全 文 ： 收稿日期：2009-01-09
基金项目：漳州师范学院科学研究资助项目（SK08015）
作者简介：陈晓清（1971-），女，福建闽侯人，硕士，讲师，从事植物生理生化研究。


半边旗和阴地蕨粗多糖抗鱼病病原菌活性初步研究
陈晓清，陈郑斌
(漳州师范学院 生物科学与技术系，福建 漳州 363000)

摘 要；采用 4 种方法提取阴地蕨和半边旗多糖，并利用圆形纸片法进行抑菌实验。结果表明：阴地蕨和半
边旗多糖提取物显示出不同程度的抑制 3 种鱼病病原菌的活性，阴地蕨多糖提取物对肠炎病病原菌的最小抑
菌浓度为 6.25 mg/ml。
关键词：半边旗；阴地蕨；多糖；抗菌活性；鱼病病原菌
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2009.02.012
中图分类号：R28 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2009)02-0048-03

Antimicrobial Activities of Crude Polysaccharide Extracts from
Pteris semipinnata and Scepteridium ternatum against Fish Disease Pathogen
CHEN Xiao-qing, CHEN Zheng-bin
(Department of Biology Science and Technology, Zhangzhou Normal College, Zhangzhou 363000, Fujian China)

Abstract: Scepteridium ternatum and Pteris semipinnata polysaccharide were extracted by four
methods. These crude extracts were tested against three kinds of fish disease pathogen using the agar
disc diffusion method. The results showed that polysaccharide extracts from Scepteridium ternatum
and Pteris semipinnata have activities against fish disease pathogen in different levels. The
minimum inhibition concentrations (MICs) of polysaccharide extracts of Scepteridium ternatum
against Ameromonas punctata was 6.25 mg/ml.
Key words: Pteris semipinnata; Scepteridium ternatum; polysaccharide; antimicrobial activities;
fish disease pathogen

随着水产养殖业的迅速发展，鱼病问题日趋严重，且一直是制约水产养殖发展的主要因素之一。
由于近年来集约化、工厂化水产养殖方式的迅速发展，养殖产量的提高及抗生素等抗菌药物的使用，
使养殖用水体日益恶化，水产品药物残留居高不下，这不仅导致水产养殖业病害越来越严重，而且还
威胁到人的健康。为此，人们致力于从生物体中寻找天然产物来防治鱼类病害[1]。
近年来研究发现，中草药具有抑制鱼病病原菌的活性，且具有毒副作用小、残留少、无污染等优
点。它不仅可以提高防病治病水平、增加养殖效益，也是发展绿色水产业、开展健康养殖的需要，更
有利于人类健康。因此，中草药在防治鱼病方面具有广阔的应用前景[2]。我们的前期工作也发现，一
些蕨类植物的多糖提取物具有抗鱼病病原菌的作用[3]。本文拟从阴地蕨和半边旗中提取多糖，并对其
抗鱼病病原菌活性进行初步研究，以期为进一步开发利用蕨类药用资源提供基础性资料。


