全 文 ：收稿日期:2015-09-26
基金项目:江西省卫生厅中医指导性计划(2013B014);江西省科技厅青年科学基金资助项目(20122BAB215044)
作者简介:罗文艳(1983-)，女，硕士，主管药师，主要从事医院药学研究;Tel:13755690202，E-mail:472973049@ qq. com。
* 通讯作者:段和祥，Tel:13755653518，E-mail:duanhx_007@ 163. com。
一测多评法测定蒌蒿药材中 10 种成分的含量
罗文艳1，段和祥2* ，杨毅生2，刘绪平2，程奇珍2
(1. 南昌大学第四附属医院，江西 南昌 330003;2. 江西省药品检验检测研究院 /江西省药品与医疗器械质
量工程技术研究中心，江西 南昌 330029)
摘要 目的:建立一测多评法同时测定蒌蒿药材中 10 种成分的含量。方法:以白藜芦醇为内参物，建立白藜
芦醇与绿原酸、咖啡酸、芦丁、毛蕊花糖苷、7-甲氧基香豆素、肉桂酸、槲皮素、木犀草素和异鼠李素的相对校正因子，
计算各成分的含量。同时采用外标法测定这 10 种成分的含量，比较两者之间的差异，以验证一测多评法的准确性
和可行性。结果:采用一测多评法和外标法测定的结果无显著差异。结论:该方法准确度高、回收率好，可用于蒌
蒿药材中多成分的质量评价。
关键词 一测多评法;蒌蒿;相对校正因子
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)04-0822-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 04. 031
蒌蒿 Artemisia selengensis Turcz. ex Bess. 为菊科
蒿属植物，又名藜蒿、芦、蒿、芦蒿、水蒿、荑蒿等，在
我国各地均有分布，全草入药，有止血、消炎、镇咳、
化痰等功效〔1〕。课题组前期研究发现蒌蒿醋酸乙
酯提取部位对人肝癌细胞有较好的活性〔2〕，并对醋
酸乙酯部位进行了化学成分研究，从中分离得到 11
个化合物〔3〕。本试验采用一测多评法以含量较高
的白藜芦醇为内参物，建立其与其他待测成分的相
对校正因子，同时测定蒌蒿药材中 10 种成分的含
量，以期为蒌蒿药材的质量控制和评价提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Shimadzu LC-20A 高效液相色谱仪(包
括 SPD-M20A 二极管阵列检测器、SIL-20A 自动进
样器、LabSolutions 工作站);Agilent 1260 高效液相
色谱仪(包括 G1312B四元泵、G1329A自动进样器、
G1315D二极管阵列检测器、G1316A 柱温箱、Agi-
lentChemStation 工作站);色谱柱(250 mm × 4. 6
mm，5 μm):InertSustain C18、Syncronis C18、Sharpsil-U
C18;MS 105 十万分之一电子天平、ML 204 /02 万分
之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);
VD53 真空干燥箱(德国 BINDEＲ 公司);KQ-500E
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Synerg-
guv 超纯水器(美国密里博公司)。
1. 2 材料 绿原酸(批号:110753-201415)、咖啡酸
(批号:110885-200102)、毛蕊花糖苷(批号:111530-
201411)、芦丁(批号:100080-201409)、白藜芦醇
(批号:111535-200502)、7-甲氧基香豆素(批号:
111513-200001)、肉桂酸(批号:110786-200503)、槲
皮素(批号:100081-201408)、木犀草素(批号:
111520-200504)和异鼠李素(批号:110860-201410)
对照品均由中国食品药品检定研究院提供。实验用
蒌蒿药材采自江西省九江市鄱阳湖畔草滩，经江西
省药品检验检测研究院袁桂平主任中药师鉴定为菊
科蒿属植物蒌蒿 Artemisia selengensis Turcz. ex Bess.
