全 文 ：DOI:10． 13463 / j． cnki． jlzyy． 2014． 03． 025
溪黄草抗氧化活性有效部位筛选
张洪利1，莫小路2，汪小根1*
(1．广东食品药品职业学院，广州 510520;2．广东省中药研究所，广州 510520)
摘要:目的 筛选溪黄草抗氧化活性有效部位。方法 采用系统溶剂法将溪黄草乙醇提取物分成石油醚、氯
仿、正丁醇及水 4个部位，采用体外清除 DPPH自由基的方法筛选抗氧化活性部位并进一步研究其抗氧化活性。
结果 以溪黄草石油醚部位清除 DPPH自由基的能力最强，能有效抑制·OH和 O －2·的生成以及肝匀浆 MDA的产
生。结论 溪黄草不同提取部位均有一定的抗氧化能力，其中以石油醚部位抗氧化活性最好。
关键词:溪黄草;抗氧化;有效部位
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1003 －5699(2014)03 －0292 －03
［基金项目］广东省科技厅粤港关键领域重点突破项目(2009A030901011)。
［作者简介］张洪利(1972 －)，男，博士研究生，实验师。研究方向:中药活性物质。
* ［通信作者］汪小根，电子信箱:wangxg@ gdyzy． edu． cn
Study on screening of anti-oxidant fraction of Ｒobdosia serra
ZHANG Hongli1，MO Xiaolu2，WANG Xiaogen1*
(1． Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China;
2． Guangdong Ｒesearch Institute of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510520，China)
Abstract:Objective To screen the anti-oxidant fraction of Ｒobdosia serra． Methods The ethanol extract of Ｒ． serra
was partitioned into four fractions including petroleum ether，chloroform，n-butanol and water parts by systematic solvent
method． The anti-oxidant activity of the four fractions was determined by in vitro DPPH free radical screening method
and the anti-oxidant activity of active fraction was further studied． Ｒesults Petroleum ether fraction of Ｒ． serra possesses
the strongest DPPH scavenging ability among the four fractions of Ｒ． serra and can effectively inhibit ·OH and O －2· for-
mation and MDA generation in liver homogenate． Conclusion Each fraction of Ｒ． serra has anti-oxidant capacity against
free radical DPPH and the petroleum ether fraction shows the best anti-oxidant activity among them．
Key words:Ｒobdosia serra;anti-oxidant;effective fraction
溪黄草 Ｒobdosia serra (Maxim.)Har为唇形科香
茶菜属植物，是一种民间常用中草药，具有抗菌、抗感
染、保肝等作用［1］。目前，已有以溪黄草为主要成分的
保健食品上市，具有较好的市场份额。近年来，与脂质
过氧化相关的疾病越来越引起人们的注意，机体的氧
化和抗氧化过程之间的平衡对维持一个健康的生理活
动是十分重要的。过氧化脂质的大量产生会导致生物
膜结构损伤和功能障碍，从而影响到正常的生理过程，
诱导各种组织的炎症、免疫力下降及肿瘤等与衰老有
