全 文 ：!#$李! 强，郑! 伟，陈! 林，杨! 洋，孙设宗 （郧阳医学院，湖北十堰 !!###） 摘$ 要：以多糖得率为指标，采用正交实验法确定蜘蛛香多糖的最佳水提醇沉工艺，最佳水提工艺为：浸提温度 %##&，
料液比 %’%#，浸提时间 ()，提取 次；最佳醇沉工艺为：浓缩液加入 ! 倍体积 *#+乙醇，静置 ,)，此工艺下多糖得率为
-.%+。该工艺简单、得率高，适于提取蜘蛛香多糖。
关键词：蜘蛛香，多糖，正交实验，水提，醇沉
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中图分类号：?>#%. 文献标识码：@ 文 章 编 号：%##/#A#B（#%#）#-/#-A/#A
收稿日期：##*/%#/#*
作者简介：李强（%*-*/），男，硕士，讲师，从事生物活性成分研究。
基金项目：郧阳医学院科研基金资助项目（##BCDE#B）。
蜘蛛香（!#$%&’ ()*’+& E=27F），又名心叶缬 草、马蹄香、老虎七等，系败酱科缬草属植物，分布于 河南、陕西、湖北和四川等地，具有理气止痛、消炎止 泻、祛风除湿等功效［%］。蜘蛛香化学成分包括挥发 油、环烯醚萜类化合物和黄酮类化合物等，对其结构 和药理作用研究比较深入，证实其具有镇静催眠、抗 菌、抗病毒、抗肿瘤等作用［］。多糖是机体内重要的 生物大分子，研究表明其具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰 老、降血糖和免疫调节等作用［A/!］。目前蜘蛛香多糖 的研究报道较少，本文用水提醇沉法提取蜘蛛香多 糖，通过正交实验法分别对水提和醇沉条件进行优 化研究，以确定蜘蛛香多糖的最佳提取工艺，为蜘蛛 香多糖的开发利用打下基础。 ;! 材料与方法 ;<;! 材料与仪器 蜘蛛香$ 购于十堰市中药材公司，产地湖北；葡
萄糖$上海化学试剂分装厂；蒽酮$ 上海试剂一厂；
A，(/二硝基水杨酸$湖州市菱湖望菱试剂厂；其他 试剂$ 为国产分析纯。
DG0/!## 型摇摆式高速中药粉碎机$温岭市林 大机械有限公司；6H%#/ 型电子天平$ 上海良平
仪器仪表有限公司；II·>0%%/J9 型电热恒温水浴
锅$北京市长风仪器仪表公司；KL/(D型旋转蒸发 器$ 上海青浦沪西仪器厂；>IM/D（!）型循环水式
真空泵$巩义市予华仪器有限责任公司；-> 型可 见光分光光度计$ 上海精密科学仪器有限公司；
>NO/#%@型电热恒温干燥箱$湖北省黄石市恒丰医 疗器械有限公司。 ;<=! 实验方法 %..%$ 总糖标准曲线的制作$采用蒽酮/硫酸法［(］。 精确称取 #.#(5 干燥至恒重的葡萄糖，置于 (#PQ 容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀后得葡萄糖标准 液，浓度为 %##P5 R Q。准确称取 #.5 蒽酮溶解于 %##PQ *,+硫酸中，得到蒽酮试剂。精确量取 #.#、 #.、#.!、#.B、#.,、%.#PQ葡萄糖标准液于 B 支试管中， 再分别加入蒸馏水至总体积为 %PQ，摇匀后分别加 入 (PQ蒽酮试剂，混匀后置于沸水浴中加热 BP92，之 后立即取出冷却至室温，以空白管为对照，在 B#2P 波长处测定吸光度。以吸光度为横坐标，葡萄糖浓 度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程：3 S %B%.,AT/%.A##B，K S #.***。 %..$ 还原单糖标准曲线的制作$采用 A，(/二硝基 水杨酸法（DJ>法）［B］。精确称取 #.#(5 干燥至恒重 的葡萄糖，置于 (PQ容量瓶中，加蒸馏水至刻度线， DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2010.07.009 !#$
摇匀后得葡萄糖标准液，浓度为 !#$% &。精密称 取 ’()$ *，) +二硝基水杨酸溶于少量水中，移入
!#&容量瓶，加入 ,#-. % & 氢氧化钠溶液 *,)#&，
