全 文 ：液 , 测定 4 种生物碱的含量 , 以考察其稳定性。 RSD 值为
1. 617%, 表明供试品溶液至少在 24 h内稳定。
2. 8　加样回收率 精密称取苦参碱 、氧化苦参碱 、槐定碱 、氧化槐
果碱对照品适量 , 加入到一定量已知苦参碱 、氧化苦参碱 、槐定
碱 、氧化槐果碱含量的苦参粉末中 ,制备供试品溶液 ,按样品测定
方法进行测定 , 代入回归方程计算平均回收率分别为 99. 24%,
98. 31%, 101. 28%, 100. 59%, RSD 分别为 1. 248%, 1. 517%,
1. 412%, 1. 638%。
2. 9　样品测定 取 3种产地苦参药材制备成供试品溶液 , 注入液
相色谱仪 ,外标法侧得苦参中苦参碱 ,槐定碱 , 氧化苦参碱 , 氧化
槐果碱的含量结果见表 2。
表 2　3种产地苦参药材生物碱含量 %
产地 苦参碱含量　　RSD
槐定碱
含量　　RSD
氧化苦参碱
含量　　RSD
氧化槐果碱
含量　　RSD
河北 0. 136 1. 304 0. 213 1. 428 2. 881 1. 627 1. 027 1. 258
河南 0. 0831 1. 268 0. 195 1. 531 3. 516 1. 764 0. 861 1. 351
黑龙江 0. 0933 1. 357 0. 174 1. 398 3. 829 1. 747 1. 036 1. 520
　　n =5
3　讨论
苦参是一种常用的中药材 , 《中国药典》只规定了苦参碱 、氧
化苦参碱的含量测定方法 , 而苦参药材中含有多种生物碱 , 槐定
碱 、氧化槐果碱是苦参中的有效成分 , 并且含量都高于苦参碱。
本法用反相高效液相色谱 , BDS色谱柱 , 甲醇 -0. 1%氨水为流动
相梯度洗脱 , 方便 , 灵敏 , 准确 , 同时测定苦参中 4种生物碱的含
量 , 可以作为苦参质量控制的方法。
参考文献:
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物碱的含量 [ J] .华北煤炭医学院学报 , 2005, 7(2):140.
收稿日期:2006-03-20;　修订日期:2006-06-27
作者简介:刘　义(1978 - ),男(汉族), 贵州遵义人, 现任广东省天然药
物研究与开发重点实验室助理研究员 , 硕士学位 , 主要从事生化药理
研究.
半边旗水溶性成分对不同肿瘤
细胞生长抑制作用的研究
刘　义 , 龚先玲 , 梁念慈
(广东医学院 广东天然药物研究与开发重点实验室 ,广东 湛江　524023)
摘要:目的 研究半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长的抑制作用。方法 采用 M TT法及 T rypan B lue拒染法。结果
半边旗水溶性成分对求 BEL - 7402, A549, K562细胞生长的抑制率达到 56. 39%, 53. 85%, 74. 70%。结论 半边旗水溶性
成分对多种肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。
关键词:半边旗;　水溶性成分;　抗肿瘤
中图分类号:R73 - 35+4　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)11-2212-02
Studies on theAntitumor Effects of Soluble Components ofP teris . sem ipnnata L. aga inst
Various Tumor Cells
L IU Y i, GONG X ian-ling, L IANG N ian-ci
(GuangdongKey Labora tory for R esearch and Development of Natura l Drugs, Guangdong Med ica l College,
Zhan jiang , Guangdong 524023, China)
Abstract:Objective To study the antitum o r e ffects of the so luble com ponen ts o fP teris sem ipnnata L. (PsL)on va rious tum or
ce lls. M ethods C ell g row inhib ition m ed ia ted by the solub le com ponen ts o f P sL w asm easured byMTT assay and T rypan B lue ex-
c lusion. Resu lts The effects o f the so luble com ponents of PsL on grow th o f BEL - 7402, A549, K562 ce lls afte r 24 hou rs trea t-
m en tw ere 56. 39%、53. 85%、 74. 70%, respec tively. C onc lusion The so lub le com ponen ts o f P sL can significan tly inhibit the
g row th o f various tum or ce lls.
