全 文 ：作者简介:秦增贵，男，副主任药师，研究方向:药物分析，E－mail:641388017@ qq．com
通信作者:柳克浩，男，中药师，研究方向:中药检验，Tel:0634－6212179，E－mail:zifeng12021@ 163．com
一测多评法测定白花丹参中丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的含量
秦增贵，柳克浩，高长青，秦超
(莱芜市食品药品检验检测中心，山东 莱芜 271100)
摘要:目的 《山东省中药材标准》中收载的白花丹参项下只控制了丹参酮ⅡA一种成分，现参考《中国药典》
(2010年版)丹参项下丹参酮类测定方法，通过实验验证该方法在白花丹参药材中应用的准确性和可行性，达到质
量可控的目的。方法 测定白花丹参药材中 3个有效成分，将其作为指标性成分，利用公式计算确立 3种成分的相
对校正因子，得到隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的含量，达到一测多评的目的。同时以外标法测得数据，进行比较。结果
线性关系良好，方法精密度，重复性符合要求。结论 该方法适用于白花丹参的含量测定，重现性良好，具备可
行性。
关键词:一测多评法;白花丹参;质量控制
中图分类号:Ｒ927．2 文献标识码:A 文章编号:2095－5375(2016)08－0457－004
doi:10．13506 / j．cnki．jpr．2016．08．005
Determination of tanshinoneⅡA，cryptotanshinone and tanshinone Ⅰ in Salvia miltiorrhiza
Bge with quantitative analysis of multi－components by single－maker
QIN Zenggui，LIU Kehao，GAO Changqing，QIN Chao
(Laiwu Center for Food and Durg Control，Laiwu 271100，China)
Abstract:Objective Salvia miltiorrhiza Bge only controls tanshinone ⅡA written in Standard Chinese herbal
medicines in Shandong Province，and now to use quantitative analysis of multi－components by single－maker to measure the c
－ontent of tanshinone ⅡA，tanshinone Ⅰ and cryptotanshinone in Salvia miltiorrhiza Bge to test the accuracy and practica-
bility of this method．Methods To make these three active ingredients as indicators，creat the relative response factors of
tanshinone ⅡA，cryptotanshinoe and tanshinone Ⅰ，calculate the content of cr yptotanshinoe and tanshinone Ⅰ，and deter-
mine the contents of indicators with externalstandard method，compare the difference between calculated value and measured
value，in order to test the accuracy and practicability of quantitative analysis of multi－components by single－maker．Ｒesults
The solvent had good linear relationship and the precision and reproducibility of the method were in accord wih the re-
quests．Conclusion This method was reproducible，feasible，and suitable for the determination of Salvia miltiorrhiza Bge．
Key words:Quantitative analysis of multi－components by single－maker;Salvia miltiorrhiza Bge;Quality control
白花丹参是山东莱芜道地药材，作为丹参的一
个变型，《山东省中药材标准》(2012 年版)收载为
