全 文 ： 制剂与炮制
收稿日期:2006-11-24;　修订日期:2007-01-27
基金项目:广东省湛江市科技计划攻关项目;广东省科委大科技攻关项
目(No.9622007002)
作者简介:典灵辉 (1970-),女(汉族),河南平顶山人 ,现任广东医学院讲
师 ,硕士学位 ,主要从事药物分析工作.
半边旗药材超声提取工艺的研究
典灵辉 , 梁念慈 , 龚先玲
(广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验 ,广东 湛江　524023)
摘要:目的 优选半边旗的超声提取工艺。方法 采用 L9(34)正交实验 , 考察乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)和料液比(D)4个影响因素 ,以 5 F含量为评价指标 , 并采用薄层扫描法进行测定。结果 半边旗超声提取的最佳工艺为
A2B2C3D3 ,即加 10倍量 70%乙醇 ,超声提取 3次 , 30 min/次。结论 优选得到的工艺稳定可行。关键词:正交实验;　超声波提取;　半边旗
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)06-1331-01
StudiesonUltrasonicExtractionProcessinPterissemipinnataL.
DIANLing-hui,LIANGNian-ci, GONGXian-ling
(GuangdongMedicalColege, KeyLaboratoryofNaturalDrugResearchandDevelopmentofGuangdong, Zhan-jiang524023, China)
Abstract:ObjectiveTooptimizetheconditionsofultrasonicextractionofPterissemipinnataL.MethodsThefourfactors-al-
coholcontent(A), ultrasonictime(B), ultrasonictimes(C)andsolventvolume(D)wereinvestigatedbyL9(34)orthogonalde-sign, andthecontentof5Fweredefinedasthestandardindex.5FwasdeterminedbyTLC-Scanning.ResultsA
2
B
2
C
3
D
3
wasthe
optimumconditionoftheultrasonicextraction, whichwasadding10timesamountof70% alcoholandextractingfor30 min(totaly
extractingfor3 times).ConclusionTheoptimizedprocessisstableandavailable.
Keywords:Orthogonaltest;　Ultrasonicextraction;　PterissemipinnataL.
　　半边旗为凤尾蕨科植物半边旗 PterissemipinnataL.干燥的
全草 , 具有清热 、解毒 、消肿 、止痢之功效 , 民间用于吐血 、外伤出
血 、发背 、跌打损伤 、目赤肿痛 [ 1] 。张晓等 [ 2]从增边旗乙醇提取
物中分离得到极性较小的具有显著抗肿瘤作用的 5F(11 β -Hy-
droxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19oicacid)等二萜类化全物。二萜类
化合物是半边旗的主要有效部位之一 ,由于二萜类化合物不易溶
于水 , 故宜用醇提取。关于中药有效成分的提取一般是采用传统
的溶剂回流法 , 目前超声提取技术因具有设备简单 、操作方便 、提
取时间短 、效率高 、节能等优点 , 已被广泛应用于中药有效成分的
提取 [ 3] 。近年来 , 关于半边旗的研究报道较多 , 但主要集中在其
化学成分和药理作用方面 [ 2] 。而有关超声提取半边旗二萜类化
合物的研究尚未见报道。本实验以半边旗中 5F含量为评价指
标 , 首次采用正交实验考察溶剂浓度 、提取时间 、提取次数和料液
比对超声提取效果的影响 ,优选出了最佳提取方案。
1　仪器与试药
1.1　仪器 岛津 CS-9301型双波长飞点薄层扫描仪(日本岛津公
司);微量定量毛细管点样管;METTLERAE240全自动分析天平
(梅特勒 -托利多上海有限公司);三用恒温水浴锅(华北实验仪
品有限公司);SB3200型超声仪(上海必能信仪器厂);高效层析
硅胶 GF254板(青岛海洋化工厂)。
1.2　试药 5F对照品(本课题组分离纯化 , 由日本东京理科大学
药学部和广东医学院生化研究所鉴定)。所用化学试剂均为分
析纯。半边旗药材采于广州市效区。
2　方法与结果
2.1　供试品溶液的制备
2.1.1　正交表的设计 为全面考察超声提取法对 5F提取效果的
影响 , 笔者根据预试验结果进行分析 , 认为影响提取的主要因素
有:乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)和料液比(D)四
个影响因素 ,设计实验因素和水平见表 1。
表 1　实验因素水平 L9(34)
水平 A乙醇浓度(%)
B
提取时间 /min
C
提取次数 /次
D
料液比
1 45 10 1 1∶6
2 70 30 2 1∶8