Key words:P teris sem ipnna ta L;　So luble com ponen ts;　Antitum or
　　半边旗 P teris sem ipnnata L. (PsL)是一种民间草药 , 属凤尾
蕨科植物 , 性寒 ,具疏解风寒 、化湿消味 、消热解毒的功效。近年
来我实验室的研究表明半边旗具有显著的体内外抗肿瘤作
用 [ 1～ 3] ,对其作用机理也已作了不少的研究 [ 4 , 5] 。分离 、纯化后
得到的抗肿瘤活性成分为二萜类化合物 5 F, 6 F, A。其中 5 F能
将肿瘤细胞的细胞周期阻滞在 G 2 M/ 期并能导致其凋亡 , 但对其
经过 CO2超临界萃取提走以上二萜类化合物后所得残渣中的水
溶性成分(SCPsL)的抗肿瘤活性研究还未见有相关报道。
本研究实验包括半边旗水溶性成分的提取 、体外抗肿瘤作用
的初步筛选及对不同肿瘤细胞生长抑制作用的比较。
1　材料与方法
1. 1 　材料 M TT、T rypan B lue购自 Sigm a公司;超级无支原体新
生牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司;RPM I - 1640购自
美国 H yc lone公司;胰酶购自美国 G ibco公司;其余试剂均为国
产分析纯。
人肝癌 BLE - 7402细胞 、人肺腺癌 A549细胞 、人慢性粒细
胞白血病细胞 K562细胞由本室传代。
1. 2 　方法
1. 2. 1　半边旗水溶性成分的提取 经 CO 2超临界萃取后半边旗
残渣 5 g,加 10倍量 95%乙醇水浴回流 , 微沸 1h,滤纸过滤 , 收集
滤液;将滤渣再加 10倍量 95%乙醇 , 水浴回流微沸 1 h, 滤纸过
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 11期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M EDICA RESEARCH 2006 VOL. 17NO. 11　
滤 , 得滤液。合并两次所得滤液 , 回收乙醇得浸膏 , 加 50m l三蒸
水 , 离心 10m in(2000 r /m in), 取上清 ,制成浓度为 100 mg生药
m l- 1的溶液 , 过滤除菌备用。
1. 2. 2　细胞培养 BLE -7402, A549, K562细胞培养于含 10%小
牛血清 , 100 kU L - 1青霉素和 100 mg L -1链霉素的 RPM I -
1640培养液中 , 37℃、5% CO 2饱和湿度细胞培养箱培养。取对
数生长期细胞用于实验。
1. 2. 3　M TT法 [ 6] 取对数生长期的期 BLE-7402, A549细胞 ,用
0. 25%胰蛋白酶消化 , RPM I- 1640完全培养液调制成 5. 0×104
个 m l- 1细胞悬液 , 接种于 96孔板中 ,每孔接种 100 μl(含 5. 0×
103个细胞)。培养过夜后 ,吸出培养液 ,加入新培养液 90 μl及
不同浓度的半边旗水溶性成分溶液 10 μl,使终浓度分别为 1. 25,
1. 75, 2. 50, 5. 00 m g生药 m l- 1。同时设置空白及 5 -Fu阳性对
照孔 , 对照组则加入相同体积的培养液 , 每一浓度设 8个平行孔。
继续培养 24 h。每孔加入 M TT(5 g L - 1)20 μl, 继续培养 4 ～ 6
h。每孔加入 DMSO 100 μl。在微型振荡器上摇匀 15 m in, 结晶
溶解后 , 立即比色 ,用 ELX800型酶标仪在主波长为 570 nm ,参比
波长为 630处测量 OD值 , 比色以空白孔调零。抑制率 =(1 -实
验组 8孔 OD 值平均值 /对照组 8孔 OD值平均值)×100%。
1. 2. 4　T rypan B lue拒染法 选取对数生长期的 K562细胞 , 调整
细胞浓度至 4. 4×105个 m l- 1 , 每孔 450 μl接种于 24孔板中 ,
使每孔的细胞数为 2×105个 。然后 , 加入不同浓度的受试化合
物。每个浓度设 3个平行孔 , 同时设置空白及 5——— Fu阳性对
照孔。将培养板放入 37℃, 5%CO 2饱和湿度孵箱中继续培养 24
h后每孔加入 50 μl 0. 4% T rypan B lue溶液染色。镜下计数 ,检
测活细胞数。抑制率 =(对照组 3孔活细胞数平均值 -实验组 3
孔活细胞数平均值 /对照组 3孔活细胞数平均值)×100%。
2　结果
2. 1　半边旗水溶性成分对人肺腺癌 BEL -7402细胞生长的抑
制作用 半边旗水提物作用于人肝癌 BLE - 7402细胞 24 h,能明