唇形科植物白花丹参(Salvia miltiorrhiza Bge)的干
燥根和根茎。苦，微寒。归心、肝经［1］。原标准对
丹参酮类中的丹参酮ⅡA含量进行了控制。
现代研究表明，白花丹参富含丹参酮类化合物，
尚含有一个结构比较新颖的二萜类衍生物［2］。现
代药理研究表明，白花丹参具有保护脑梗死、抗氧
化、抗癌等作用，民间流传应用其治疗血栓闭塞性脉
管炎已有一百多年的历史［3］。其中的隐丹参酮对
宫颈癌 Hela细胞有较强的细胞毒性，能起到杀伤肿
瘤的作用［4］;丹参酮Ⅰ能够起到抑制小鼠 B16 黑色
素瘤细胞，促进细胞凋亡作用［5］;丹参酮ⅡA作用较
多，除具有抗癌［6］作用外，目前研究较多的是心脑
血管领域［7］。因此有效控制包括隐丹参酮在内的
丹参酮类化合物的含量，对达到控制白花丹参药材
及其制剂质量、确保其临床使用效果的目的有着重
要意义。
·754·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol．35，No．8
国家药典委员会在《中国药典》2015 年版编制
大纲一部纲要中，提出要重点引入一测多评、指纹和
特征图谱、DNA 分子鉴定、生物测定等新的分析方
法和检测技术。王智民等［8］以木通为例，验证了利
用中药有效成分之间的函数、比例关系，只测定对照
品容易得到的一个成分，来实现多个成分的同步监
控的效果。鉴于白花丹参药材中的隐丹参酮、丹参
酮Ⅰ较难得到和降低检测成本的目的，本试验参照
相关文献［9－11］应用一测多评法对白花丹参进行质量
控制研究。
1 仪器与试药
LC－20A高效液相色谱系统(日本岛津公司);
XS105 DualＲange 电子分析天平(Mettler Toledo，瑞
士);KQ－250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司);乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净
水，其他试剂均为分析纯。隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹
参酮ⅡA(供含量测定用，批号分别为 110852 －
200305、0867－200205 和 110766－200619，中国药品
生物制品检定所)。
本试验所用 5批白花丹参样品购自莱芜紫光生
态园，以上药材均经莱芜市食品药品检验检测中心
副主任中药师高长青鉴定为白花丹参(Salvia milti-
orrhiza Bge)。
2 方法与结果
2．1 指标成分含量测定的高效液相色谱(HPLC)色
谱条件 采用 LC－20A高效液相色谱系统，InertSus-
tain C18色谱柱(4．6 mm×250 mm，5 μm);流动相:乙
腈为 A，0. 02%磷酸溶液为 B;进行梯度洗脱，分析
时间为 30 min，0 ～ 6 min 内 A－B 保持 61 ∶ 39，6 ～ 20
min内 A－B从 61 ∶ 39→90 ∶ 10，20 ～ 20．5 min 内 A－B
从 90 ∶ 10→61 ∶ 39，20．5～30 min内 A－B 保持 61 ∶ 39;
柱温:20 ℃;流速:1．0 mL min－1;检测波长:270 nm;
进样量:10 μL。在该试验条件下，各成分的分离度
符合规定。
2．2 对照品溶液的制备 分别取对照品适量，用甲
醇定容制成每 1 mL含隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮
ⅡA 0．51、0．91和 0．82 mg 对照品储备液，分别取对
照品储备 1 mL，置 50 mL 棕色量瓶中，用甲醇定容
至刻度，即得 3 种组分对照品溶液(隐丹参酮
0．010 2 mg·mL－1，丹参酮Ⅰ 0．018 2 mg·mL－1，丹
参酮ⅡA 0．016 4 mg·mL
－1)。
2．3 供试品溶液的制备 将药材粉碎后过 50 目
筛，称取粉末约 0．3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
精密加入甲醇 50 mL，密塞称重并记录，超声处理
(功率 150 W，40 kHz)30 min，放冷后称重，用甲醇
补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，再用 0．45
μm滤膜过滤即得。
2．4 方法学考察
2．4．1 线性范围考察 设置自动进样程序，吸取对
照品溶液 2、5、10、15、20 μL，注入液相色谱仪，按照
以上设定的色谱条件进行实验，记录测得的峰面积，
以峰面积(Y)为纵坐标，以进样量(X，μg)为横坐
标，绘制标准曲线，隐丹参酮曲线为 Y = 7× 106 X－
25 725，线性范围:0．020 4～ 0．204 μg，r = 0．999 8;丹
参酮Ⅰ曲线为 Y = 7 × 106 X + 29 761，线性范围
