全 文 ：◇论　　著◇
半边旗提取物 5F对高转移卵巢癌
细胞 HO-8910PM侵袭转移的影响
何太平 1 ,莫丽儿2 ,梁念慈 1
(1.广东医学院生物化学与分子生物学研究所 , 2.广东天然药物研究与开发重点实验室 , 广东 湛江　524023)
收稿日期:2004 - 08 - 18,修回日期:2004 - 10 - 08
基金项目:国家自然科学基金资助项目 (N o 39870900);湛江市
“ 988”兴湛计划资助项目(N o ZK0104)
作者简介:何太平(1971 - ),男 , 硕士 ,主管检验技师 ,研究方向:生
化药理学 , Tel:0759-2388581-7, Fax:0759-2284104, E-m ail:
taip inghe@ 163. com;
梁念慈(1941 -),男 , 教授 ,博士生导师 , 研究方向:生化
药理学 , Tel:0759-2388501, E-m ail:ncliang@ gdm c. edu. cn
中国图书分类号:R 282. 71;R 284.1;R 730.52;R 73-37;
R 737.702. 2
文献标识码:A 文章编号:1001 -1978(2005)05 - 0540 -05
摘要:目的　研究半边旗提取物 5F(以下简称 5F)对人高转
移卵巢癌细胞 HO-8910PM 转移相关能力的影响及其作用的
机制。方法　以 MTT法检测 5F对高转移卵巢癌细胞 HO-
8910 PM细胞增殖的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验
检测 5F对 HO-8910PM细胞粘附能力的影响;用 T ransw e ll小
室法检测 5F对 HO-8910 PM细胞的侵袭能力和趋化运动能
力的影响;W estern b lo t法检测 5F对 HO-8910PM 细胞 NF-κB
(P65)和 VEGF蛋白表达的影响 。结果　50 μmo l L - 1的
5F作用细胞 6 h后 能抑制 HO-8910PM细胞体外侵袭人工
基底膜 、趋化运动和粘附能力 , 抑制率分别为 (37.57 ±
0. 62)%, (28. 42±0.67)%, (46.07±4.49)%;5F能明显下
调 HO-8910PM 细胞中 NF-κB(P65)和 VEGF蛋白的表达。
结论　5F能抑制高转移卵巢癌细胞 HO-8910PM的侵袭 、运
动和粘附能力。 5F抗肿瘤侵袭转移的作用机制与 NF-κB
(P65)和 VEGF蛋白的表达下调有关。
关键词:半边旗提取物 5F;侵袭;运动;粘附;转移;卵巢癌
　　半边旗 (P teri sem ipinnata L, PsL)又名半边莲 、
半边菊 ,属凤尾蕨科植物 ,广泛分布于南方各省 ,民
间常用于清热解毒 、利水消肿 、治疗疳积 、风湿痛等 。
半边旗提取物 5F(5F from Pteri sem ipinna ta L, 5F)
是从中药半边旗中提取的一种二萜类化合物 ,其化
学名为 11α-羟基-15-氧-16-烯-ent-贝克杉烷-19酸 ,
分子式为 C20H 28O4 ,分子量为 332.434。 5F经我们
课题组发现具有明显的抗肿瘤活性 ,能抑制 RB磷
酸化[ 1] ,增强 K562细胞 MAPK的活性及表达 [ 2] ,并
影响 K562细胞中 bc l-2、bax、c-jun、c-fos癌基因的表
达[ 3] 。但有关半边旗提取物 5F抗肿瘤侵袭转移的
研究未见报道。核因子-κB(nuclea r factor-kappaB ,
NF-κB)在肿瘤细胞外基质的降解 、细胞的粘附和移
动以及转移后肿瘤细胞局部的新生血管形成等多环
节中都起着重要作用[ 4] , NF-κB与肿瘤的侵袭与转
移的关系己经被证明越来越密切 。该文用体外实验
的方法研究半边旗提取物 5F对 HO-8910PM细胞侵
袭 、运动和粘附能力的影响 ,并用蛋白印迹的方法检
测 5F对核因子-κB P65亚基 (nuc lear factor-kappaB
P65 subunit)和血管内皮生长因子 VEGF (vascu lar
endo thelia l g row th fac to r)蛋白表达的影响 ,探讨 5F
