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（编辑：修春）
收稿日期：2015- 05- 01
作者简介：闵剑斌，男，硕士研究生，研究方向：中药有效性及安全性再评价与中药体内代谢。Email：minjianbin@126.com.。通信作者：赵威，
博士，副研究员，研究方向：中药药效与安全性评价以及体内药物相互作用研究。Email：athena_zw@126.com。
基金项目：广东省科技厅基金项目（cxzd1138）。
溪黄草水提物对ANIT诱发的实验性大鼠肝内胆汁淤积模型的干预作用
闵剑斌，陈 浩，石 思，刘方乐，赵 威，宓穗卿，祝晨蔯（广州中医药大学临床药理研究所，广东 广州，
510405）
摘要：目的 观察溪黄草水提物对 α- 萘异硫氰酸酯（ANIT）诱发的肝内胆汁淤积大鼠的影响。方法 采用
ANIT 80 mg·kg-1复制大鼠肝内胆汁淤积模型，健康 SD雄性大鼠按体质量随机分为 6组，每组 8只，即：空白
对照组，溪黄草高剂量组（60 g·kg-1），溪黄草中剂量组（40 g·kg-1），溪黄草低剂量组（20 g·kg-1），模型组和熊去
氧胆酸（UCUD）组（100 mg·kg-1）。灌胃给药后，进行胆总管插管手术，观察溪黄草对大鼠 1.5 h内的胆汁流量
以及血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）、总胆固醇
（TC）、直接胆红素（DBIL）、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）的影响。结果 与模型组比较，溪黄草各剂量
组各项指标（除 ALT、ALP、γ-GT外）均有一定改善（P < 0.05，P < 0.01），但部分未呈现一定量效关系。
UCUD组对 AST有改善，其他 7项指标效果不明显。与模型组比较，溪黄草中、高剂量组以及 UCUD组胆
汁流量均有显著提高（P < 0.05，P < 0.01）。病理切片结果显示溪黄草高剂量组和 UCUD组对 ANIT诱发的肝
细胞损伤有所改善。结论 溪黄草对 ANIT诱发的实验性大鼠肝内胆汁淤积损伤具有一定干预改善作用。
关键词：溪黄草；α-萘异硫氰酸酯；肝内胆汁淤积
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）05-0635-05
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.05.015
Intervention Effect of Herba Rabdosiae Serriae Aqueous Extract on Experimental Rat Model of
Intrahepatic Cholestasis Induced by ANIT
MIN Jianbin，CHEN Hao，SHI Si，LIU Fangle，ZHAO Wei，MI Suiqing，ZHU Chenchen（Institute of Clinical
Pharmacology，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405 Guangdong，China）
Abstract：Objective To study the protective effect of Herba Rabdosiae Serriae（Xihuangcao） aqueous extract on
rats with acute intrahepatic cholestasis induced by alpha naphthyl isothiocyanate（ANIT）. Methods Animal models
of intrahepatic cholestasis was established with ANIT at 80 mg·kg-1. Forty-eight Sprague Dawley rats were randomly
divided into 6 experimental groups， namely normal control group， model group， and high-， middle- and
low-dosage Xihuangcao groups（60，40，20 g·kg-1 respectively），ursodeoxycholic acid（UCUD）group（100 mg·
kg-1），8 rats in each group. After gavage administration，the rats were given common bile duct surgery and then
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 September，Vol． 26 No． 5