再加入 /)$丙三醇，摇匀后加蒸馏水定容至 !#& 得到 012试剂。分别精密吸取 (、(,、(/、(’、(3、 !(、!(,、!(/#&葡萄糖标准液，加入到 3 个 ,)#&容量 瓶中，加水至总体积为 ,()#&，再分别加入 *#& 012 试剂，混匀后置于沸水浴中加热 )#45，取出后立即冷 却至室温，加水定容至 ,)#&，摇匀后，以空白管为对 照，在 )/5#处测定吸光度。以吸光度为横坐标，葡 萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方 程：6 7 *8,!(,9 : *’(/8,，;, 7 (8888。 !(,(*< 多糖含量的测定< 取一定量蜘蛛香多糖提取 液至 !#& 容量瓶中并定容，分别精密吸取 !(#& 多糖溶液，按 !(,(! 和 !(,(, 中方法操作，测定吸光度， 根据标准曲线计算总糖浓度和还原单糖浓度，再计 算多糖得率。 多糖得率（=）7（>! + >,）? 0 ? @ ? (! ? != % A 式中：>! 为总糖浓度（#$ % &）；>, 为还原单糖浓
度（#$% &）；0 为稀释倍数；@ 为多糖提取液总体积 （&）；A为药材质量（$）。
!(,(/< 多糖水提醇沉提取工艺流程 < 蜘蛛香预处理
（粉碎，过 / 目筛，!B!) 乙醇，回流脱脂 ,C）%热水浸提%抽
滤%浓缩%乙醇沉淀%离心（/D % #45，!)#45）%粗多糖
沉淀
!(,()< 水提工艺的正交实验设计 < 在预实验基础
上，以提取温度（E）、提取时间（F）、提取次数（>）和
料液比（0）作为考察因素，每个因素设置 * 个水平，
采用 &8（*
/）正交表进行实验，见表 !。
表 !< 水提工艺正交实验因素水平表
水平
因素
E提取温度
（G）
F提取时间
（C）
>提取次数
（次）
0料液比
! 3 * ! !B!
, 8 / , !B!)
* ! ) * !B,
!(,(’< 醇沉工艺的正交实验设计< 在最佳水提工艺
条件下得到的水提液浓缩为原体积 ! % !，以乙醇浓
度（E）、静置时间（F）和乙醇体积（>）作为考察因
素，每个因素设置 * 个水平，采用 &8（*
/）正交表进行
实验，见表 ,。
表 ,< 醇沉工艺正交实验因素水平表
水平
因素
E乙醇浓度
（=）
F静置时间
（C）
>乙醇体积
（倍）
! 3 / *
, 8 3 /
* ! !, )
!(,(H< 验证实验 < 精确称取 * 组各 !$蜘蛛香药 粉，按最佳水提醇沉工艺提取多糖，计算多糖得率。 ! 结果与分析 !#$ 水提工艺正交实验结果
由表 * 可知，正交实验结果极差 ; 值显示，各因
素主次为 E I 0 I > I F，即最重要因素为提取温度，
其次为料液比和提取次数，最后是提取时间。表 /
以因素 F 为误差进行方差分析，表明 / 个因素对结
果均无显著性影响。通过直观分析最佳水提工艺应
为 E*F*>*0!，经验证在 E*F*>,0! 和 E*F*>*0! 条件
下，多糖提取率分别为 3(8H=和 8(*’=，两者相差不
大，考虑到提取次数为次要因素，增加提取次数会延
长提取时间，提高浓缩难度，增加能耗，不利于工业
化生产，所以选择蜘蛛香多糖提取的最佳水提工艺
为：E*F*>,0!，即药材加入 ! 倍体积水，!G水浴加
热 )C，提取 , 次。
表 *< 水提工艺正交实验结果
实验号 E F > 0 多糖得率
（=）
! ! ! ! ! ,(H*
, ! , , , ,(3!
* ! * * * *(,
/ , ! , * *(’’
) , , * ! )(/H
’ , * ! , /(/,
H * ! * , H(/
3 * , ! * )(3
8 * * , ! 3(8!
J! ,(3) /(’ /(3 )(H
J, /(), /(/) )(!, /(33
J* H(!* )(/) )(* *(8,
; /(,3 !( !(,, !(H3
表 /< 水提工艺结果方差分析表
因素 离差平方和 自由度 均方 K比值 L
E ,H(8! , !*(8) !’(3 I ()
F（误差） !(H/ , (3H
> ,(’ , !(* !() I ()
0 /(3 , ,(/ ,(H’ I ()
!#! 醇沉工艺正交实验结果
由表 ) 可知，正交实验结果极差 ; 值显示，醇沉
各因素主次为 > I F I E，即最重要因素为乙醇体积，
其次为静置时间，最后是乙醇浓度。表 ’ 表明 * 个因
素对结果均无显著性影响。根据直观分析结果可
知，蜘蛛香多糖最佳醇沉工艺为 E,F,>,，即浓缩液加
入 / 倍体积的 8=乙醇，静置 3C，离心得多糖沉淀。
表 )< 醇沉工艺正交实验结果
实验号 E F > 0（空白） 多糖得率
（=）
! ! ! ! ! /(H)
, ! , , , ’(H*
* ! * * * /(3’
/ , ! , * )(’H
) , , * ! )()*
’ , * ! , ’(*
H * ! * , )(!’