抗肿瘤侵袭转移的可能作用机制 。
1　材料与方法
1. 1　实验材料 　人高转移卵巢癌细胞 (HO-
8910PM)购自上海细胞生物所 ,由浙江省肿瘤研究
所许沈华等 [ 5]建立 。细胞在含体积分数为 10%小
牛血清 , 1×105 U L -1青霉素和 100 mg L- 1链霉
素的 RPM I 1640完全培养基中 , 37℃、5% CO 2饱和
湿度孵箱培养 。细胞经过消化传代 ,取对数生长期
的细胞进行培养。
1. 2　药品与试剂　超级小牛血清购自杭州四季青
公司;RPM I 1640培养基购自 G ibco公司;PVPF滤
膜(孔径 10 μm ,直径 13 mm)购自 O smonics公司;
Fib ronectin购自 Sigma公司;M atrigel购自 BD公司;
4×上样缓冲液 (125 mmol L -1 Tris-HC l, pH6.8,
4% SDS , 10%β-巯基乙醇 , 20%甘油 , 0.04%溴酚
蓝);NF-κB(P65)小鼠 IgG单抗 、VEGF小鼠 IgG单
抗 、β-actin山羊 IgG多抗购自 Santa C ruz公司 ,使用
时用 TBST溶液按1 ∶200 ～ 1 ∶2 000稀释;辣根过氧
化物酶标记山羊抗小鼠 IgG、辣根过氧化物酶标记
马抗山羊 IgG购自北京中山公司 ,使用时用 TBST
溶液按 1 ∶4 000 ～ 1 ∶10 000稀释。半边旗提取物
5F由广东医学院天然药物开发中心提供 ,实验前
5F用 DMSO溶解 ,培养液稀释 , DMSO终浓度为
0.1%(实验证明该浓度对细胞无影响)。
1. 3　MTT法测定 5F作用 6 h对 HO-8910PM细
胞增殖的影响　选取对数生长期的 HO-8910PM 细
540 中国药理学通报　Chinese Pharmacolog ical Bulletin　2005M ay;21(5):540 ～ 4
胞 ,经胰酶消化 、台盼蓝染色后在血球计数板上计
数 ,确保活细胞在 97%以上。调整细胞浓度为每孔
8 000个 (每孔 100 μl),加到 96孔培养板中 。将培
养板放入 37℃、5%CO2孵箱中培养 。待细胞贴壁
后取出培养板 ,加入不同浓度 5F 1 μl,使其终浓度
分别为 6.25、12.5、25、50、100、200 μmo l L -1 ,每个
浓度设 3个平行孔;同时设置空白对照组 、溶剂对
照组和调零孔。培养板放回孵箱继续培养 6 h ,取出
培养板 ,每孔加入 MTT 50 μg /10 μl,培养板再放回
孵箱孵育 4 h。吸出上清液 ,加入 200 μl二甲基亚
砜 。在平板摇床摇 10 m in使甲臜完全溶解 。用酶
标仪测 570 nm 波长处每孔的吸光度 (A)值 。
　　细胞增殖抑制率 ( IR%) =[ (对照组 A值 -处理组 A
值) /对照组 A值 ] ×100%
1. 4　重组基底膜侵袭 、趋化性运动实验 [ 6] 　将
PVPF滤膜用指甲油 man icure贴在 T ransw e ll小室
上 ,风干。在膜的外表面涂纤粘蛋白 Fibronec tin 5
μg /10 μl,置超净台内风干 ,膜内表面涂基底膜成分
M atrige l 5μg(10 μl),使之干燥 ,形成人工重组基底
膜;在 24孔板内加入 0.1%BSA-RPM I 1640 ,每孔
600μl。收集对数生长期的 HO-8910PM细胞 ,悬浮
于含 0.1% BSA RPM I1640培养基中 ,终浓度为 1×
10
9 L -1。将 Transw e ll小室浸于 24孔板的条件培
养基中 ,每个小室加细胞悬液 100 μl,再分别加入不
同浓度 5F 1 μl, 使其终浓度分别为 12.5、 25、 50
μmo l L- 1 ,对照组加入等量的 PBS。 37℃、5% CO2
温箱内孵育 6 h。将 Transw ell小室取出 ,滤膜用甲
醇固定 1 m in ,苏木精染色 3m in,水洗 ,伊红染色 10
s,水洗 ,用 PBS浸湿的棉签擦去滤膜内表面的细胞;
用封片胶将滤膜封于载玻片上 ,于 400 ×显微镜下
计数穿过 PVPF滤膜的细胞数 。每膜计数上下左右
