全 文 ：2009年 5月第 3期
No.3　May　2009 　　　　　　　　　　
河 南 中 医 学 院 学 报
JOURNALOFHENANUNIVERSITYOFCHINESEMEDICINE
　　　　　　　　　　第 24卷　总第 142期Vol.24 SerialNo.142
不同产地半边旗中 11β -羟基 -15-氧 -对映贝壳杉
-16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖的含量测定
QuantitativeAnalysisof11 β -hydroxy-15 -oxo-ent-kaur-16-en-19-oicAcid
19-β -D-GlucosidefromPterisSemipinnataL.inDiferentAreasbyHPLC
龚先玲 GongXianling1 ,陈志红 ChenZhihong2 ,梁念慈 LiangNianci1
1.广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室 , 广东 湛江　524023
GuangdongKeyLaboratoryforDevelopmentandResearchofNaturaralDrugs,
GuangdongMedicalCollege, Zhangjiang, Guangdong, China524023
2.广东医学院分析中心 , 广东 湛江　524023
AnalysisCenter, GuangdongMedicalColege, Zhangjiang, Guangdong, China524023
摘要:目的:建立半边旗中 11β -羟基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖的含量测定方法。方法:
采用 HPLC法 , ODSC18柱(25mm×4.6mm, 5 μm);流动相为甲醇 -4mM的醋酸铵水溶液(2∶3),流速为 1.0ml· min-1 ,检
测波长为 242nm。结果:11β -羟基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖在 0.8 ～ 4.8μg范围内呈良
好的线性关系(r=0.9998);半边旗中 11β -羟基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19 -酸 19-β -D-葡萄糖的含量 , 广东
湛江产最高 , 为 4.609 mg· g-1生药 , 广东廉江最低为 1.515 mg· g-1生药。结论:本方法简便 、可靠 , 适用于半边旗中 11β -羟
基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖的含量测定。
Abstract:Objective:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationof11β -hydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oicacid
19-β -D-glucosideinPterissemipinnataL..Methods:HPLCmethodwasestablished.ODSC18 columnwasused, methanol-4
mMCH3COONH4 solution(2∶3)asmobilephase, attheflowrateof1.0 ml· min-1 andtheUVdetectionwavelengthat242 nm.Re-sults:Thelinearof11β -hydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oicacid19-β -D-glucosidewas0.8 ～ 4.8 μg(r=0.
9998).AndthecontentofitswasthehighestinPterissemipinnataL.fromZhangjiang, Guangdong(4.609mg· g-1), thelowestin
PterissemipinnataL.from Lianjiang, Guangdong.Conclusion:HPLCmethodissimpleandreliablefordeterminationof11β -
hydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oicacid19-β -D-glucosideinPterissemipinnataL..
关键词:半边旗;11β -羟基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖;产地;HPLC
Keywords:PterissemipinnataL;11β -hydroxy-15-oxo-ent-kaur-16 -en-19 -oicacid19 -β -D-glucoside;Habitat;
