全 文 ：半边旗 5F注射液的溶血性和过敏性实验研究 论著
吕应年 1　GGChen2　吴科锋 1　梁念慈 1
(1广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室　广东　湛江　524023;
2香港中文大学威尔士亲王医院外科室　香港　沙田)
　　【摘要】　目的　观察半边旗 5F注射液的制剂安全性。 方法　采用家兔红细胞体外孵育进行溶血性试验;采用豚
鼠经胫静脉给药进行全身过敏性试验。结果　半边旗 5F注射液在体外对家兔红细胞无溶血作用 , 对豚鼠不引起全身
过敏性反应。结论　半边旗 5F注射液是一种安全的注射用制剂。
　　【关键词】　半边旗　5F　注射液　溶血　过敏
StudiesonhemolysisandhypersensitivityofPsL5Finjections.LUYing-nian1 , GGChen2 , WUKe-feng1 , etal.1GuangdongKeyLabfor
researchanddevelopmentofnaturaldrugs, GuangdongMedicalCollege, ZhanjiangGuangdong524023, China;2DepartmentofSurgery, Prince
ofWalesHospital, theChineseUniverstyofHongkong, Shatian, Hongkong.
【Abstract】　Objective　ToevaluatethesafetyofPsL5Finjections.Methods　Thehemolytictestandalergictestwereadopted.Inhaemo-
lytictests, hemolysisandcoagulationweremainlyobservedwithin3hours.Inallergictest, thereactionofcavywithin15minafterinjectionwas
observed.Results　Invitro, PsLinjectiondidntcausehemolysis, andallergicreactiondidnotoccurincavy.Conclusion　ThePsLinjectionis
safeinapplicationthatisbasedonanimalexperiment.
【Keywords】　PsL;5F;Injections;Hemolysis;Hypersensitivity
　　基金项目:本项目获得广东省和香港科技创新署合作项目基金的帮
助 ,基本项目编号为:粤港合作项目 GHP022/06
　　半边旗(pterissemipinnataL, PsL)为凤尾蕨属植
物 ,收载于 《中华药物大词典 》,广泛分布于我国南方
各省 ,民间常用于治疗蛇伤 、外伤出血 、抗菌痢 、肠炎 、
肝炎等 [ 1] 。本课题组在筛选抗肿瘤植物药时发现 ,半
边旗的乙醇及水提取物显示良好的体内外抗肿瘤活
性 [ 2, 3] ,进一步纯化得到一种贝壳杉烷型二萜化合
物 [ 4] , 11α-羟基 -15 -氧 -16-烯 -对映贝壳杉烷
-19 -酸 , 简称 5F。该物质具有刚性四环二萜结
构 [ 5] ,其抗肿瘤活性可能与分子中 α、β -不饱和环戊
酮结构有关 。由于该物质疏水性强 ,难溶于水 ,影响了
药效发挥 ,为此本课题组进行制剂研究 ,增加药物的溶
解度 ,制成主要成分是 5F的半边旗注射液单方制剂 。
药理学研究表明半边旗 5F注射液对 SPCA-1 , K562
瘤株有显著的体外抗肿瘤活性 ,对荷瘤小鼠肝癌 He-
pA、S180在体内也有抗肿瘤活性 [ 6] ,有潜力开发成临
床用新药。本试验按照国家药监局新药审批要求对半
边旗注射液的体外溶血性和全身过敏性展开动物试验
研究 ,为该制剂的开发应用提供参考。
1　材料与方法
1.1　药品　半边旗 5F注射液 ,本品为无色澄明液体 ,
规格为 2 mg/ml,每支装量 4 ml,批号为 20070502 ,由广
东天然药物研究与开发重点实验室研制。
1.2　动物　新西兰系白色家兔 1只 ,雄性体质量 1.8 ～