0．036 4～0．364 μg，r= 0．999 2;丹参酮ⅡA曲线为Y=
9×106X + 2 721．9，线性范围 0．032 8 ～ 0．328 μg，r =
1。各标准曲线在线性范围内线性良好。
2．4．2 精密度试验 设置自动进样程序，吸取对照
品溶液 10 μL，连续测定 6 次，记录 3 种成分的峰
面积，得出精密度 ＲSD 值分别为丹参酮ⅡA:
0. 39%、丹参酮Ⅰ:1．1%、隐丹参酮:0．76%，表明精
密度良好。
2．4．3 稳定性试验 利用制备的供试品溶液一批，
在上述色谱条件下，分别于 0、2、4、8、10、12、24、48 h
进样，记录测得的峰面积，得出稳定性的 ＲSD 值依
次为丹参酮ⅡA:1．7%、丹参酮Ⅰ:1．6%、隐丹参酮:
1．8%，即供试品溶液在该试验条件下 48 h内稳定。
2．4．4 重复性试验 取用同批次已知含量的白花
丹参药材粉末 6份，精密称定，按“2．3”项下方法制
备供试液，按“2．1”项下操作进样测定，测得平均质
量分数分别为丹参酮ⅡA:0． 215 8%、丹参酮Ⅰ:
0．076 3%、隐丹参酮:0．095 5%，ＲSD 值分别为
1. 4%、1．7%和 1．3%，表明方法重复性良好。
2．4．5 回收率试验 取用同批次已知含量的白花
丹参药材(品系 1)粉末约 0．15 g，精密称定，分别精
密加入配制好的 3种对照品溶液适量，按“2．3”项下
方法制备供试品溶液，按“2．1”项下方法测得峰面
积，计算加样回收率和 ＲSD，结果见表 1。
2．5 校正因子的计算 采用“2．1”项下试验条件，
将“2．3”项下供试品按照 2、5、10、15、20、25 μL体积
进样测定，测得各成分的峰面积，含量测定图谱见图
1，根据相对保留时间定位色谱峰，按公式(Wk ×
Sm)/(Wm×Sk)= fk / fm = fk /m(式中 Wk为内参物的质
量或浓度，Wm为其他组分 m的质量或浓度;Sk 为内
参物峰面积，Sm为其他组分 m的峰面积)，以丹参酮
ⅡA为参照，计算其对另两种成分的相对校正因子 f，
结果见表 2。
·854· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol．35，No．8
表 1 加样回收率试验
成分
称样量
(g)
含量
(mg)
加入量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
丹参酮ⅡA
0．147 1 0．313 3 0．328 0 0．639 2 99．36
99．58 1．5
0．154 2 0．328 4 0．328 0 0．661 2 101．45
0．152 6 0．325 0 0．328 0 0．651 7 99．58
0．151 4 0．322 5 0．328 0 0．642 2 97．49
0．153 0 0．325 9 0．328 0 0．657 6 101．14
0．158 8 0．338 2 0．328 0 0．661 1 98．43
丹参酮 I
0．147 1 0．148 6 0．154 7 0．305 1 101．20
99．31 1．1
0．154 2 0．155 7 0．154 7 0．308 5 98．75
0．152 6 0．154 1 0．154 7 0．308 8 99．96
0．151 4 0．152 9 0．154 7 0．305 8 98．83
0．153 0 0．154 5 0．154 7 0．308 0 99．23
0．158 8 0．160 4 0．154 7 0．311 9 97．91
隐丹参酮
0．147 1 0．076 5 0．081 6 0．157 5 99．23
97．85 1．3
0．154 2 0．080 2 0．081 6 0．159 8 97．62
0．152 6 0．079 4 0．081 6 0．159 3 97．96
0．151 4 0．078 7 0．081 6 0．157 5 96．56
0．153 0 0．079 6 0．081 6 0．160 7 99．45
0．158 8 0．082 6 0．081 6 0．161 1 96．26
A．对照品;B．供试品 1．隐丹参酮;2．丹参酮Ⅰ;3．丹参酮ⅡA
图 1 隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量测定的 HPLC图
表 2 丹参酮ⅡA对隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的相对校正因子
进样体积(μL) 隐丹参酮 丹参酮Ⅰ
2 0．744 5 0．800 4
5 0．748 7 0．800 6
10 0．738 8 0．794 3
15 0．768 1 0．801 1
20 0．770 1 0．766 5
25 0．737 6 0．773 5
平均值 0．751 3 0．789 4
ＲSD(%) 1．9 1．9