溪黄草原植物为唇形科香茶菜属线纹香茶菜及其
变种狭基香茶菜、纤花香茶菜以及同属植物溪黄草。
线纹香茶菜线和狭基线纹香茶菜分布广，目前文献研
究较多的是线纹香茶菜和狭基线纹香茶菜[1]。现代研
究[2]显示，溪黄草具有保肝、利胆、增强免疫、抗炎
等疗效，岭南地区的居民有将溪黄草制作为茶饮治疗
肝胆湿热的传统。溪黄草茶不仅具有良好的药物治疗
及保健作用， 还具有清新、淡雅、舒适的风味，也
是广式凉茶的重要成分，因此具有较好的研究开发前
景。值得一提的是，由于缺乏溪黄草中化学成分的定
量分析方法及合理的加工方式，溪黄草质量不稳定，
药效及保健作用不明确，制约了溪黄草的推广和深度
开发。本实验开展对线纹香茶菜的研究，观察不同剂
量的溪黄草水提物对 α - 萘异硫氰酸酯（ANIT）所致
大鼠肝内胆汁淤积的干预作用，以便后续探讨其作用
机制。
1 材料与方法
1 . 1 药物及试剂 溪黄草，康美药业股份有限公司，
批号：131205531，经临床药理所祝晨蔯研究员鉴定
为线纹香茶菜 Isodon.iophanthoides； ANIT，美国
Sigma公司，批号：STBC5577V；熊去氧胆酸（UCUD），
中国阿拉丁试剂公司，批号：201305；乌拉坦，中国
天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20130812；
总胆红素（TBIL）试剂盒、直接胆红素（DBIL）试剂盒
和总胆汁酸（TBA）试剂盒，中国中生北控生物科技股
份有限公司；氯化钠，中国天津市大茂化学试剂厂；
碱性磷酸酶（ALP）试剂盒、谷草转氨酶（AST）试剂盒、
谷丙转氨酶（ALT）试剂盒、总胆固醇（TC）试剂盒和
γ - 谷氨酰转移酶（γ - GT）试剂盒，中国上海科华生
物工程股份有限公司。
1 . 2 主要仪器 全自动生化仪，意大利爱康分公司；
多功能酶标仪，瑞典 Tecan公司；PE10导管，英国
Smith Medical公司。
1 . 3 动物 雄性 SD（Sprague- Dawley）健康大鼠，SPF
级，体质量 180~220 g，动物许可证号：SCXK（粤）
2014- 0002，购于广东省医学实验动物中心。
1 . 4 溪黄草水提物的制备 称取 3 kg溪黄草，加 10
倍量的水，浸泡过夜，加热回流提取 2 次，每次
2 h，多层纱布过滤，趁热抽滤，合并上清液再浓缩
至含生药 6 g·mL-1。4 ℃ 冷藏保存，使用前分别稀释
成不同浓度并加热至微温。
1 . 5 分组、模型复制及给药 健康 SD雄性大鼠 48
只，按体质量随机分为 6组，每组 8只，即：空白对
照组，溪黄草高（含生药量 60 g·kg-1）、中（含生药量
40 g·kg-1）、低（含生药量 20 g·kg-1）剂量组，模型组和
UCUD组（100 mg·kg-1）。空白对照组和模型组的大鼠
每天给予生理盐水 10 mL·kg-1灌胃 1次；溪黄草高、
中、低剂量组的大鼠每天给予相应的溪黄草灌胃 1
次；UCUD组大鼠每天给予 UCUD 100 mg·kg-1灌胃 1
次，连续 7 d。第 5天除空白对照组外其他组一次给
予 80 mg·kg-1 ANIT灌胃造模。ANIT和 UCUD分别以
食用花生油和 5 %羟甲基纤维素钠（CMC- Na）为溶
媒，配制相应浓度。
1 . 6 胆管插管手术 第 7天给药 1 h后行胆管插管手
术。手术前所有大鼠禁食不禁水 8 h，标记大鼠，称
质量，使用 20 %乌拉坦（0.5 mL·100 g-1）腹腔注射麻
醉。大鼠麻醉后，将其仰卧位固定于手术板上，腹部
备皮，碘伏涂搽消毒 2次，从大鼠剑突下约 1 cm处
剪一个适量的手术切口，在膈肌下找到胃后再确认十
二指肠，翻转十二指肠在其降部肠系膜上找到白色有
韧性的胆管，游离胆总管，分离后在其下穿一根细
we observed the bile flow within 1.5 h in rats and measured serum alanine transaminase（ALT）， aspartate
transaminase（AST），alkaline phosphatase（ALP），γ- glutamyl transferase（γ-GT），total cholesterol（TC），direct
bilirubine（DBIL），total bilirubin（TBIL），and total bile acid（TBA）levels in serum. Results Compared with the
model group， high-，middle- and low-dosage Xihuangcao significantly decreased all of the observation indexes
except ALT，ALP and γ-GT（P < 0.05）， and the changes of some indexes were in dose-dependent manner.