2.3kg。豚鼠 18只 ,雌雄各半 ,体质量 200 ～ 300 g。以
上试验动物由广东医学院动物中心提供 , 合格证号
2002A014。
1.3　方法
1.3.1　溶血性试验 [ 7] 　取健康供试家兔 ,心脏穿刺采
血 10 ～ 20 ml,置含玻璃珠的三角瓶中 ,小心振摇除去纤
维蛋白 ,然后将血移入刻度离心管中 ,加入灭菌生理盐
水 10ml,混匀后 3 000转 /min离心 5 min,去除上清液 ,
再加灭菌生理盐水混匀离心 ,反复洗 3 ～ 4次至上清液
呈无色透明 ,所得的红细胞按其容积 ,加灭菌生理盐水
稀释成 20ml/L的红细胞悬液 。取试管 7支 ,按表 1依
次加入各种溶液 ,第 6管不加供试品作为空白对照 ,第 7
管用蒸馏水代替灭菌生理盐水作阳性对照 ,于 37℃水
浴中保温 ,记录 0.5h, 1 h, 2 h, 3h结果。
1.3.2　全身过敏性试验　取豚鼠 18只 ,雌雄各半 ,随
机分为 6组 ,每组 3只 ,连续 3次隔日腹腔注射 0.5 ml/
只 ,第 1、2组为半边旗注射液试验组 ,第 3、4组为生理
盐水阴性对照组 ,第 5、6组为蛋清液阳性对照组 。第 1、
2组分别在 14 d、21 d后由胫静脉注射供试药液 1 ml/
只进行过敏攻击试验 ,第 3、4组分别在 14 d、21 d后注
射灭菌生理盐水 1ml/只 ,第 5、6组分别在 14d、21d后
注射 10%蛋清液 1 ml/只 ,观察静脉注射供试药物 15
min内产生的反应。如有抓鼻 、竖毛 、呼吸困难 、痉挛 、
休克甚至死亡等过敏反应症状 ,按表 1分级。反应级数
达到 2级及以上者 ,判断供试品有过敏反应[ 8] 。
表 1　全身过敏性试验评级标准
级数 反应症状
0 无明显反应
1 轻微抓鼻 、竖毛或颤抖
2 连续咳嗽 ,抓鼻 、竖毛或颤抖
3 多次或连续咳嗽 ,伴有呼吸困难或痉挛抽搐等
4 痉挛抽搐 ,大 、小便失禁 ,休克死亡
·8· JournalofClinicalandExperimentalMedicineVol.8, No.1　Jan.2009
2　结果
2.1　溶血性试验结果　溶血性试验在 0.5 ～ 3.0 h内
除第 7管(阳性对照组)溶液呈现澄明红色外 ,其余 6管
均未见澄明红色 ,且红细胞全部下沉 ,上层液体无色澄
明 ,经振摇后红细胞能均匀分散。表明半边旗 5F注射
液无溶血及无凝集作用 ,试验结果见表 2。
2.2　全身过敏性试验结果　半边旗注射液试验组和生
理盐水阴性对照组分别于第 1次腹腔注射后第 14d、21
d进行攻击 ,均未发生过敏反应 ,动物评级为 0级 ,蛋清
液阳性对照组豚鼠于注射后 5 min内出现呼吸困难 ,抽
搐倒下 ,随后死亡 ,动物评级为 4级。表明在本次试验
条件下 ,半边旗注射液对豚鼠无全身性致敏作用。
表 2　溶血性试验加药顺序及结果
试管编号 反应试液加入量(ml)红细胞悬液 灭菌生理盐水 蒸馏水 半边旗注射液
溶血反应观察结果
0.5h 1h 2h 3h
1 2.5 2.0 0.0 0.5 - - - -
2 2.5 2.1 0.0 0.4 - - - -
3 2.5 2.2 0.0 0.3 - - - -
4 2.5 2.3 0.0 0.2 - - - -
5 2.5 2.4 0.0 0.1 - - - -
6 2.5 2.5 0.0 0.0 - - - -
7 2.5 0.0 2.5 0.0 +++ +++ +++ +++
　　注:全溶血溶液呈透明红色 ,管底无细胞残留 ,记为 +++;部分溶血 溶液呈透明红色或棕色 ,管底有少量红细胞残留 ,记为 +;无溶血红细胞全部
下沉 ,上层溶液呈无色透明 ,记为 -;凝集无溶血 ,但红细胞振摇不分散 ,记为 φ。
3　讨论
本品是从草药半边旗中提取有效成分 5F制备而成
的注射液单方制剂 ,制备工艺按照注射剂的要求控制操
作 ,质量标准按照中药 、天然药物注射剂基本技术要求
开展 ,本品的体外溶血性试验和全身过敏性动物试验结
果均为阴性 ,表明本品作为注射剂具有一定的安全性。
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·9·临床和实验医学杂志　2009年 1月　第 8卷　第 1期