全 文 ：[科研报道]
溪黄草中 2α-羟基熊果酸的提取方法研究
吴剑峰1 , 刘 斌2 , 祝晨 3 , 赖小平3
(1.广东省佛山职工医学院 ,广东 佛山 528000;2.天津医学高等专科学校 ,天津 300052;3.广州中医药大
学 ,广东 广州 510405)
收稿日期:2003-10-18
基金项目:国家“十五”科技攻关计划资助项目(项目名称:中医药现代化研究与产业化开发-阳春砂等十二种重点中药材品种的规范化种
植基地建设;项目编号:99-929-01-23)
作者简介:吴剑峰(1960 ～ ), 男 , 江苏无锡市人 , 副主任药师 , 硕士, 研究方向:中药新药的研究与开发。 电话:0757-82816702 ,
13612540388;E-mail:jianfeng839@sina.com
关键词:溪黄草;2α-羟基熊果酸;高效液相色谱法
中图分类号:R284.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2004)06-0499-02
溪黄草包括香茶菜属 Isodon 的线纹香茶菜 I.lophan-
thoides(Buch-Ham.ex D.Don)H.Hara , 线纹香茶菜两个变种
狭基线纹香茶菜 I.lophanthoides var.gerardianus(Bentham)
H.Hara , 细花线纹香茶菜 I.lophanthoides var.gracilif torus
(Bentham)H.Hara 以及同属植物溪黄草 I.serra(Maxim.)
Kudo
[ 1 , 2] , 广东省溪黄草药材的主流商品为狭基线纹香茶
菜[ 3] 。实验表明熊果酸类成分具有显著的抑制乙肝病毒作
用。本文以狭基线纹香茶菜的主要成分 2α-羟基熊果酸为指
标 ,应用 RP-HPLC 法 ,对溪黄草中 2α-羟基熊果酸的提取方
法进行了研究。
1 仪器和试药 HP1100 高效液相色谱仪;HP G1315A 二
极管阵列检测器;Sartorius分析天平;乙腈为色谱纯;水为超
纯水;其他试剂为分析纯;2α-羟基熊果酸对照品由广州中医
药大学溪黄草课题组提供;溪黄草药材采于广东清远 GAP
基地。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性 色谱柱:Kromasil RP-C18柱
(4.6mm×250mm , 5um);乙腈-0.05%三氟乙酸溶液(70.5
∶29.5)为流动相;流速 0.8mL·min-1;柱温 25°C;检测波长
210nm。理论塔板数按 2α-羟基熊果酸计不低于 10000;2α-
羟基熊果酸的保留时间为 14.342min , 并且与其他成分分离
良好。对照品和样品的高效液相色谱图见图 1 和图 2(图中
2α-羟基熊果酸以 X5 表示)。
2.2 标准曲线的制备及线性范围考察 精密称取干燥至恒
重的 2α-羟基熊果酸适量 ,加甲醇溶解并定容至 10m L 的容
量瓶中 ,制备成浓度为 0.1mg·m L-1的对照品溶液。精密吸
取上述对照品溶液0.5 , 1.0 , 2.0 , 4.0 , 6.0 , 8.0 , 10 , 20μL , 以
选定的色谱条件进样测定 , 以峰面积(Y)对对照品质量(X)
进行线性回归 , 回归方程为:Y =552.57X -0.199 , r =
0.9999 , 线性范围:0.06～ 2.02μg。
2.3 正交实验设计
样品制备:取清远采狭基线纹香茶菜叶粉碎干燥 , 精密
称重 0.5g ,置烧瓶中 ,加溶剂 20m L 热回流 , 滤过 ,取滤液置
蒸发皿中蒸干 , 用甲醇定容至 10mL 的量瓶中 ,待测。(第 2 ,
第 3 次提取溶煤为 20m L ,操作同前)
图 1 对照品溶液 RP-HPLC色谱图
图 2 样品溶液 RP-HPLC色谱图
表 1 因素水平表
因素/水平 A溶剂种类
B
提取时间(min)
C
提取次数
1 甲醇 30 1
2 氯仿 45 2
3 丙酮 60 3
注:第 2 、第 3次提取时间均定为 30min。
3 结论
3.1 本文采用 RP-HPLC 法测定狭基线纹香茶菜中 2α-羟
基熊果酸含量简便 、快速 、无干扰 , 重现性好 ,结果准确。
3.2 实验以狭基线纹香茶菜中 2α-羟基熊果酸的含量为指
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2004 年 6 月
第 26 卷 第 6 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
June 2004
Vol.26 No.6
