全 文 ：【文章编号】1005-4057( 2003) -02-0100-02 基础研究
一种分离与纯化半边旗有效成分 5 F的新方法
兰柳波 1　邓亦峰 2　梁念慈 1　莫丽儿 3
( 1.广东医学院生物化学教研室 ; 2.广东天然药物研究与开发实验室; 3.广东医学院化学教研室 ,广东湛江 524023)
【基金项目】国家自然科学基金 ( 3987099)和广东省自然科学基金
( 940586)项目资助
【收稿日期】2002-06-08;【修订日期】2002-11-10
【作者简介】兰柳波 ,男 , 1975年出生 ,医学硕士 ,助教 , E-mail:
lanlanyu@ 21cn. com
【摘要】目的: 寻找一种有效地分离和纯化半边旗抗肿瘤有效成分 5F的新方法。 方法:提取出半边旗成分 5F和 4F的
混合物后 ,制备含 AgNO3的硅胶柱 ,用此柱分离和纯化 5F。结果: 获得 5F和 4F的产品 ,经测定后其纯度令人满意。结论:
含 AgNO3的硅胶柱可以有效地分离纯化半边旗有效成分 5F。
【关键词】半边旗 ; 5F;含 AgNO3的硅胶柱 ;纯化
【中图分类号】R 06-332;　【文献标识码】A
A new method for isolating and purifying the active compound 5F from Pteris semipinnate L .
L AN Liu-bo ,DEN G Yi -feng ,L IANG N ian-ci ,et al
( Depar tment of Biochemistry , Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
【Abstract】 Objective: To find a new method fo r isolating and purifying the activ e compound 5F f rom Pteris
semipinnata L . ( PsL) . Methods: Afte r the mix ture o f 5F and 4F w as ex tracted fr om PsL , AgNO3-soaked silica g el co lumn
was prepa red to purify th e compound 5F. The products w ere identified by liquid chr omato g raphy /mass spectrometr y ( LC /
M S) . Results: There w as a satisfacto r y purifica tion o f the com pound 5F. Conclusion: AgNO3-soakedsilica g el co lumn could
be an effectiv e me thod fo r isola ting and purifying th e ac tiv e compound 5F from Ps L.
【Key words】Pteris semipinnata L . ; 5F; AgNO3-soaked silica g el co lumn; purification
　　半边旗 ( PsL )是凤尾蕨科凤尾蕨属植物 ,广泛分
布于我国江南西南各省区 ,是民间常用的中草药 ,其有
效成分之一 5F有很强的抗癌作用 [1, 2 ] ,但常与其它物
质混合在一起 ,难于分开 [3 ]。 本文是一种分离与纯化
5F新方法的介绍。
1　材料和方法
1. 1　材料
半边旗采摘于广东省广州市郊区 ,并由湛江海洋
大学扬燕君副教授鉴定。硅胶 HF254购自青岛海洋化工
厂 (薄层层析用 )。
1. 2　半边旗有效成分的分离提取
1. 2. 1　粗提物的提取　半边旗全草经乙醇冷浸取法
得浸泡液 ,浓缩后经活性炭脱色 ,得粗提物。
1. 2. 2　 5F及 4F混合物的获得　粗提物用常规的硅
胶柱层析方法分离 ,洗脱剂为氯仿 /甲醇 (体积比从
99∶ 1至 95∶ 5)。分部收集 ,经浓缩、重结晶后得到 5F
及 4F的混合物 (图 1)。
基础 5F结构式 ( NW= 332)　 4F结构式 ( MW= 334)
图 1　化合物 5F和 4F的结构式
1. 3　 5F的分离纯化
1. 3. 1　含 AgNO3硅胶柱的制备　用少量水溶解
AgNO3后 ,再用丙酮稀释成 100 g /L的溶液 ,浸泡硅
胶 HF2 54 (粒度 < 38μm) ,避光放置过夜。 次日挥干丙
酮及其中的水份 ,装柱 ( 2× 40 cm ) [4 ]。
1. 3. 2　 5F的分离纯化　将 5F和 4F的混合物上柱 ,
避光条件下进行硅胶柱层析 ,用氯仿 /甲醇进行梯度洗