2．6 耐用性考察 考察 Agilent 1200、Shimadzu LC－
20A 2个色谱系统与 InertSustain C18(4．6 mm×250 mm，5
μm)、Agilent 5 －TC －C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)、
Kromasil 100A－C18(4．6 mm×250 mm，5 μm)3种色谱柱
对相对校正因子的影响，结果见表 3，结果表明，不同色
谱系统与色谱柱对相对较正因子影响不大。
表 3 耐用性考察
仪器 色谱柱
相对较正因子
隐丹参酮 丹参酮Ⅰ
InertSustain 0．738 1 0．784 3
Agilent 1200 Agilent 0．754 5 0．796 9
Kromasil 0．769 6 0．810 5
InertSustain 0．740 4 0．785 6
Shimadzu LC－20A Agilent 0．753 1 0．794 7
Kromasil 0．771 2 0．798 1
平均值 0．754 5 0．795 0
ＲSD(%) 1．8 1．2
2．7 色谱峰定位依据考察 考察在使用 2 套色谱
系统、3 种色谱柱时各待测成分与内参物的保留时
间差、相对保留时间 2个参数。结果表明，相对保留
时间更适合作为定位参数，结果见表 4～5。
表 4 相对保留时间考察结果
仪器 色谱柱
相对较正因子
隐丹参酮 丹参酮Ⅰ
InertSustain 0．742 0．794
Agilent 1200 Agilent 0．740 0．798
Kromasil 0．739 0．785
InertSustain 0．745 0．798
Shimadzu LC－20A Agilent 0．743 0．802
Kromasil 0．752 0．806
平均值 0．744 0．797
ＲSD(%) 0．6 0．9
表 5 保留时间差考察
仪器 色谱柱
相对较正因子
隐丹参酮 丹参酮Ⅰ
InertSustain 5．639 4．421
Agilent 1200 Agilent 5．647 4．418
Kromasil 5．649 4．416
InertSustain 5．652 4．415
Shimadzu LC－20A Agilent 5．664 4．396
Kromasil 5．374 4．305
平均值 5．604 4．395
ＲSD(%) 2．0 1．0
2．8 验证试验 取用 5批白花丹参药材粉末(过三
号筛)，精密称定，按“2．3”项下方法制备各供试品
溶液，按“2．1”项下方法进行测定。采用外标法和一
测多评法计算丹参药材中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹
参酮ⅡA含量，见表 6。
表 6 样品测定结果
样品
丹参酮ⅡA 丹参酮Ⅰ 隐丹参酮
外标法 外标法 QAMS 外标法 QAMS
品系 1 0．213 0．101 0．100 0．052 0．051
品系 2 0．195 0．070 0．069 0．043 0．041
品系 3 0．172 0．095 0．093 0．045 0．046
品系 4 0．143 0．084 0．082 0．042 0．043
品系 5 0．208 0．124 0．122 0．091 0．091
(下转第 496页)
·954·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2016 Vol．35，No．8
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(上接第 459页)
3 讨论
本试验参考《中国药典》2010年版(一部)［12］方
法，对白花丹参中丹参酮类含量进行了测定。相对
于当前白花丹参标准《山东省中药材标准》(2012 年
版)，含量测定仅局限于丹参酮ⅡA的测定，本论文
论证了一测多评对白花丹参中丹参酮类含量测定的
可行性，从而可测得白花丹参中丹参酮类的总量，为
进一步提高白花丹参标准提供了依据，另一方面也
更好的反映了白花丹参的质量情况，有利于对药材
自身的质量控制，也方便了对药材的质量评价。相
对来讲也减少了对照品的使用，节省了试验成本，达
到了准确有效节约的目的，是一个相对来讲值得推
广的方法。
郭东晓等［13］从中药次级代谢产物角度分析
了—测多评法的应用前景，也证实一测多评对中药
材的质量控制有着重要的意义。通过对中药材多种
有效成分的一次性检测，即达到了全面了解中药材
质量的目的，也节省了试验成本。并且在证明了中
药材所含成分的复杂性的同时，从另一方面对中药
配伍做了印证。
本试验论证了一测多评对中药材试验的可行
性，证明了此种方法对质量控制的意义和重要性，为
以后中药材标准的提高提供了参考。
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