中 5个随机不同视野 ,每组平行设 3个滤膜。
运动实验与侵袭实验相比 ,只是 PVPF滤膜上
不需铺 Matrige l。
侵袭抑制率( IR%)=[ (对照组穿膜细胞数 -给药组穿
膜细胞数) /对照组穿膜细胞数 ] ×100%
运动抑制率( IR%)=[ (对照组穿膜细胞数 -给药组穿
膜细胞数) /对照组穿膜细胞数 ] ×100%
1. 5　细胞粘附实验 [ 6] 　96孔培养板每孔铺上 Ma-
trige l 10 μg /30 μl,置超净台内风干;培养板每孔用
2%BSA 20 μl封阻 ,置 37℃培养箱中保温 1 h, PBS
冲洗并弃去;收集对数生长期的 HO-8910PM细胞 ,
悬浮于含 0.1% BSA-RPM I 1640培养基中 ,终浓度
为 8×108 L -1。用不同浓度 5F预处理细胞 5 h ,
使其终浓度分别为 12.5、25、50 μmo l L -1 ,每孔加
入预处理细胞 100 μl,对照组加入等量的 PBS ,并
设 0.1% BSA-RPM I1640培养基调零孔 , 37℃培养 1
h;弃培养液 ,以 PBS液轻轻冲洗 2遍弃去未粘附细
胞;每孔加入 50 μlMTT (1 g L -1) ,继续培养 4
h。倾去 MTT,每孔加入 100 μl DM SO ,用微量振荡
器摇振 15 m in,使甲臜完全溶解 ,用酶标仪测 570
nm波长处每孔的吸光度 (A)值 。每组设 3个平行
孔 ,实验重复 3次。
粘附抑制率( IR%)=[ (对照组 A值 -处理组 A值) /
对照组 A值 ] ×100%
1. 6　W estern blot　取对数生长期的 HO-8910PM
细胞 ,稀释成 1×109 L - 1 ,接种于 50 mm的培养皿
中培养 , 每皿 5 m l。待细胞贴壁后 ,分别用 PBS、
0.1% DMSO和终浓度为 12.5、25、50 μmo l L- 1的
5F处理 HO-8910PM细胞 24 h,收集细胞 , PBS洗涤
2次 ,加入预冷的细胞裂解液 100 μl,用细胞刮将细
胞刮下 ,并转移至预冷的 1.5 m l离心管中 ,置于碎
冰上冰育 20 m in后 ,于 4℃, 12 000×g离心 15m in。
上清液转移至另一 1.5m l离心管中 ,参照考马斯亮
蓝微盘比色法 [ 7]测定蛋白质含量。分别将相同含
量的蛋白样品和 4×上样缓冲液以体积比 3∶1的比
例混合 , 100℃水中煮沸 5m in使蛋白质变性。W est-
e rn blo t实验方法参考《分子克隆实验指南》, SDS-
PAGE电泳后电转移至 PVPF膜上 , 5%脱脂牛奶封
闭后加入第一抗体于室温孵育 2 h ,用 TBST缓冲液
洗涤 3次 ,每次 10m in,加入第二抗体于室温孵育 2
h,再用 TBST缓冲液洗涤 3次 ,每次 10 m in,加入发
光试剂 (ECL)显色 ,以 β-actin作内参 ,用图像分析
软件 Scion Image进行光密度积分值分析 。
1. 7　统计处理　采用 SPSS11.0统计软件包 One-
W ay Anova与 Bon-fe rroni(方差齐)或 Tamhane s T2
(方差不齐 )检验进行统计学处理。
2　结果
2. 1　5F作用 6 h后对 HO-8910PM细胞增殖的影
响　100 μmol L - 1 5F作用细胞 6 h后 ,细胞增殖
抑制率为 (22.17 ±2.13)%;而当 5F 的浓度为
12.5、25、50 μmo l L -1时 ,细胞增殖抑制率均少于
10%,且与对照组相比 ,差异无显著性 (P >0.05),
可以认为 5F处理 6 h后对细胞增殖无明显的影响 ,
故选择 12.5、25、50μmo l L -1的 5F作为体外侵袭 、
趋化性运动 、粘附实验的实验浓度 。
2. 2　5F对 HO-8910PM细胞侵袭基底膜成分能力
的影响　用 12.5、25、50 μmol L -1的 5F处理 HO-
8910PM细胞 6 h后 ,能明显抑制细胞体外侵袭基底
膜成分 Matrige l的能力 ,其抑制率分别是 (9.51 ±
541 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2005M ay;21(5)