标 ,用正交试验法考察不同提取溶剂(甲醇 、丙酮 、氯仿), 不
同提取时间(30min 、45min 、60min), 不同提取次数(1 ～ 3 次)
对指标成分含量的影响 , 结果表明:提取溶剂为主要影响因
素 ,筛选并确定了用甲醇 30min 重复提取两次的最佳提取方
法。
表 2 正交设计及数据处理表(n=3)
实验号数 因素
A B C
2α-羟基熊果酸
含量% RSD(%)
1 1 1 1 0.9094 1.12
2 1 2 2 0.9131 0.78
3 1 3 3 0.9294 1.05
4 2 1 2 0.3955 0.67
5 2 2 3 0.2323 0.84
6 2 3 1 0.3606 1.35
7 3 1 3 0.4270 0.92
8 3 2 1 0.4055 0.72
9 3 3 2 0.4083 1.42
k1 2.7619 1.7319 1.6755
k2 0.9884 1.5509 1.7169
k3 1.2408 1.7083 1.5987
k 4.9911 4.9911 4.9911
R 0.5912 0.0603 0.0577
表 3 方差分析表
因素 偏差平方和 自由度 F比 显著性
溶媒种类 0.614 2 87.714 显著
提取时间 0.006 2 0.857
提取次数 0.002 2 0.286
误差 0.01 2
参考文献:
[ 1] 江苏新医学院 ,中药大辞典(下册)[ M ] ,上海 ,上海科学出版
社 , 1977.25
[ 2] 湖南省卫生厅 ,湖南省中药材标准[ S] , 长沙 , 湖南科学出版
社 , 1993.323
[ 3] 陈建南 ,赖小平 ,刘念 ,广东溪黄草药材的原植物调查及商品鉴
定[ J] ,中药材 , 1996.19(2):73-74.
三子养亲汤提取工艺研究
张新勇1 , 徐中南2 , 张勇耀3 , 刘丽芳4 , 张来芳2 , 王宇新4 , 汪 涛2
(1.江苏省药物研究所 , 江苏南京 210009;2.连云港正大天晴制药有限公司 江苏 连云港 222006;3.南京
铁路分局中心医院 , 江苏 南京 210009;4.中国药科大学中药学院 , 江苏 南京 210009)
收稿日期:2003-09-02
作者简介:张新勇(1970～ ),男 ,江苏南京人 ,助理研究员;主要从事中药新药的研制开发和化学成分研究。联系电话:025-83274017;E-
mail:zhangxinyongxin@sohu.com。
关键词:三子养亲汤 提取工艺 正交实验
中图分类号:R284.2 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2004)06-0500-02
古方三子养亲汤 , 由白芥子 、紫苏子和莱菔子 3 味中药
组成 , 我们曾结合镇咳 、祛痰和平喘等主要药效学试验对治
疗支气管炎的经典方剂三子养亲汤提取溶媒进行了筛选 , 结
果显示以水为溶媒提取其效果最好 ,也反映了汤剂水煎煮的
优越性。据文献[ 1 , 2]报道白芥子和莱菔子中均含有芥子碱
硫氰酸盐 , 并从中分得该化合物 ,经药理实验证实芥子碱的
水解产物芥子酸有祛痰作用 ,为三子汤发挥其药效的有效成
分之一。本文通过测定其指标性成分芥子碱硫氰酸盐的含
量 ,通过正交试验就影响了三子养亲汤的提取工艺的主要条
件提取时间 、提取次数和水用量进行了优选 , 结果表明提取
时加水 12 倍量 、提取 3 次 、每次提取 1h 其芥子碱硫氰酸盐
的含量最高 ,为最佳提取工艺条件。
1 试剂 、药材及仪器
1.1 试剂
磷酸二氢钾 、甲醇为分析纯 ,乙腈为色谱纯(进口),蒸馏
水(自制), 对照品芥子碱硫氰酸盐自己分离并鉴定结构(纯
度为 98%以上)。
1.2 药材
白芥子 、莱菔子 、紫苏子均购于南京市药材公司。并经
中国药科大学药用植物教研室秦民坚教授进行品种鉴定 , 白
芥子药材为十字花科植物白芥 S inapis alba L.的干燥成熟
种子 , 莱菔子药材为十字花科植物萝卜 Raphanus sativus L.
的干燥成熟种子 , 紫苏子药材为唇形科植物紫苏 Perilla
frutescens(L.)Britt.的干燥成熟果实。
1.3 仪器
调温电热器(江苏通州市申通电热器厂), RE52-99 旋转
500
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中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
June 2004
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