脱 (体积比从 99. 5∶ 0. 5至 98∶ 2) ,分部收集、浓缩 ,
用薄层层析进行初步鉴定 (展开剂为体积比 95∶ 5的
氯仿 /甲醇 ) ,经重结晶后得到产品 5F及 4F。
1. 4　结构及纯度鉴定
用岛津公司 LCM S-QP8000α液质联用仪 ,鉴定所
得的 5F和 4F的结构及纯度 ,并与纯化前的混合物进
100
　第 21卷第 2期
2003年 4月 　　　　　
广　东　医　学　院　学　报
JOU RN AL OF GUAN GDONG M EDICAL COLLEGE
　　　　 Vol. 21 No. 2　
Apr. 2003　
行比较。
2　结果
2. 1　 LC /M S谱图比较
如图 2、 3、 4所示 ,纯化前的混合物中出现两个主
峰 ,提示含有两种主要的组分 ,而纯化后的 5F和 4F
的总离子流图中出现单一峰 ,提示仅存在一种物质。
5F在紫外吸收谱图中有紫外吸收峰 , 4F则没有 ,这与
它们的结构是否存在不饱和键有关。在质谱图中 ,所出
现的碎片峰也符合 5F和 4F的结构 , 5F的分子量为
332, 4F为 334,因此 331及 333的碎片峰分别为二者
的 ( M— 1)峰 (即分子脱氢峰 )。
图 2　混合物的 LC /MS谱图
图 3　 5F产品的 LC/MS谱图
图 4　 4F产品的 LC/MS谱图
2. 2　 5F纯度的变化
在各物质的总离子流图中 ,采用峰面积归一化法
计算 5F及 4F的相对含量: 在各物质的总离子流图
中 ,利用计算机对各组份的响应信号 (峰 )进行面积的
积分 ,然后采用归一化的方法计算出各组份的含量 (纯
度 )。结果如表 1如示。纯化前的产品为混合物 ,所以
含有一定量的 5F及 4F;而纯化后所得的产品 5F及
4F的纯度较高 , 5F及 4F的含量均达到 99%以上。
表 1　纯化前后产品中 5F及 4F相对含量的变化
产品
5F
　峰面积
(人工单位 )　
相对含量
　 (% )
4F
　峰面积
(人工单位 )　　
相对含量
　 (% )
5F与 4F混合物 15052044 35. 42 27438204 64. 58
5F 50014023 99. 27 367321 0. 73
4F 375462 0. 50 75237850 99. 50
3　讨论
关于半边旗抗肿瘤作用的有效成分已有报道 ,主
要为 6F、 A及 5F[2 ] ,其中的 5F虽然抗肿瘤效果不是
最好 ,但是由于其提取过程较简单 ,含量最高 ,因此是
目前将半边旗开发成新药的首选目标。利用以往的常
规提取工艺所得到的产品中 ,由于 5F与 4F结构的相
似性 ,使得二者在物理及化学性质上差异甚小 ,因此
5F多与 4F混合在一起。要得到纯度较高的 5F产品比
较困难 [3 ]。 虽然 4F不影响 5F的抗肿瘤作用 ,但对于
进一步的成分分析及定量研究有不利的影响。
本文借鉴饱和及不饱和脂肪酸的分离方法 ,利用
AgNO3结合到普通硅胶上 ,将混合物经过柱层析分离
后可以得到 5F和 4F的纯品。其作用原理可能是基于
Ag
+ 与 π电子的相互作用 ,含不饱和键的 5F有 π电
子 ,而饱和的 4F则没有。 因此 Ag+与 5F中的 π电子
结合 ,就使得硅胶柱对不饱和的 5F的吸附性增强 ,从
而提高了柱的选择性。利用这种 Ag+ 与 π电子的相互
作用达到分离 5F与 4F的目的 [5-7 ]。
在本文的研究中还发现 ,尽管利用 AgNO3结合
的硅可以分离出 5F和 4F的纯品 ,但是有时候所得的
产品中易混有 AgNO3这一杂质 ,这个问题虽然可以
用 NaCl小柱除去 ,但过程略嫌繁琐。 因此 ,下一步的
研究方向是改进纯化的工艺 ,或是寻找新型的层析用
填料 ,以方便快捷地得到 5F的纯品。本工作仅从分离
纯化的角度进行探索和尝试 ,并拿到了迄今为止纯度
最高的 5F产品 ,这对于深入进行半边旗有效成分提
取工艺的改进研究提供了一个指导的方向 ,也从药物
分析的角度提供了标准参考物质。
参考文献
[ 1]中国科学院中国植物志编辑委员会主编 .中国植物志 .第 2
版 .北京:科学出版社 , 1990: 10-11
[ 2 ]张晓 ,崔燎 ,田中信寿 ,等 .半边旗有效成分及抗肿瘤活性
研究 .中国药学杂志 , 1997, 32( 1): 37-38
[ 3]何承伟 ,梁念慈 ,莫丽儿 ,等 .半边旗抗肿瘤有效成分对 HL-
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1999, 30(增刊 ): 117-118
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101　第 2期　　　　　　　　　　　　兰柳波 ,等 . 一种分离与纯化半边旗有效成分 5 F的新方法