4.34)%、(28.78 ±1.99)%、(37.57 ±0.62)%,见
Tab 1 , Fig 1A、B。
Tab 1　Effect of 5F on inva sion abil ity o f
HO-8910PM cells(–x±s, n=3)
G roup
Con cen tration
/μmo l L- 1
C ell coun t
/field
Inh ib itory rate
/%
C on trol - 82. 00±1. 91 0. 00±2. 33
0. 1% DMSO - 84. 00±0. 65 - 2. 43±0. 79
5F 12. 5 74. 20±3. 56* 9. 51±4. 34*
25 58. 40±1. 64** 28. 78±1. 99**
50 51. 20±0. 51** 37. 57±0. 62**
　　*P<0. 05 , **P<0. 01 vs con trol
2. 3　5F对 HO-8910PM细胞体外趋化运动能力的
影响　用 12.5、25、50 μmo l L -1的 5F处理 HO-
8910PM细胞 6 h后 ,细胞体外趋化运动能力明显降
低 ,其抑制率分别是 (4.03 ±2.16)%、(12.90 ±
1.88)%和 (28.42±0.67)%,见 Tab 2, Fig 1 C、D。
Tab 2　Effect of 5F on m igra tion of HO-8910PM cells
toM a trigel(–x±s, n=3)
G roup
Con cen tration
/μmo l L- 1
C ell coun t
/field
Inh ib itory rate
/%
C on trol - 99. 20±1. 20 0. 00±1. 21
0. 1% DMSO - 101. 00±2. 00 - 1. 81±2. 01
5F 12. 5 95. 20±2. 14 4. 03±2. 16
25 86. 40±1. 87** 12. 90±1. 88**
50 71. 00±0. 67** 28. 42±0. 67**
　　**P <0. 01 vs contro l
F ig 1　HO-8910PM cells passed through PVPF m em brance
　　Figure show HO-8910PM cells on PVPF m emb ranes s tainedw ith he-
m atoxylin and eos in. They w ere ob served by ligh tm icroscopy at a m agn ifi-
cation of ×400　A:con trol( in invas ion test);B:50μm o l L- 1 5F ( in
invas ion test);C:con trol( in m igrat ion test);D:50μmo l L - 1 5F ( in
m igration tes t)
2. 4　5F对 HO-8910PM细胞粘附基底膜成分能力
的影响　用 12.5、25、50 μmo l L -1的 5F处理 HO-
8910PM细胞 5 h后 ,测定其在短时间 (1 h)内与
Matrige l的粘附能力。结果表明:5F使 HO-8910PM
细胞粘附 Matrige l的能力明显降低 ,其抑制率分别
是(22.47±1.12)%, (32.58±2.25)%, (46.07 ±
4.49)%,见 Tab 3。
Tab 3　Effect o f 5F on adhesion of HO-8910PM cells
toM a trigel (–x±s, n=3)
G roup
C oncentration
/μm ol L - 1 A 570 nm Inhibitory rate /%
Control - 0. 89±0. 02 0. 00±2. 25
0. 1% DM SO - 0. 91±0. 05 -2. 25±5. 62
5F 12. 5 0. 69±0. 01** 22. 47±1. 12