UCUD only had obvious effect on improving AST. Middle- and high-dose Xihuangcao group and UCUD group had
higher bile flow than the model group（P < 0.01）. The results of pathological examination showed that high-dose
Xihuangcao and UCUD significantly relieved the injury of hepatocytes induced by ANIT（P < 0.01）. Conclusion
Xihuangcao aqueous extract shows certain effect on improving the injury in rat with ANIT-induced intrahepatic
cholestasis.
Keywords：Herba Rabdosiae Serriae；Alpha naphthyl isothiocyanate；Intrahepatic cholestasis
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中药新药与临床药理 2015年 9月第 26卷第 5期
组别
空白对照组
模型组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
UCUD组
剂量 /g·kg-1
0.08
20
40
60
0.1
T- C/U·L-1
2.08± 0.26
8.48± 1.27◆ ◆
7.8± 0.66
6.70± 0.67
5.95± 1.19▲
7.51± 1.75
DBIL/μ mol·L-1
5.00± 1.93
116.75± 22.70◆ ◆
77.66± 7.45▲ ▲
111.26± 13.68
62.56± 7.30▲ ▲
77.72± 20.71
TBIL/μ mol·L-1
3.42± 1.62
104.79± 27.16◆ ◆
58.67± 8.24▲
58.45± 16.05▲
91.03± 22.20
56.87± 24.52
TBA/μ mol·L-1
3.13± 1.61
36.88± 6.81◆ ◆
20.83± 8.76
17.81± 4.25▲
14.37± 2.39▲
41.56± 15.22
线，用针头朝向心方向轻轻地刺破胆管，将引流管
（PE导管）从刺破处插入约 1 cm，用细线结扎固定引
流管。术后引流管被固定开始计时，收集 90 min的
胆汁，每隔 15 min收集 1次，共收集 6个时间段的
胆汁。胆汁流量计算公式如下：
胆汁流量（μ L·min-1·100g-1）=（EP1- EP2）× 100000ρ × m× 15
注：ρ ：胆汁密度，ρ =1 g·mL-1；每隔 15 min
收集 1 次胆汁。EP1：收集胆汁后 EP 管质量；EP2：
EP管质量；m：大鼠体质量（以上质量单位皆为 g）。
1 . 7 生化指标、病理切片方法 各实验组大鼠腹主动
脉采血，将血液收集在离心管内，静置分层 2 h，在
室温下 3000 r·min-1离心 10 min，取上清液及时检
测。快速摘取新鲜肝脏固定于中性甲醛中用于病理切
片。
1 . 8 统计学处理方法 采用 SPSS17.0统计软件分析，
计量资料以均数± 标准差（x ± s）表示，多组间均值的
比较采用单因素方差分析（One- way ANOVA），以
P ＜ 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2 . 1 溪黄草水提物对胆汁淤积模型大鼠血清中 A S T 、
A L T 、A L P 、 γ - G T 、 T C 、 D B I L 、 T B I L 、 T B A 的
影响 见表 1和表 2，与空白对照组比较，模型组除
γ - GT外血清学指标均明显升高（P < 0.01），表明造
模成功；与模型组比较，溪黄草各剂量组各项指标
（除 ALT、ALP、γ - GT外）均有一定程度的降低（P <
0.05， P < 0.01），但部分未呈现一定量效关系。
UCUD组 AST显著降低（P < 0.01），其他各项指标效
果不明显。
2 . 2 溪黄草水提物对胆汁淤积模型大鼠胆汁流量的影
响 见表 3。与空白对照组比较，模型组胆汁流量减
少（P < 0.05，P < 0.01），说明模型复制成功。与模
型组比较，溪黄草中剂量组在 75，90 min时间段的