关的疾病。有研究［2］表明，溪黄草提取物具有较好的
抗脂质过氧化作用，显示其有良好的应用开发前景。
溪黄草提取物的研究目前多集中于水提物、醇提物的
活性研究［2-5］，而有效部位具有良好的安全性和有效
性，以及可控性和稳定性。笔者拟通过体外清除 DP-
PH自由基的方法初步筛选溪黄草抗氧化作用有效部
位，并进一步评价其清除羟基自由基(·OH)、超氧阴
离子(O －2·)和丙二醛(MDA)等的抗氧化活性，为进一
步开发疗效确切、质量可控的溪黄草提取物提供依据。
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1 实验材料
1. 1 仪器 UV-2600型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪
器有限公司);AC120S电子天平(Sartorius公司产品)。
1. 2 试药 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH，
梯希爱化成工业发展有限公司) ，邻二氮菲(天津市天
新精细化工开发中心，批号:20110602) ;邻苯三酚(上
海华蓝化学试剂有限公司) ;维生素 C(VitC，天津百世
化工有限公司) ;三氯醋酸(TCA，国药集团化学试剂有
限公司) ;2-硫代巴比妥酸(TBA，南京都莱生物技术有
限公司) ;石油醚、氯仿、正丁醇、乙醇均为分析纯;溪黄
草购自广州市清平药材市场，为唇形科香茶菜属植物
溪黄草 Ｒabdosin serra (Maxim)Hara的全草。
1. 3 动物 ICＲ小鼠，雄性，购自南方医科大学实验
动物中心，温度(22 ± 2)℃下饲养，自由摄水进食，许
可证号:SCXK(粤)2011-0015。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 溪黄草药材采用 90%乙醇
回流提取 1 h，得溪黄草乙醇提取物，挥干乙醇，用水稀
释后，采用等量的石油醚、氯仿、正丁醇分别萃取 3 次，
合并萃取液，萃取后剩余部分为水部位，各部位挥干溶
剂，用 95%乙醇溶解，制备终浓度为 1%的样品溶液。
2. 2 体外 DPPH自由基清除法筛选溪黄草有效部位
DPPH自由基是一种稳定的以氮为中心的质子自
由基，其乙醇溶液呈紫色，并在 517 nm 处有强烈吸
收，在有自由基清除剂存在时，自由基清除剂提供一
个电子与 DPPH的孤对电子配对，而使其褪色，褪色
程度与其接受的电子呈定量关系，即自由基清除剂的
清除自由基能力越强，吸光度越小［6］。精密称取 DP-
PH约 3. 5 mg，用 95%乙醇溶解，定容于 50 mL 容量
瓶中，置于冰箱中冷藏备用(临用时配)。取2 mL
95%乙醇与 2 mL DPPH 溶液混合，振摇，30 min 后，
测 A517 nm值(Ac) ;取样品液 2 mL与 2 mL DPPH溶液
充分振摇，静置 30 min，测 A517 nm值(Ai) ;样品溶液
2 mL与 2 mL95%乙醇混合后的 A517 nm值为 Aj
［7］。清
除率 =［1 －(Ai － Aj)/Ac］× 100%。结果见表 1。
表 1 溪黄草不同提取部位对 DPPH自由基的清除率
组别 浓度 /% 清除率 /%
VitC 1. 0 96. 2
石油醚部位 1. 0 89. 8
氯仿部位 1. 0 81. 0
正丁醇部位 1. 0 66. 7
水部位 1. 0 41. 6
结果显示，溪黄草各提取部位均有较好的 DPPH
自由基清除能力，其中以石油醚部位清除能力最好，
达到 89. 8%。
2. 3 溪黄草石油醚提取部位对羟自由基(·OH)的
清除作用的测定 H2O2 在 Fe
2 +存在下产生·OH 可
使邻二氮菲 － Fe2 +水溶液被氧化成邻二氮菲 － Fe3 +，
从而使邻二氮菲 － Fe2 +在 536 nm处的最大吸收峰消
失，由此可计算体系中·OH的量变化。
向 10 mL试管中依次加入 0. 75 mmol /L邻二氮菲
溶液 1. 0 mL、0. 15 mol /L PBS缓冲液(pH7. 4)1. 5 mL、
0. 75 mmol /LFeSO4 溶液 1. 0 mL、各供试样品溶液
0. 5 mL，充分混匀，反应前加入 1. 0 mL 0. 01% H2O2，
37 ℃水浴保温 60 min，于紫外-可见分光光度计下测吸
光值 A536，按以下公式计算羟自由基清除率:清除率 =