3 * , ! * )(,3
8 * * , ! )()3
J! )(/) )(!8 )(// )(,8
J, )(3* )(3) )(88 ’(’
J* )(*/ )()3 )(!3 )(,H
; (/8 (’’ (3! (H8
（下转第 ,HH 页）
!#
表 ! 正交实验结果
实验号 # $% 凝胶强度 （& ’ ()*） 失水率 （+） 感官 评定 综合 评分 , , , , -./.0 1/*! 2/3! ,1 * , * * --/43 !/0- 5 2/40 ,3 . , . . !2/1, -/41 5 2/14 *1 0 * , * 4,/-, ,-/!. ,/-* ** - * * . 4*/4! !/3* 2/*4 .2 ! * . , 3!/3! !/*4 5 2/4* .0 1 . , . !!/., ,2/3- ,/23 ** 4 . * , ,*2/3! ,*/.* ,/*3 ., 3 . . * 1,/-, ,-/,3 ,/-4 *. 6, !- !, 4* 6* 4! 14 !0 6. 1! 40 13 7, *,/!1 *2/.. *1/.. 7* *4/!1 *! *,/.. 7. *-/.. *4 *!/.. 8 1 1/!1 ! ! 结果与讨论 !#$ 制作豆腐的最佳工艺条件为：浸泡时间为 ,*9，
浸泡温度为 **:，料水比 ,;,*。此时的豆腐凝胶强
度最大，失水率较小，质构细腻，颜色较白，且富有
弹性。
!#% 豆腐是豆浆凝固的产物，豆浆凝固的实质是大
豆蛋白相互结合，形成三维网络结构，将水和脂肪等
成分包容在一起。豆腐凝胶强度和保水性不但反映
了豆浆凝胶网络的结构状态，而且决定了豆腐产品
的加工品质及得率。所以，凝胶强度和失水率是豆
腐品质的两个重要指标，本论文将此作为重要的考
察指标，既有理论意义，又有应用价值。另外还有一
个二级指标：感官指标。在讨论每一个因素时，都以
两个主要指标为主，以二级指标为辅，综合考虑求出
结论。
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&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
,333/
（上接第 *10 页）
表 ! 醇沉工艺结果方差分析表
因素 离差平方和 自由度 均方 ?比值 @
# 2/02 * 2/*2 2/.. A 2/2-
$2/!- * 2/.. 2/-. A 2/2- % ,/2. * 2/-* 2/40 A 2/2- >（空白） ,/*. * 2/!, %#! 验证实验结果 蜘蛛香药粉加入 ,2 倍体积水，,22:提取 * 次， 每次 -9，提取液浓缩至 , ’ ,2 体积，加入 0 倍体积 32+乙醇，0:静置 49，离心得到蜘蛛香多糖沉淀，多 糖平均得率为 1/,*+。 ! 讨论 !#$ 水提醇沉法是经典的多糖提取方法，所需设备
简单，耗材低廉，重复性好，适于工业生产。常规水
提醇沉工艺研究流程为：水提%脱蛋白及色素%醇
沉%沉淀冷冻干燥得到多糖，此法操作过程复杂，周
期长，且多偏重水提条件优化，对醇沉条件、脱蛋白、
脱色素优化不足。本实验流程周期短，并分别对水
提和醇沉条件进行优化，为避免提取液中还原单糖
对结果的影响，采用蒽酮5硫酸法和 >BC法分别测定
多糖提取液的总糖含量和还原单糖含量，多糖含量
为总糖含量和还原单糖含量之差，得到的结果可靠。
粗多糖蛋白质和色素的去除在后续研究中进行。
!#% 以多糖得率为指标，通过正交实验和方差分析，
确定蜘蛛香多糖水提醇沉最佳工艺为：药材加入 ,2
倍体积水，于 ,22:水浴浸提 * 次，每次 -9，提取液浓
缩至 , ’ ,2 体积，加入 0 倍体积的 32+乙醇，0:静置
49，离心得多糖沉淀。经验证，该工艺简便，重复
性好。
参考文献
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