胆汁流量显著升高（P < 0.01）；高剂量组在 6个时间
段的胆汁流量均有显著升高（P < 0.05， P < 0.01）；
UCUD组除 15 min外，其他 5个时间段胆汁流量也
均有显著升高（P < 0.05，P < 0.01），差异有统计学
意义。
2 . 3 肝脏病理切片的 H E 染色结果 见图 1。空白对
照组大鼠肝小叶结构正常，肝细胞排列整齐，未见肝
实质细胞病变。模型组与空白对照组比较，大鼠肝细
胞轻度脂肪变性，较多肝细胞内见脂肪空泡形成，可
组别
空白对照组
模型组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
UCUD组
剂量 /g·kg-1
0.08
20
40
60
0.1
AST/U·L-1
205.10± 48.84
1415.00± 186.93◆ ◆
1435.8± 175.55
1067.08± 291.90▲
707.40± 124.51▲ ▲
998.84± 260.20▲ ▲
ALT/U·L-1
144.54± 14.05
930.80± 246.16◆ ◆
855.13± 113.59
808.7± 104.00
915.40± 207.33
825.45± 107.77
ALP/U·L-1
123.30± 13.74
339.85± 34.72◆ ◆
381.85± 46.76▲
323.13± 41.49
411.0± 19.50▲
300.37± 22.96
γ - GT/U·L-1
11.52± 2.31
11.93± 2.31
13.57± 1.95
11.16± 2.40
14.65± 0.65
10.38± 0.93
表 3 溪黄草水提物干预作用对大鼠胆汁流量的影响（x ± s，n = 8）
Table 3 The effect of X i h u a n g c a o on the flow rate of bile in rats
组别
空白对照组
模型组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
UCUD组
15 min
3.88± 0.82
1.52± 0.27◆
1.74± 0.45
1.96± 0.58
7.04± 1.88▲
4.43± 0.36
30 min
3.09± 0.34
1.95± 0.87◆
2.84± 0.46
2.52± 0.53
5.41± 0.29▲ ▲
3.68± 0.32▲ ▲
45 min
3.50± 0.83
2.07± 0.62
2.87± 0.30
2.42± 0.13
5.11± 0.15▲ ▲
3.56 ± 0.14▲ ▲
60 min
3.06± 1.00
1.55± 0.19◆
2.76± 1.02
2.65± 0.53
5.59± 0.84▲ ▲
4.27± 0.73 ▲
75 min
2.87± 0.68
1.37± 0.42◆ ◆
1.73± 0.57
3.11± 0.74▲ ▲
5.34± 0.66▲ ▲
3.33± 0.43▲ ▲
90 min
2.92± 0.76
1.44± 0.35◆ ◆
1.91± 0.51
3.52± 1.06▲ ▲
5.21± 0.33▲ ▲
4.43± 0.60▲ ▲
给药后不同时间胆汁流量 /μ L·min-1·g-1
注：与空白对照组比较，◆ P < 0.05，◆ ◆ P < 0.01；与模型组比较，▲ P < 0.05，▲ ▲ P < 0.01。
表 1 溪黄草对大鼠血清 A S T、A L T、A L P 、γ - G T的影响（x ± s，
n = 8）
Table 1 The effect of X i h u a n g c a o on the serum AST，ALT，ALP
and r- GT in rats
注：与空白对照组比较，◆ ◆ P < 0.01；与模型组比较，▲ P < 0.05，
▲ ▲ P < 0.01。
表 2 溪黄草对大鼠 T C 、D B I L、T B I L、T B A 的影响（x ± s，n =
10）
Table 2 The effect of X i h u a n g c a o on the plasma TC，DBIL，
T B I L a n d T B A i n r a t s
注：与空白对照组比较，◆ ◆ P < 0.01；与模型组比较，▲ P < 0.05，
▲ ▲ P < 0.01。
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 September，Vol． 26 No． 5
见明显点状或灶性坏死，说明 ANIT复制模型成功。