25 0. 60±0. 02** 32. 58±2. 25
50 0. 48±0. 04** 46. 07±4. 49
　　**P<0.01 vs con trol
2. 5　5F作用 HO-8910PM细胞 24 h后对 NF-κB
(P65)和 VEGF蛋白表达的影响　用 12.5、25、50
μmo l L- 1的 5F 处理 HO-8910PM 细胞 24 h后 ,
Western b lo t分析目的蛋白的表达。结果发现 , 5F
能够明显抑制 NF-κB(P65)和 VEGF蛋白的表达 ,
见 Fig 2, 3。
F ig 2　Effect of 5F on the expression of
NF-κB(P65), VEGF and β-actin
　　1:con trol;2:0.1% DMSO;3:12. 5μm ol L - 1 5F;4:25μmo l
L - 1 5F;5:50μmo l L- 1 5F
F ig 3　 Im age ana ly sis of expression changes o fN F-κB(P65)
and VEGF after treatm ent w ith 5F for 24 h
3　讨论
542 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2005M ay;21(5)
NF-κB是一类几乎存在于所有细胞内 ,能与多
种基因的启动子或增强子上的 NF-κB结合位点发
生特异性结合并启动基因转录的一组转录调节因
子 。NF-κB是由亚单位 P50和 P65组成的异源二聚
体 , P50与 DNA直接结合 , P65具有转录活性。静
息状态下 , NF-κB和抑制性蛋白 I-κB结合滞留于细
胞浆中 ,在一定刺激作用下 I-κB解离 , NF-κB释放
进入细胞核激活靶基因。多种致癌因素通过激活
NF-κB ,促进细胞生长 、抗凋亡 ,使细胞发生恶性转
化并促进肿瘤细胞的转移 ,因此抑制 NF-κB成为肿
瘤治疗的新靶标之一 [ 8 ～ 10] 。VEGF作为内皮细胞特
异性有丝分裂原 ,具有促进肿瘤血管生成的功能 ,
VEGF可以增加组织因子的产生 ,激活凝血酶原和
基质金属蛋白酶-2 (m atrixme tallopro te inase-2, MMP-
2),诱导尿激酶型纤溶酶原激活剂 (urokinase-type
plasm inogen activator, uPA)、组织型纤溶酶原激活剂
( tissue plasm inogen ac tivato r, tPA)、 I型纤维酶原激
活物的抑制因子 (即血浆酶原激活剂的抑制剂 PA I-
I和基质胶原酶)以及细胞粘附分子的表达 ,促使细
胞外基质 (extracellular matrix, ECM )的降解 ,使血
管通透性增加 ,血浆蛋白外渗和血管外基底膜纤维
素沉积 ,为肿瘤细胞的生长和新生毛细血管网的建
立提供最佳基质 [ 11] ,因此 VEGF在肿瘤的生长和转
移过程中起着重要的调控作用 ,与肿瘤的复发和预
后紧密相关。 Huang等[ 12]的研究表明无论是在体
内还是体外 ,当 NF-κB活性被阻断后均能明显抑制
三个主要的血管促形成因子 VEGF,白细胞介素-8
( interleukin-8, IL-8)与基质金属蛋白酶-9(matrix
me talloprote inase-9, MMP-9)的活性表达 ,从而减少
肿瘤组织中新生血管形成 ,减少侵袭和转移的发生 。
另外 Huang等[ 4]在研究中还发现 ,前列腺癌细胞中
NF-κB表达下调能使裸鼠体内局部肿瘤中的新生血
管形成与生长速度减慢 ,形成转移灶的能力降低 ,进
而阻碍了卵巢癌细胞的转移 ,证实了通过阻断 NF-
κB的活性 ,可以抑制卵巢癌细胞的生长与转移 。我
们的研究发现 ,用 5F处理 HO-8910PM细胞 24 h
后 ,明显下调细胞中总 NF-κB(P65)的表达 ,且具有
剂量依赖性 , 5F还明显抑制 VEGF蛋白的表达。其
原因是 5F抑制了 HO-8910PM细胞中 NF-κB的表
达或活性 , 调控了 VEGF 的转录 , 进一步影响到