2009,38(2):48-50.
Subtropical Plant Science
第 2 期 陈晓清,等：半边旗和阴地蕨粗多糖抗鱼病病原菌活性初步研究 ﹒49﹒
1 材料与方法
1.1 材料
阴地蕨(Scepteridium ternatum)和半边旗(Pteris semipinnata)采自漳州芝山公园。受试菌包括 3 种鱼
病病原菌：烂尾病病原菌 Aeromonas sobria、赤皮病病原菌 Pseudomonas fluorecens、肠炎病病原菌
Ameromonas punctata。菌种来自中国科学院水生生物研究所。培养基为粘细菌培养基与普通培养基。
1.2 方法
1.2.1 多糖提取[4] 阴地蕨和半边旗新鲜样品，洗净，晾干并经 60 ℃烘干，粉碎，称取干粉，分成 4
等份，按 1∶20 加蒸馏水浸泡过夜，分别做如下处理：
1) 水提法：将浸泡后的样品在 100 ℃水浴中提取 1 h；
2) 微波法：将浸泡后的样品于微波炉中中火微波处理 25 min；
3) 冻融法：将浸泡后的样品在－20 ℃冰冻，室温解冻，如此反复冻融 3 次；
4) 综合法：冻融法和微波法相结合，即反复冻融后再按微波法处理。
将上述处理样品于 80 ℃水浴中提取 1 h，其间搅拌数次；离心，取上清液；60 ℃水浴浓缩至 20～
30 ml。往浓缩液中加入 3 倍体积无水乙醇，离心，取沉淀物；用 3%三氯乙酸脱蛋白，冷冻干燥即得
多糖粗品。
1.2.2 简单理化性质分析 糖含量测定[5]以葡萄糖为标准品，苯酚—硫酸法测定。蛋白质含量测定[6]采
用考马氏亮蓝染色法，以牛血清白蛋白为对照，制作标准曲线。硫酸根离子含量测定[5]以氯化钡—明
胶比色法测定。将粗多糖配成 1%溶液，以 PHS 酸度计室温测定 pH 值。
1.2.3 抗菌实验 将阴地蕨和半边旗粗多糖配成 0.15 g/ml 溶液，用于抗菌实验。
采用圆形纸片法[7]：分别刮取 3 种供试菌菌苔于 5 ml 无菌水中，振荡摇匀得菌悬液，倒入溶化并
冷却至 40～45 ℃的相应培养基中，摇匀后，迅速分装于培养皿中，待凝固后，取消毒的圆形滤纸(φ6
mm)分别用移液枪注入多糖样品 20 µl，略干后贴于培养基平板上，同时作一溶剂空白对照。置恒温箱
中培养（细菌 36～37 ℃，18～24 h；真菌 28～30 ℃，48～72 h）后观察结果，测量抑菌圈直径。以上
步骤均按无菌条件操作，每样品设 2 个平行样，取平均值。
最小抑菌浓度（MIC）测定[8]：采用圆形纸片法(方法同上)，将多糖溶液稀释成 50、25、12.5、6.25
mg/ml 浓度梯度，以未见抑菌圈的最低浓度为 MIC。
2 结果与分析
2.1 多糖提取
采用 4 种方法提取阴地蕨和半边旗多糖，以 3%三氯乙酸除蛋白。由表 1 可知，不同种的蕨类植物
多糖提取率存在较明显差异。采用不同的提取方法，提取率也存在差异， 其中以综合法的提取率最高。
表 1 不同提取方法的阴地蕨和半边旗粗多糖得率及成分比较
提取率(%) 总糖含量(%) 蛋白质含量(%) 硫酸根含量(%) pH
方法
阴地蕨 半边旗 阴地蕨 半边旗 阴地蕨 半边旗 阴地蕨 半边旗 阴地蕨 半边旗
水提法 2.11 1.93 1.32 2.18 0.60 0.56 11.20 11.75 4.85 3.42
微波法 2.57 2.61 2.26 3.77 0.58 0.50 18.75 12.62 3.64 3.96
冻融法 2.46 2.49 3.96 2.46 0.52 0.62 23.75 12.84 3.08 3.52
综合法 2.79 2.94 2.50 2.99 0.58 0.58 14.70 12.08 3.04 3.12
第 38 卷 ﹒50﹒
2.2 多糖提取物抗鱼病病原菌活性
阴地蕨和半边旗多糖提取物对供试的 3 种鱼病病原菌显示出不同程度的抑制作用。从表 2 可以看
出，当浓度为 0.15 g/ml 时，阴地蕨和半边旗多糖提取物对鱼病病原菌的抑菌圈直径为 11.2～16.0 mm，
这两种多糖提取物抗鱼病病原菌活性没有明显差异。粗多糖的最小抑菌浓度存在一定的差异，在 6.25～
25.0 mg/ml 之间，其中，阴地蕨多糖提取物对肠炎病病原菌的 MIC 最小，为 6.25 mg/ml，阴地蕨多糖
提取物对赤皮病病原菌、半边旗多糖提取物对烂尾病病原菌的 MIC 最大，都是 25.0 mg/ml。
表 2 阴地蕨和半边旗多糖提取物抗鱼病病原菌活性
阴地蕨 半边旗 项目
P.f A.p A.s P.f A.p A.s
抑菌圈直径(mm) 11.2 16.0 15.8 14.2 14.0 11.8
MIC(mg/ml) 25.0 6.25 12.5 12.5 12.5 25.0
注：P.f, 赤皮病病原菌；A.p, 肠炎病病原菌；A.s, 烂尾病病原菌。
3 讨 论
中草药是中国医药的瑰宝。利用中草药防治鱼病是原药材的药用成分与营养价值的有机结合，
而且其资源广泛、易种易收、使用简便、成本低廉、效果持久、毒副残留低甚至无毒副残留。这些都
是化学药品所无法比拟的。目前中草药在渔业上的应用研究已发展到增强免疫功能，防治病毒性、细
菌性、真菌性鱼病，驱虫、杀虫，保健助消化、改进水产品质量等项目。因而，发掘、整理中草药科
学理论，运用中草药药理及中草药化学等学科知识，建立中草药防治鱼病的技术体系则非常重要[2]。
然而，中草药大都不是以成分含量的测定被人们认可，而主要是依据多年积累的实用有效性，因而在
很大程度上限制了中草药的开发利用[2]。本实验从阴地蕨和半边旗中采用不同的方法提取多糖，具有
抑制3种鱼病病原菌的活性。但蕨类植物的多糖成分较为复杂，因此，有必要进一步分离、纯化有效成
分，从而更充分、更合理地挖掘其药用价值。
参考文献：
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