溪黄草低剂量组大鼠仍可见较多肝细胞脂肪变性，较
多肝细胞内见脂肪空泡形成，可见明显点状或灶性坏
死；溪黄草中剂量组肝细胞轻度脂肪变性，肝细胞内
可见脂肪空泡形成，空泡的大小有所变小，可见明显
点状或灶性坏死；溪黄草高剂量组肝小叶结构正常，
肝细胞排列比较整齐，未见肝细胞内明显脂肪空泡，
但仍可见点状坏死的现象。UCUD组大鼠肝细胞轻度
脂肪变性，肝细胞内见脂肪空泡形成有所减少和变
窄。
空白对照组 模型组 UCUD组 溪黄草低剂量组 溪黄草中剂量组 溪黄草高剂量组
图 1 肝脏病理形态学变化（HE× 200）
Figure 1 Pathological changes in rat liver tissue（HE× 200）
3 讨论
ANIT是一种化合物，自 1952年一位美国专家用
他复制出肝内胆汁淤积模型以来，被广泛应用肝内胆
汁淤积模型的复制[3- 4]。ANIT作为一种间接毒剂，主
要损害肝内胆管上皮细胞，引起肝内胆管增生及小叶
问胆管周围炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆
汁瘀积，该模型复制简单易行，重现性好，是筛选和
研究保肝药物及利胆药物理想实验动物模型[5]。有学
者[6]对 ANIT诱发大鼠肝内胆汁淤积进行了动态病理
变化观察损伤的程度是可逆的，其在 48 h后会慢慢
恢复。
胆汁淤积症是内科临床上的常见综合症，其中药
物防治是重要手段，比较有代表性的药物是 UCDC[7]，
其药理作用在于减轻胆汁酸的毒性，保护肝细胞，防
止胆汁成分对细胞的进一步损伤。近年来对溪黄草的
药效研究以及物质基础的研究开始增多，但主要集中
于测定 AST、ALT、MDA以及病理切片，对在体大
鼠胆汁收集的动态情况以及肝功能指标的全面检测比
较少。
本实验采用 ANIT复制大鼠肝内胆汁淤积模型，
从血清中 8项肝功能生化指标、胆汁流量的收集以及
病理切片结果等方面研究了溪黄草对 ANIT诱发的实
验性大鼠肝内胆汁淤积模型的干预作用。
ALT与 AST主要分布在肝细胞内，能灵敏的反
应肝脏的炎症情况，其升高程度与肝细胞损伤程度相
一致，是重要的肝功能指标，TBIL、DBIL、ALP、
TC、γ - GT、TBA 是判断胆汁淤积程度的 6 项常规
指标，同时也是衡量受试药物疗效的重要指标[8]。结
果显示，溪黄草各剂量组各项指标（除 ALT、ALP、
γ - GT外）均较模型组有一定改善（P < 0.05，P < 0.01），
但部分未呈现一定量效关系。这可能与南药溪黄草
有效成分复杂，多靶点综合发挥药效有关。化合物
UCUD对 AST有改善，其他 7 项指标效果不明显，
这可能与 UCUD本身具有一定毒性有关，在造模前
给予熊去氧胆酸可对机体有不同程度的损伤。
溪黄草水提物对大鼠胆汁流量的实验结果显示，
与模型组比较，溪黄草中剂量组和 UCUD组的部分
时间段，以及溪黄草高剂量组 6个时间段的胆汁流
量均有显著升高（P < 0.05，P < 0.01）。从不同时间
胆汁流量的趋势来看，胆汁流量有一定的上下波动，
这是由于实验过程中收集胆汁是个动态过程，与大鼠
时间段的状态有关，胆汁引流管在收集过程中堵塞以
及收集管胆汁收集过程中的固定问题是本次实验的技
术难点和胆汁流量波动的主要因素，但整体上可以得
出溪黄草高剂量组与 UCUD组有明显提高胆汁流的
作用。
病理切片结果显示，熊去氧胆酸对肝损伤有一定
改善作用，溪黄草高剂量组对肝损伤也发挥了一定干
预作用。
综上，本实验从肝功能指标 8项指标、活体大鼠
胆汁收集以及病理切片的研究得出溪黄草水提取物对
ANIT诱发肝内胆汁淤积损伤具有一定干预改善作用。
后续还将通过检查胆汁中成分来进一步阐述溪黄草的
机制与药效学研究。
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（编辑：修春）
收稿日期：2015- 06- 01
作者简介：张玉笛，女，硕士，研究方向：风湿病、老年病的中西医结合研究。Email：perfect0316@163.com。通信作者：李荣亨，教授，博士生
导师，研究方向：风湿病、老年病的中西医结合基础与临床的研究。Email：Lrongheng1231@163.com。
基金项目：渝卫中医（［2008］38号 2008- 2- 35）。
复元胶囊含药血清促进骨关节炎软骨细胞合成Ⅱ型胶原、蛋白多糖的机制研究
张玉笛，周凌云，钟 玉，李荣亨（重庆医科大学附属第一医院中西医结合科，重庆 400016）
摘要：目的 观察复元胶囊是否通过调节 smad 3磷酸化水平促进骨关节炎软骨细胞合成Ⅱ型胶原（COL2A1）