HPLC
中图分类号 CLCnumber:R284.1　　文献标识码 Documentcode:A　　文章编号 ArticleID:1672-6839(2009)03-0024-03
　　半边旗 PterissemipinnataL.为凤尾蕨科凤尾蕨属植
物 [ 1] , 有清热 、解毒 、消肿等功效 [ 2] 。半边旗中含有多种贝
壳杉烯类二萜及其苷类 [ 3～ 5] , 11β -羟基 -15-氧 -对映贝
壳杉 -16-烯 -19 -酸(简称 5F, 结构见图 1)和 11β -羟
基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19 -酸 19-β -D-葡
萄糖(简称 5F的苷 ,结构见图 2)是其中的两种。据文献 [ 6]
报道 , 含有 α, β -亚甲基环戊酮结构的贝壳杉烯类二萜类化
合物 , 具有较高的反应活性 , 可经 Michael加成反应 ,与含巯
基的酶结合而导致酶失活 ,从而显示出这类化合物的细胞毒
基金项目:国家自然科学基金(编号:3987099), 广东医学院
面上项目(编号:M2006061)
作用 。 5F及 5F的苷含有 α, β -亚甲基环戊酮结构的贝壳杉
烯类二萜类化合物 , 本课题组研究表明 , 5F具有较强的抗肿
瘤作用 [ 4 ～ 5, 7 ～ 8] , 我们推测 , 5F的苷也应有较强的抗肿瘤作
用。为了更加充分合理的开发利用半边旗药材资源 , 综合利
用其有效成分 , 在研究不同产地半边旗中 5F含量的基础上 ,
我们采用 HPLC法对广东不同产地半边旗中 11β -羟基 -15
-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖的
含量进行了测定 , 并对半边旗中 5F的苷与 5F的含量进行了
比较。
·24·
DOI :10.16368/j.issn.1674-8999.2009.03.038
2009年 5月第 3期
No.3　May.　2009　　　　
河 南 中 医 学 院 学 报JOURNALOFHENANUNIVERSITYOFCHINESEMEDICINE
不同产地…QuantitativeAnalysis…　龚先玲…GongXianling… 　　　　
第 24卷　总第 142期
Vol.24 SerialNo.142
1　仪器与试药
1.1　仪器
Agilent-1200高效液相色谱仪 , DAD检测器;瑞士梅特
勒公司 AE-240型电子分析天平。
1.2　试药
11β -羟基 -15 -氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19 -酸
19-β -D-葡萄糖对照品(本课题组分离纯化 , 中山大学分
析测试中心测试 , 广东医学院天然药物研究与开发重点实验
室鉴定),流动相所用甲醇为色谱醇 , 其他试剂均为分析纯 ,
半边旗样品由本实验室苟占平博士鉴定为半边旗。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为ODSC18柱(25mm×4.6mm, 5μm);流动相为
甲醇 -4 mM的醋酸铵水溶液(2∶3);DAD检测器 , 检测波
长 242 nm;流速 1 ml· min-1 ,柱温为 25℃。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取干燥至恒重的 11β -
羟基 -15-氧 -对映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-
葡萄糖对照 品 10.00 mg, 加甲醇定容 至 25 ml, 制成
0.4 mg· ml-1的对照品溶液。
2.2.2　供试品溶液的制备　半边旗药材经过粉碎 ,过 40目
筛 , 称取该粉末约 2.0g, 加 20 ml甲醇 , 80℃下水浴加热回流
2次 ,每次 2 h。过滤 , 合并滤液 , 移入 25 ml容量瓶中 , 定容 ,
取该溶液适量用 0.45 μm的微孔滤膜过滤 , 作为供试品溶
液 , 备用。
2.3　线性关系考察
精密吸取 111β -羟基 -15 -氧 -对映贝壳杉 -16 -
烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖对照品溶液 2、 4、6、8、 10、12
μl,按照上述色谱条件测定峰面积 , 记录峰面积 , 以峰面积
(Y)和质量(X)(质量单位:μg)进行回归 ,求得回归方程Y=
554.6107X+3.2400, r=0.9998。线性范围为 0.8 ～ 4.8μg。
2.4　精密度试验
精密吸取对照品溶液 10 μl, 连续进样 5次 ,测定峰面积
值 , 其 RSD为 1.01%。表明仪器精密度良好。
2.5　稳定性试验
取同一供试品溶液(广东湛江产), 每隔 2 h测定一次 ,
结果表明 , 样品在 8 h内稳定 , 样品中的峰面积的 RSD为
0.90%(n=5)。
2.6　重现性试验
取同一批号的样品 5份(广东湛江产), 按 “供试品溶液