显地抑制其增殖 , 且呈剂量依赖关系。结果见表 1。
表 1　半边旗水提物对 BEL - 7402细胞生长的抑制作用
组别 OD值 抑制率(%)
空白 　　0. 814 -
5 - Fu 10μg m l- 1 　　0. 584*** 28. 26
SCPsL 1. 25 m g生药 m l- 1 　　0. 556*** 31. 69
SCPsL 1. 75 m g生药 m l- 1 　　0. 499*** 38. 70
SCPsL 2. 5 m g生药 m l- 1 　　0. 469*** 42. 38
SCPsL 5. 00 m g生药 m l- 1 　　0. 355*** 56. 39
　　与空白组比较 , *** P <0. 001
2. 2　半边旗水溶性成分对人肺腺癌 A549细胞增殖的抑制作用
从表 2可以看出 , 半边旗水提物能明显地抑制其增殖 ,且呈剂量
依赖关系。
表 2　半边旗水提物对 A549细胞增殖的抑制作用
组别 OD值 抑制率(%)
空白 　　0. 793 -
5 - Fu 10μg m l- 1 　　0. 571*** 27. 99
SCPsL 1. 25 m g生药 m l- 1 　　0. 601*** 24. 21
SCPsL 1. 75 m g生药 m l- 1 　　0. 552*** 30. 28
SCPsL 2. 5 m g生药 m l- 1 　　0. 487*** 38. 59
SCPsL 5. 00 m g生药 m l- 1 　　0. 366*** 53. 85
　　与空白组比较 , *** P <0. 001
2. 3 　半边旗水溶性成分对人慢性粒细胞白血病细胞 K562细胞
增殖的抑制作用 半边旗水提物作用于人慢性粒细胞白血病细胞
K562细胞 24 h, 能明显地抑制其增殖 ,且呈剂量依赖关系。与阳
性对照药 5——— Fu相比 ,其对 K562细胞的生长抑制作用更为明
显和有效。这说明半边旗水提物对某些对药物敏感的肿瘤细胞
有着明显的抑制作用。
表 3　半边旗水提物对 K562细胞增殖的抑制作用
组别 活细胞数(×104) 抑制率%
空白 63. 00±12. 53 -
5 - Fu 10μg m l-1 43. 58±3. 14*** 30. 83±5. 99
SC PsL 1. 25m g生药 m l- 1 40. 06±10. 07*** 36. 44±6. 01
SC PsL 1. 75m g生药 m l- 1 31. 33±2. 21*** 50. 27±4. 22
SCP sL 2. 5m g生药 m l- 1 24. 88±4. 36*** 60. 51±8. 31
SC PsL 5. 00m g生药 m l- 1 15. 94±4. 46*** 74. 70±7. 08
　　与空白组比较 , ***P <0. 001
2. 4 　半边旗水溶性成分对肝癌 BLE - 7402细胞 、人肺腺癌
A549细胞 、人慢性粒细胞白血病细胞 K562细胞增殖的抑制作用
比较 从图 1可以看出 , 半边旗水溶性成分对 3种人肿瘤细胞都
有明显的抑制作用 ,但对人慢性粒细胞白血病细胞 K562细胞生
长的抑制作用更为显著。在 5. 00 mg生药 m l- 1这个浓度下对
BEL-7402, A549, K562细胞的增殖抑制作用达到了 56. 39%,
53. 85%, 74. 70%, 效果均优级于阳性对照药 5——— Fu, 说明半边
旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长有着明显的抑制作用 ,是一种
值得深入研究和有望开发的抗肿瘤活性成分。
图 1　半边旗水溶性成分对 BEL - 7402, A549, K562
细胞增殖的抑制作用比较
3　讨论
目前 , 已开发应用于临床的抗肿瘤药物大多数属于化学合成
药或微生物代谢产物 ,且多具有特异选择性差 、毒副作用大 、效果
不理想等不足 ,而中草药因为毒副作用相对较小 、作用原理独特 、
效果明显 , 有别于以上两种药物 , 因此从中草药中提取高效低毒
的抗肿瘤药物已成为天然药物研究与开发的重要方向。
水溶性成分由于极性大 , 容易穿透细胞且活性强 ,已经成为
近年来研究的热点。半边旗水溶性成分在体外对肿瘤细胞生长
有明显的抑制作用 ,极有可能被开发成为抗肿瘤新药。半边旗水
溶性成分的抗肿瘤研究目前在国内外均未有相关的报道。
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LISH IZH EN MEDIC INE AND MATERIA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 11 时珍国医国药 2006年第 17卷第 11期