3 95 50 3 1∶10
2.1.2　工艺过程 精密称取 9份半边旗药材粉末 2 g, 分别按 L9
(34)正交表实验 , 浸泡 30 min超声提取 , 合并提取液 , 过滤 ,蒸干
溶剂 , 用甲醇溶解并定容至 5 ml, 得 1 ～ 9号供试品溶液 , 冷藏 ,
备用。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取 5F对照品适量 ,加甲醇配制
成每毫升含 0.252 mg的溶液 , 作为对照品溶液。
2.3　含量测定
2.3.1　薄层色谱及扫描条件 薄层色谱条件:高效层析硅胶
GF254板;展开剂∶石油醚∶丙酮∶冰醋酸(7∶3∶0.05);展开方
式:预饱和 15 min, 上行展开 , 展距 8 cm;薄层板置紫外灯下(254
nm)检视 ,定位。扫描条件:采用双波长反射法直线扫描法;λS=
237 nm, λR=285 nm;线性参数 SX=3;灵敏度中等。
2.3.2　线性关系考察 吸取对照品溶液 2, 4, 6, 8, 10μl分别点于
同一硅胶 GF
254
薄层板上 , 按 “ 2.3.1”项下点样 、展开 、扫描 , 测定
各斑点峰面积积分值。以对照品点样量(X)对斑点峰面积分值
(Y)进行回归 , 得回归方程 Y=31.046 1X-7.689 9, r=0.999 4。
可见 , 对照品在 0.504 ～ 2.520 μg范围内与峰面积积分值具有良
好线性关系。
2.3.3　稳定性实验 精密吸取对照品溶液 6 μl点于薄层板上 ,
展开 , 晾干 ,在不同的时间(0, 2, 4, 8, 12, 24 h)扫描 1次 , 其峰面
积积分值的 RSD=1.26%, 结果表明 5F斑点在 24 h内基本
稳定。
2.3.4　精密度实验 精密吸取对照品溶液 6 μl, 在同一薄层板上
点 6个相同量的点 , 按 “ 2.3.1”项下条件测定各斑点的峰面积 ,
其峰面积积分值的 RSD=1.39%(n=6)。 异板精密度实验:精
·1331·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.6 时珍国医国药 2007年第 18卷第 6期
密吸取对照品溶液 6 μl点在 6块不同薄层析上 ,按 “ 2.3.1”项下
条件测定各斑点的峰面积 ,其峰面积积分值的 RSD=4.75%(n=
6),结果表明精密度良好。
2.3.5　加样回收率实验 采用加样回收法 , 精密称取已知含量的
药材 , 精密加入 5F对照品溶液 2 ml, 按 “ 2.1.2”项下方法制备供
试品溶液 , 按 “ 2.3.1”项下条件点样 , 展开 ,扫描 ,测定 ,计算加样
回收率 , 结果平均回收率为 97.24%, RSD=2.53%(n=3)。
2.3.6　样品含量测定 将供试品溶液和 5F对照品溶液点在同一
硅胶 GF254板上 , 采用外标两点法计算 5F含量。结果见表 2。
表 2　L9(34)正交实验方案与结果
实验号 A B C D 5F含量 C/mg· g-1
1 1 1 1 1 0.156
2 1 2 2 2 0.379 0
3 1 3 3 3 0.543 3
4 2 1 2 3 0.530 8
5 2 2 3 1 0.640 8
6 2 3 1 2 0.335 1
7 3 1 3 2 0.356 2
8 3 2 1 3 0.320 5
9 3 3 2 1 0.351 5K1 1.078 1.043 0.812 1.148K2 1.510 1.340 1.261 1.070K3 1.028 1.230 1.540 1.395k1 0.359 0.348 0.271 0.383k2 0.502 0.447 0.420 0.357k3 0.343 0.410 0.513 0.465R 0.160 0.099 0.243 0.108
2.3.7　结果分析 由表 2直观分析R值可知 ,超声影响因素主次
顺序为 CADB, 超声次数是超声提取的关键因素 , 乙醇浓度和料
液比次之 ,提取时间影响最小。所以最佳提取工艺是 A
2
B
2
C
3
D
3
。
2.3.8　工艺的细微调节及验证实验 根据正交实验的结果 ,将最
佳条件中的乙醇浓度 、超声时间 、料液比固定 , 优选提取次数(3
次 、 4次和 5次)的水平 , 其结果分别为 0.651 2, 0.653 9 和
0.650 8 mg· g-1。以上数据表明 , 提取 3次基本提取完全 , 故确
定提取 3次。
3　讨论
3.1　 本实验通过正交实验考察了乙醇浓度 、提取时间 、提取次
数和料液比四个影响因素对半边旗提取效果的影响 ,通过对半边
旗中 5F含量的测定 , 优选出最佳提取工艺条件 ,并对其进行了验
证实验 ,结果表明该工艺稳定 , 省时 , 简便 , 为半边旗指纹图谱的
研究提供了参考依据。根据直观分析和验证实验 ,最佳提取工艺
确定为浸泡 30 min, 10 倍用量 70%乙醇超声提取 3 次 , 30
min/次。
3.2　 超声提取法近几年新的提取方法 , 其理论依据是根据超声
具有空化 、粉碎 、搅拌等特殊作用 , 对植物药材的细胞有破坏现
象 , 使其溶媒渗透到药材的细胞中 , 以便使药材中的化学成分溶
于溶媒之中。该法具有实验设备简单 ,操作方便 , 提取时间短 , 提
取率较高 , 无需加热等优点。作为中药提取的新工艺 , 具有良好
的应用前景。
参考文献:
[ 1 ] 　江苏新医学院.中药大辞典 , 上册 [ M] .上海:上海科技出版社 ,
1973:782.
