区茶山竹海 自采
4 20131006 贵州省平塘县掌布乡 自采
5 20131123 云南省腾冲县腾冲机场 自采
6 20131203 贵州都匀市马鞍山 自采
7 20131208 贵州都匀市高寨乡 自采
2 方法与结果
2. 1 色谱条件［8 － 13］ 色谱柱:迪马 Diamonsil ODS C18
(4. 6mm × 150mm，5μm)、Agilent ODS C18 (4. 6mm ×
250mm，5μm);流动相:0. 4% 磷酸溶液 (A) － 乙腈
(B)，梯度洗脱，0 ～ 20min，98% － 92% A;20 ～ 35min，
92% －98% A;35 ～ 40min，98% A;流速:1. 0ml /min;进
样量:5μl;柱温:30℃;检测波长:280nm。理论板数以
原儿茶醛峰计算应不低于 3000。
2. 2 对照品溶液配制 精密称取原儿茶酸、原儿茶醛对照
品适量，加 65%乙醇制成每 1ml含原儿茶酸 0. 08mg、原儿
茶醛 0. 03mg的溶液。
2. 3 供试品溶液配制［14、15］ 取供试样品约 2. 0g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入 65% 乙醇 50ml，称定重
量，加热回流 60 分钟，放冷，再称定重量，用 65%乙醇补
足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 4 峰纯度考察 取对照品溶液、供试品溶液各 5μl，分别注
入液相色谱仪，依法测定。结果表明:对照品原儿茶醛的紫外
扫描图在 280nm 处有最大吸收，原儿茶酸的紫外扫描图在
260nm处有最大吸收，在 280nm处有较大吸收。乌蕨供试液中
原儿茶酸、原儿茶醛峰的紫外扫描图与对照品原儿茶酸、原儿
茶醛峰的紫外扫描图谱一致，且达到纯度要求。
2. 5 线性关系考察 精密称取原儿茶酸 10. 11mg 置 10ml
量瓶中，加 65%乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取 2ml 置
25ml量瓶中，加 65%乙醇溶解并稀释至刻度;原儿茶醛对
照品 10. 05mg置 100ml量瓶中，加 65%乙醇溶解并稀释至
刻度，精密量取 3ml置 10ml量瓶中，加 65%乙醇溶解并稀
释至刻度，得原儿茶酸 (0. 08088mg /mL)、原儿茶醛
(0. 03015mg /ml)对照品溶液。精密吸取原儿茶酸、原儿茶
醛对照品溶液 2、5、8、10、15μl，注入液相色谱仪，按
“2. 1 项”下的色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积为纵
坐标，质量数 (μg)为横坐标进行线性回归计算，原儿茶
酸、原儿茶醛线性回归方程分别为:A = 1731800. 51C －
787. 30 (r = 0. 99996)、A = 46117473. 35C － 1951. 57 (r =
0. 99996)。且原儿茶酸在 0. 1618 － 1. 213μg /ml 内呈良好的
线性关系;原儿茶醛在 0. 06030 － 0. 4522μg /ml 内呈良好的
线性关系。
2. 6 精密度考察 精密吸取“2. 5 项”下原儿茶酸、原儿
茶醛对照品溶液 5μl，连续进样 6 次，测定峰面积，原儿茶
酸、原儿茶醛峰面积的 ＲSD 分别为 0. 10%、1. 06%，结果
表明此方法有良好的精密度。
2. 7 稳定性考察 取供试品溶液分别于 0、4、8、12、16、
24h进样，进样量 5μl，测定原儿茶酸、原儿茶醛峰面积，
原儿茶酸、原儿茶醛峰面积的 ＲSD 分别为 0. 89%、
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
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1. 22%，说明供试品溶液在 24h内稳定性良好。
2. 8 重复性考察 取供试样品，按“2. 3 项”下方法配制
6 份供试品溶液，按“2. 1 项”下方法，测定峰面积。原儿
茶酸、原儿茶醛的平均含量为 2. 0938mg /g、0. 9221mg /g，
ＲSD分别为 1. 74%、0. 78%。
2. 9 加样回收率试验 精密称取 6 份已测定含量的样品
1. 0g (原儿茶酸、原儿茶醛的平均含量为 2. 0938mg /g、
0. 9221mg /g)，置具塞锥形瓶中，精密加入原儿茶酸、原儿