［(A2 －A4)－A3］/(A1 －A3)×100%，式中 A1 为未加抗
氧剂和 H2O2 管的吸光度值;A2 为既加抗氧剂，又加
H2O2 管的吸光度值;A3 为不加抗氧剂，只加 H2O2 管的
吸光度值;A4 为只加抗氧剂管的吸光度值
［8］。见图 1。
图 1 溪黄草石油醚提取部位对羟自由基(·OH)
的清除作用
结果显示，溪黄草石油醚部位对·OH 有较好的
清除能力，呈剂量依赖性，显示其较好的抗氧化能力。
2. 4 溪黄草石油醚提取部位对超氧阴离子自由基
(O －2·)抑制作用的测定 邻苯三酚自氧化能产生 O
－
2·和
有色物质，该有色物质在 325 nm 有吸收峰，如加入抗
氧化剂，就会抑制邻苯三酚自氧化，从而抑制有色物质
的产生。通过吸光度的变化则可判定药物的抗氧化能
力。向 PBS缓冲液(pH =8. 34)中加入 4 mmol /L邻苯
三酚溶液，并立即计时，在反应 1 min 时测邻苯三酚自
氧化反应溶液的吸光度值 A1(波长 325 nm)。取溪黄
草石油醚部位供试样品，加入上述反应体系中于反应
1 min时测定反应溶液的吸光度值 A2，并测定供试样品
的吸光度值 A3。以反应 1 min时的吸光度值计算供试
样品对 O －2·自由基的清除能力，计算方法如下:清除
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率 =［1 －(A2 － A3)/A1］×100%
［9］。见图 2。
图 2 溪黄草石油醚部位对超氧阴离子自由基
(O －2·)抑制作用
结果显示，溪黄草石油醚部位对 O －2·有一定的清
除能力，且随着剂量的增大而增大，1%浓度时好于
VitC的清除能力。
2． 5 溪黄草石油醚提取部位对小鼠肝匀浆自发性脂
质过氧化的影响 丙二醛(MDA)是脂质过氧化的主
要降解产物，其浓度多少可反应脂质过氧化及细胞受
损伤的程度。采用硫代巴比妥酸法测小鼠肝中 MDA
浓度，小鼠脱颈椎处死后立即打开腹腔，用预冷 4 ℃的
生理盐水从门静脉冲洗肝脏，取出肝脏，洗净表面血
污，用冷生理盐水制成 10%的匀浆，3 000 r /min 离心
10 min，取上清液备用。取匀浆液 1 mL，加入抗坏血酸
和不同浓度的溪黄草石油醚部位，0. 2 mL，37 ℃水浴保
温60 min，加入15% TCA 1 mL终止反应，再加入0. 67%
TBA 1 mL，于沸水浴中显色15 min，冷却后离心，取上清
液于 532 nm测定吸光度(A)［10］。结果见表 2。
表 2 溪黄草石油醚部位对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧
化的影响
组 别 浓度 /% A532 抑制率 /%
对照组 － 0． 061 －
VitC 1． 0 0． 045 26． 2
石油醚部位 0． 0625 0． 056 8． 2
0． 125 0． 049 19． 7
0． 25 0． 040 34． 4
0． 5 0． 036 41． 0
1． 0 0． 034 44． 3
由表 2 结果可以看出，溪黄草石油醚部位可以较
好的抑制小鼠肝匀浆自发脂质过氧化，降低 MDA 生
成，呈剂量依存性。
3 讨论
超氧阴离子、羟基自由基是常见的氧化物质，在
应激的条件下，这些物质会导致对生物大分子的损
害，进而导致细胞损伤，这些过程包括脂质过氧化产
生MDA、蛋白质氧化、DNA的损伤等。但氧化的过程
可被细胞的抗氧化能力阻止或逆转，比如 MDA 可被
SOD催化消除［11］。本研究以体外 DPPH 法研究溪黄
草各提取部位的抗氧化活性，本研究结果表明，溪黄草
不同提取部位均具有一定的清除 DPPH 自由基的能
力，其中以石油醚部位活性最高，表明溪黄草抗氧化活
性以多成分为基础，且脂溶性成分具有较高的抗氧化
能力。进一步的试验也表明，石油醚部位具有较好的
清除羟基自由基和超氧阴离子的能力，并能有效的抑
制小鼠肝匀浆 MDA 的产生。有研究［12］表明，采用石
油醚直接提取溪黄草得到的提取物清除羟基自由基的
效果不明显，可能与试验剂量小及提取顺序不同导致
成分有所差异有关。本研究的结果为溪黄草进一步提
取纯化，开发具有潜力的抗氧化剂提供了依据。
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(责任编辑:张瑞彬 收稿日期:2013 －10 －10)
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