及蛋白多糖（ACAN）。方法 体外培养人软骨瘤细胞株（SW1353），随机分为 3组：空白组、白介素 1β（IL-1β）
组、IL-1β+复元胶囊组。以最适浓度 15 %复元胶囊含药血清进行实验干预。CCK8法观察细胞的生长情况；
流式细胞术检测细胞周期；实时荧光定量 PCR（qRT-PCR） 检测细胞 COL2A1、ACAN mRNA 合成水平；
Western blot 检测细胞 smad 3 磷酸化水平。结果 IL-1β 组的细胞生长曲线，细胞增殖率（25.50±0.63），
COL2A1（0.523±0.009）、ACAN（0.201±0.035）mRNA及磷酸化 smad 3（p-smad 3）（1.026±0.003）蛋白表达水平
均低于空白组（P < 0.05）；IL-1β复元胶囊组的细胞生长曲线，细胞增殖率（37.55±0.71），COL2A1（0.701±0.
068）、ACAN（0.901±0.230）mRNA及 p-smad 3（1.527±0.003）蛋白表达水平均高于 IL-1β组（P < 0.01）。结论
复元胶囊可以通过上调 smad 3磷酸化水平，促进骨关节炎软骨细胞 COL2A1及 ACAN的合成，起到保护软骨
细胞的作用。
关键词：骨关节炎；复元胶囊；Ⅱ型胶原；蛋白多糖；smad 3
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）05-0639-06
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.05.016
Mechanism of Serum Containing Fuyuan Capsule in Promoting Synthesis of Collagen Type Ⅱ and
Aggrecan in Osteoarthritis Chondrocytes
ZHANG Yudi， ZHOU Lingyun， ZHONG Yu， LI Rongheng （Department of Integrated Chinese and Western
Medicine，the First Hospital Affiliated to Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）
Abstract： Objective To investigate the effect of Fuyuan capsule （FC）on the synthesis of collagen type Ⅱ
（COL2A1）and aggrecan （ACAN） by activating the phosphorylation state of smad3 in osteoarthritis（OA）
chondrocytes. Methods Human chondroblastoma cells（SW1353）were cultured in vitro and were randomly divided
into blank control group， IL-1β group，and combination group（treated with IL-1β and serum containing FC）.
The optimal intervention concentration of serum containing FC was set at 15 % . The cell growth curve was
measured by CCK8 assays， and cell cycle was analyzed by flow cytometry. The levels of COL2A1 and ACAN
mRNA expression were examined by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction（qRT-PCR）. The
phosphorylated smad 3 was tested by Western blot method. Results The cell growth curve，cell proliferation rate
（25.50±0.63），gene levels of COL2A1（0.523±0.009）and ACAN（0.201±0.035），protein level of p-smad3（1.
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