VEGF的合成 ,这可能是 5F抗 HO-8910PM 细胞侵
袭转移的作用机制之一 ,具体的原因与机制有待于
更深入的研究 。
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Effect of 5F from P teri sem ipinnata L on invasion and m etastasis of
highlym etastatic ovar ian carc inoma HO-8910 PM ce lls in vitro
HE Ta i-ping1 ,MO Li-e r2 , LIANG N ian-ci1
(1. Institute of B iochem istry andM olecular B iology, GuangdongM edica l College,
2. Guangdong Key Laboratory for R esearch and D evelopment of Natural Drugs, Zhanjiang　524023, China)
Abstract:Ami 　To investiga te the inh ib ito ry effect
and its posssible mechanism o f 5F from P teris sem ipin-
na ta L on the metastasis-assoc iated ab ility o f human
highly metasta tic ovarian carcinoma HO-8910PM cells
543 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2005M ay;21(5)
in vitro.M ethods　MTT assay w as used to exam ine the
effect of 5F on p ro lifera tion o f HO-8910PM ce lls after
24 hours trea tmen t;Transwe llChamber assay w as pe r-
fo rmed to de te rm ine the effect of 5F on invasion and
m igra to ry capacity of the ce lls;E ffect on adhesion po-
tentia l ofHO-8910PM cells w as tested by cell-M atrigel
adhesion assay;The expression leve ls o fNF-κB(P65)
and VEGF pro teins we re assessed by Western b lot a-
nalysis. Results　5F significantly inh ib ited invasion,
m igra tion, and adhesion capacity o fHO-8910PM ce lls
in vitro, their inhibitory rates after treatment w ith 50
μmo l L -1 5F fo r 6 h w ere (37.57 ±0.62)%,
(28.42±0.67)%, (46.07±4.49)%. 5F d istinctly
down-regulated the expressions o f NF-κB (P65) and
VEGF pro te in. Conclusion　5F can inhibit the m ig ra-
tion, invasion and adhe sion o f HO-8910PM cells in
vitro , Its possiblemechanism may be invo lved in the re-
duction o f the expression leve l of NF-κB (P65) and
VEGF. 5F m ight be poten tial drugs to inhibit tumor
metastasis.