[ 2 ] 　张　晓 ,崔　燎 ,梁念慈 , 等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究
[ J] .中国药学杂志 , 1997, 32(1):37.
[ 3 ] 　张晓东 ,潘国凤 ,吕圭源.超声提取在中药化学成分提取中的应用
研究进展 [ J] .时珍国医国药 , 2004, 15(12):861.
收稿日期:2006-05-09;　修订日期:2007-02-25
基金项目:西南交通大学科技发展基金(No.20060116)
作者简介:廖　海(1974-),男(汉族),四川成都人 ,现任西南交通大学药
学院讲师 ,博士学位 ,主要从事植物天然产物研究工作.
＊通讯作者简介:周嘉裕(1976-), 女(汉族),四川成都人 , 现任西南交通
大学药学院讲师 ,博士学位 ,主要从事植物天然产物研究工作.
决明子大黄素和大黄酚的提取与含量测定
廖　海 ,周嘉裕＊ ,何成生 ,陈亚龙 ,官海峰
(西南交通大学药学院 ,四川 峨嵋　614202)
摘要:目的 比较研究提取决明子大黄素和大黄酚的不同方法。方法 甲醇超声波 、乙醇超声波 、甲醇回流和乙醇回流分
别提取决明子中的大黄素与大黄酚 ,高效液相色谱方法测定大黄素与大黄酚含量。结果 甲醇超声波提取大黄素和大黄
酚的效率最高。结论 为决明子大黄素和大黄酚的提取与开发提供了参考价值。
关键词:决明子;　高效液相色谱;　提取方法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)06-1332-02
ExtractionandDeterminationofEmodinandChrysophanolContentsinSemenCassiae.
LIAOHai,ZHOUJia-yu＊ , HECheng-sheng,CHENYa-long,GUANHai-feng(ColegeofPharmacy, SouthwestJiaotongUniversity, Emei614202, China)
Abstract:ObjectiveTocompareandresearchonvariousmethodsforextractionofemodinandchrysophanolfromSemenCassi-
ae.MethodsTheemodinandchrysophanolwereextractedbymethanolorethanolbymeansofultrasonicorrefluxingrespectively.
TheemodinandchrysophanolcontentsweredeterminedbyRP-HPLCmethods.ResultsUltrasonicwithmethanolwasthebestex-
tractingmethodforbothemodinandchrysophanol.ConclusionThismethodismeaningfulforextractionandexplorationofemod-
inandchrysophanolcontentsinSemenCassiae.
Keywords:SemenCasiae;　HPLC;　Methodsofextraction
　　决明子(SemenCassiae)为豆科植物决明 CassiaobtusifoliaL.
或小决明 CassiatoraL.的干燥成熟种子 ,含有多种营养保健和药
用成分 ,具有降血压 、降血脂 、保肝和抑菌等功效 ,其主要有效成
分为蒽醌类化合物(大黄素 、大黄酚等)[ 1] 。由于决明子中大黄
素 、大黄酚的含量很低 , 如何提高其提取效率成为中药研究的重
点和难点。 2005版《中国药典 》[ 2]中采用的是甲醇回流法 , 但是
甲醇有较强的毒性 ,极易渗透进入皮肤对人体造成危害。考虑到
大黄素和大黄酚均为极性分子 ,因此能否利用安全性更高和成本
更低廉的乙醇来替代甲醇值得研究。回流提取决明子是常用的
方法 [ 3～ 5] ,但是大量有机溶剂的使用会导致环境污染 , 成本增加 ,
有机溶剂残留等问题。相比较而言 ,超声波提取作为提取工艺的
·1332·
时珍国医国药 2007年第 18卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.6