的制备”方法制备供试品溶液 , 分别注入高效液相色谱仪 10
μl,测定的峰面积值 , 其 RSD为 1.26%。表明本实验方法重
现性好。
2.7　加样回收率试验
称取已测得含量的样品 5份 , 精密加入一定量的对照
品 , 按样品测定方法处理 , 取 10 μl注入高效液相色谱仪 , 测
定的峰面积值 ,并计算回收率。结果平均回收率为 96.7%,
RSD为 1.79%。
2.8　样品测定
分别吸取各供试品溶液 10 μl, 注入高效液相色谱仪 ,记
录峰面积 , 由回归方程计算其含量 , 结果见表 1及图 3。从表
1可以看出:广东湛江产半边旗中 11β -羟基 -15-氧 -对
映贝壳杉 -16-烯 -19-酸 19-β -D-葡萄糖(5F的苷)
的含量最高 , 广东茂名第二 , 广东广州郊区第三 ,广东廉江最
低;而且相同产地 5F苷的含量略高于苷元 5F的含量;广东
广州郊区半边旗 5F含量高 , 但 5F苷的含量较低;广东湛江
产半边旗 5F含量较高 , 5F苷的含量最高 [ 9 ～ 11] 。
表 1　不同产地半边旗样品中含量测定结果
样品产地 含量 /mg· g-1(生药) 平均值 /mg· g-1(生药) RSD/%
广东廉江 1.507 1.515 1.42
1.498
1.539
广东茂名 3.674 3.630 1.08
3.599
3.616
广东湛江 4.664 4.609 1.12
4.561
4.603
广东广州郊区 1.766 1.722 1.80
1.703
1.698
·25·
2009年 5月第 3期
No.3　May.　2009　　　　
河 南 中 医 学 院 学 报JOURNALOFHENANUNIVERSITYOFCHINESEMEDICINE
不同产地…QuantitativeAnalysis…　龚先玲…GongXianling… 　　　　
第 24卷　总第 142期
Vol.24 SerialNo.142
3　讨论
半边旗产台湾 、福建部分地区 、广东 、广西等地 , 主要分
布于热带 , 模式标本采自广东 [ 12] 。 广东地处我国大陆最南
端 , 气候温暖潮湿 , 十分有利于蕨类植物半边旗的生长。因
此半边旗药材主要采自广东。
不同产地半边旗中 5F苷的含量不同 ,但半边旗中 5F和
5F的苷的含量并不一定呈正相关的增长 , 可能与它们生长
的环境以及它们在生物体内的代谢有关。这些为今后进一
步综合开发利用半边旗资源提供依据。
参考文献:
[ 1]丁恒山.中国药用孢子植物 [ M] .上海:上海科技出版社 , 1982:
104.
[ 2]冉先德.中华药海·下册 [ M] .哈尔滨:哈尔滨出版社, 1993:596
-596.
[ 3] MurakamiT, TanakaN.Occurrence, structureandtaxonomicimpli-
cationsoffernconstituents[ J] .NewYork:Wien.Springer-Verlag,
1988:284.
[ 4]张晓 ,崔燎 ,田中信寿 ,等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究
[ J] .中国药学杂志 , 1997, 32(1):37-38.
[ 5]张晓 ,李金华 ,何承伟 ,等.半边旗二萜类化合物的植化及抗肿瘤
活性初步研究 [ J] .中国药学杂志 , 1999, 34(8):512-513.
[ 6] FujiK, XuHJ, TatsumiH, etal.Designandsynthesisofantitumor
compoundsbasedonthecytotoxicditerpenoidsfromthegenusRabdosia
[ J] .ChemPharmBul, 1991, 39:685-689.
[ 7]李金华 ,梁念慈 ,莫丽儿 ,等.半边旗 5种成分体外细胞毒活性比
较及构效关系分析 [ J] .药学学报 , 1998, 33(9):641-644.
[ 8]戴滨 ,崔燎 ,吴铁 ,等.半边旗有效成分 5F注射液体内外抗肿瘤药
理作用研究 [ J] .中国药理学通报 , 2003, 19(5):508-511.
[ 9]梁统 ,覃燕梅 ,邓亦峰 ,等.高效液相色谱测定半边旗抗肿瘤有效
成分 5F的含量 [ J] .中国中药杂志 , 2002, 37(3):209-211.
[ 10]梁统 ,苟占平 ,梁念慈.半边旗抗肿瘤有效成分含量变化的研究
[ J] .中国药科大学学报 , 2002, 33(5):401-403.
[ 11]邓亦峰 ,梁念慈.半边旗二萜类化合物的液 -质联用图谱鉴定
[ J] .中药材 , 2005, 28(4):278-280.
[ 12]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第三卷·第
一分册)[ M] .北京:科学出版社 , 1990:46-48.
收稿日期:2009-02-26
作者简介:龚先玲(1975-), 女 ,硕士学位 , 讲师 ,主要从事天
然药物化学的教学与研究工作。 E-mail:xlgong@163.com。
编辑:程延安
·26·