Key words:5F from P teri sem ipinnata L; invasion;
m ig ration;adhesion;metastasis;ovarian carcinoma
碘化 N-正丁基氟哌啶醇
对豚鼠心房肌细胞乙酰胆碱敏感性钾通道的影响
刘　冰1 ,石刚刚 1 ,高分飞 1 , Lu tz Po tt2
(1.汕头大学医学院药物研究室 , 广东 汕头　515041;2. Institut fü r phy siolog ie, Ruhr-Un iversitä t Bochum, D-44780 Bochum, Germany)
中国图书分类号:R-332;R 322. 11;R 329.2;R 329.24;
R 331.36;R 392.11;R 971. 9
文献标识码:A 文章编号:1001 -1978(2005)05 - 0544 -07
摘要:目的　研究碘化 N-正丁基氟哌啶醇 (F2)对豚鼠心房
肌细胞乙酰胆碱敏感性钾通道(KACh)的影响 ,探讨其对 KACh
的作用机制。方法　采用膜片钳全细胞记录方法 , 测定 F2
对原代培养的豚鼠心房肌细胞乙酰胆碱敏感性钾电流
IK(ACh)的影响。结果　 细胞外给予 F2对豚鼠心房肌细胞
IK(ACh)呈可逆性 、浓度依赖性的阻断作用。 细胞内添入抗水
解的 GTP类似物 GTP-γ-S 后 , 结果同前。 细胞内给予 50
μmo l L -1 F2对 IK(ACh)无作用。结论　F2是豚鼠心房肌细
胞 KACh的一种快速通道阻断剂 , 发挥作用部位在细胞膜外
侧 , 作用位点在钾通道本身 ,与乙酰胆碱受体无关。
关键词:碘化 N-正丁基氟哌啶醇;心房肌细胞;乙酰胆碱敏
感性钾通道(KACh);膜片钳全细胞记录;G 蛋白激活钾通道
　　碘化 N-正丁基氟哌啶醇 (F2)是汕头大学医学
院药物研究室合成的一个新化合物。经过多年的研
究 , F2显示良好的心血管活性 ,离体及整体实验表
收稿日期:2004 - 09 - 28,修回日期:2004 - 11 - 26
基金项目:国家自然科学基金对外交流合作资助项目(No 30070304)
和广东省自然科学基金重点资助项目(No 621235)
作者简介:刘　冰 (1956 - ), 女 , 硕士 , Tel:0049-234-3229115, Fax:
0049-234-3214040, E-m ail:b ing. liu@ ruh r-un i-bochum. d e;
石刚刚(1957 -),男 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向:
心血管药理及药物开发
明 , F2可以拮抗多种物质诱发的动物冠状动脉的收
缩与痉挛 [ 1, 2] ,明显地改善心肌缺血再灌注造成的
心肌损伤 [ 3 ～ 6] 。通过膜片钳和激光共聚焦显微镜的
观察 , F2可以阻滞心肌细胞和血管平滑肌细胞的钙
通道 ,拮抗钙离子内流 [ 7, 8] , 这是 F2抗心肌缺血再
灌注损伤的主要作用机制之一 。在整体实验中 ,周
燕琼等[ 6]报道 , F2在改善心肌缺血再灌注损伤造成
的心功能下降的同时 ,对心率的影响并不明显 ,和实
验中阳性对照药钙拮抗剂维拉帕米明显减慢心率的
作用有很大的差别 ,说明 F2作用的靶点不仅仅是 L-
型钙通道 ,可能还有别的机制参与 。我们在研究中
还发现 , F2对钾电流的作用较复杂 ,对于瞬时外向
钾电流和延迟整流钾电流的影响不尽一致 [ 9] 。在
诸多的钾通道中 ,乙酰胆碱敏感性钾通道 (KACh)属
于配体门控性离子通道 ,是一 G蛋白调节的钾通
道 ,是影响心脏自律性和心率的重要因素之一。为
此 ,在本研究中 ,我们采用膜片钳全细胞记录技术 ,
较详细地研究 F2对心房肌细胞 KACh的作用 ,将有助
于了解 F2对于心率的影响 ,并为 F2的作用提供新
的靶点与用途 。
1　材料与方法
1. 1　动物　豚鼠 , ♀♂不拘 ,体重 250 ～ 400 g,由德
国鲁尔大学实验动物中心提供。
1. 2　药品与试剂　F2由汕头大学医学院药物研究
室提供。羟乙基哌嗪乙烷磺酸 (HEPES),乙双醇双
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