茶醛混合对照品溶液 ［精密称取原儿茶醛对照品 10. 05mg，
置 100mL量瓶中，精密量取 50ml置 500ml量瓶中，另精密
称取原儿茶酸对照品 10. 33mg 置同一 500ml 量瓶中，加
65%乙醇溶解并稀释至刻度，制得原儿茶酸、原儿茶醛混
合对照品溶液 (0. 02066mg /ml、0. 01005 mg /ml)］ 50ml，
称定重量，加热回流 60 分钟，放冷，再称定重量，用 65%
乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样 5μl，
记录色谱图，另取“2. 5 项”下原儿茶酸、原儿茶醛对照
品溶液 5μl，同法测定。平均回收率分别为 96. 70%，
96. 18%;ＲSD分别为 1. 30%，1. 10%。结果见表 2。
表 2 乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛的回收率实验结果
成分
样品称量
(g)
样品中
含量 (mg /g)
加入量
(mg /g)
测得量
(mg /g)
回收率
(%)
平均回收
率 (%)
ＲSD
(%)
原儿茶酸
1. 0257 2. 1476 1. 0330 3. 1470 96. 74
1. 0080 2. 1106 1. 0330 3. 0893 94. 74
0. 9573 2. 0044 1. 0330 3. 0101 97. 36
0. 9985 2. 0907 1. 0330 3. 0805 95. 82
1. 0991 2. 3013 1. 0330 3. 3074 97. 40
1. 0982 2. 2994 1. 0330 3. 3129 98. 11
96. 70 1. 30
原儿茶醛
1. 0257 0. 9458 0. 5025 1. 4278 95. 93
1. 0080 0. 9295 0. 5025 1. 4078 95. 19
0. 9573 0. 8827 0. 5025 1. 3687 96. 72
0. 9985 0. 9207 0. 5025 1. 3974 94. 87
1. 0991 1. 0135 0. 5025 1. 5000 96. 83
1. 0982 1. 0127 0. 5025 1. 5027 97. 53
96. 18 1. 10
2. 10 样品测定 取供试样品 (地上部分与地下部分)分
别配制供试品溶液，进样 5μl，记录峰面积，测定含量。见
表 3、表 4。
表 3 乌蕨 (地上部分)原儿茶酸、原儿
茶醛测定结果 (n = 3)mg /g
N0 批号 原儿茶酸 原儿茶醛
原儿茶酸、原儿
茶醛总含量
1 20130728 1. 88 0. 92 2. 80
2 20130915 1. 67 0. 57 2. 24
3 20130930 2. 17 0. 65 2. 82
4 20131006 2. 68 1. 29 3. 97
5 20131123 1. 15 0. 27 1. 42
6 20131203 0. 76 0. 23 0. 99
7 20131208 0. 87 0. 39 1. 26
表 4 乌蕨 (地下部分)原儿茶酸、原儿
茶醛测定结果 (n = 3)mg /g
N0 批号 原儿茶酸 原儿茶醛
原儿茶酸、原儿茶
醛总含量
1 20130728 0. 84 0. 45 1. 29
2 20130915 0. 54 0. 48 1. 02
3 20131006 0. 68 0. 21 0. 89
3 讨论
3. 1 采挖季节对乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛的含量有影
响，冬季原儿茶酸、原儿茶醛含量下降约一半;地上部分
含原儿茶酸、原儿茶醛的含量比地下部分高约 1 倍以上。
3. 2 比较 65%乙醇、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮作溶
剂，加热回流 1 小时制备的供试品溶液，以 65%乙醇制备
的供试品溶液所测原儿茶酸、原儿茶醛的含量最高;65%
乙醇作溶剂，加热回流与超声各 1h，加热回流所测原儿茶
酸、原儿茶醛的含量较高。
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(收稿日期:2014. 07. 12)
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