的全草。甲醇为色谱纯;其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Sharpsil-U C18(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm);流动相:甲醇(A)-0. 1%甲酸溶液
(B)，梯度洗脱(0 ～ 70 min，10% ～ 85% A);流速:
1. 0 mL /min;柱温:35 ℃;检测波长:320 nm;进样
量:10 μL。此条件下各组分分离度良好，理论板数
按白藜芦醇峰计算不低于 3 000，色谱图见图 1。
2. 2 混合对照品溶液的制备 分别精密称取对照
品绿原酸 11. 05 mg、咖啡酸 10. 64 mg、毛蕊花糖苷
10. 08 mg、芦丁 10. 31 mg、白藜芦醇 10. 22 mg、7-甲
氧基香豆素 9. 85 mg、肉桂酸 10. 10 mg、槲皮素
10. 54 mg、木犀草素 10. 39 mg、异鼠李素 10. 52 mg，
置 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
作为混合对照品储备液;精密量取混合对照品储备
液 1 mL，置 50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇
匀，作为混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 称取蒌蒿药材 10 g，切
碎，加 95%乙醇回流提取 2 次，每次 2 h，合并提取
液，滤过，浓缩，浓缩液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙
酯萃取，弃去石油醚和氯仿萃取液，得乙酸乙酯萃取
液，减压回收乙酸乙酯，减压真空干燥，得乙酸乙酯
·228· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 4 期 2016 年 4 月
图 1 混合对照品(A)和蒌蒿药材(B)HPLC图谱
1. 绿原酸 2. 咖啡酸 3. 毛蕊花糖苷 4. 芦丁 5. 白藜
芦醇 6. 7-甲氧基香豆素 7. 肉桂酸 8. 槲皮素 9. 木犀
草素 10. 异鼠李素
部位。取乙酸乙酯部位，经硅胶柱色谱，以二氯甲
烷-甲醇梯度洗脱，弃去二氯甲烷-甲醇(50 ∶ 1)洗脱
液，收集二氯甲烷-甲醇(5∶ 1)洗脱液，合并洗脱液，
减压回收溶剂，将浓缩液置 100 mL量瓶中，用 70%
甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用 0. 45 μm 有机微
孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察:分别精密量取“2. 2”项下制
备的混合对照品溶液 1、2、5、10、20、30 μL，分别注
入高效液相色谱仪，以混合对照品进样量 X(μg)为
横坐标，峰面积 Y为纵坐标，绘制标准曲线，结果见
表 1。结果表明各成分进样量在各自范围内与峰面
积呈良好的线性关系。
表 1 蒌蒿药材 10 种成分的线性关系考察结果
成分 标准曲线 r 线性范围 /μg
绿原酸 Y = 1781. 4X + 1047. 6 0. 9998 0. 0085 ～ 0. 2551
咖啡酸 Y = 1091. 7X + 889. 62 0. 9998 0. 0085 ～ 0. 2554
毛蕊花糖苷 Y = 3600. 5X + 1457. 8 1. 0000 0. 0076 ～ 0. 2284
芦丁 Y = 1031. 3X + 750. 33 0. 9998 0. 0076 ～ 0. 2274
白藜芦醇 Y = 4741. 1X + 1349. 2 0. 9998 0. 0082 ～ 0. 2453
7-甲氧基香豆素 Y = 4010. 1X + 2178. 5 0. 9999 0. 0079 ～ 0. 2364
肉桂酸 Y = 148. 33X + 28. 342 0. 9996 0. 0081 ～ 0. 2424
槲皮素 Y = 908. 28X － 200. 12 0. 9998 0. 0084 ～ 0. 2507
木犀草素 Y = 1608. 8X + 1048. 9 0. 9997 0. 0083 ～ 0. 2494
异鼠李素 Y = 1429. 9X + 1530. 5 0. 9998 0. 0084 ～ 0. 2522
2. 4. 2 精密度试验:精密量取“2. 2”项下制备的混
合对照品溶液 10 μL，连续进样测定 6 次，记录 10
种成分的峰面积，计算 ＲSD 分别为 0. 38% ～
2. 79%，表明仪器精密度良好。
2. 4. 3 稳定性试验:精密量取“2. 3”项下供试品溶
液 10 μL，分别于制备后的 0、4、8、12、24、36 h 进样
测定，分别记录 10 种成分的峰面积，计算 ＲSD 分别
为 0. 81% ～3. 24%，表明供试品溶液在 24 h内稳定
性良好。
2. 4. 4 重复性试验:取 6 份同一蒌蒿药材各约 10
g，精密称定，按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，分
别进样测定，计算得 10 种成分的平均含量分别为
1. 224、0. 254、0. 743、0. 039、1. 078、0. 233、0. 766、
0. 951、2. 419、0. 237 mg /g，ＲSD 分别为 1. 05% ～
3. 84%，表明该方法的重复性良好。
2. 4. 5 加样回收率试验:取 6 份蒌蒿药材各约 10
g，精密称定，分别精密加入“2. 2”项下制备的混合
对照品溶液 1 mL，按“2. 3”项下方法制备供试品溶
液，进样测定，计算各成分的加样回收率。结果绿原
酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、芦丁、白藜芦醇、7-甲氧基
香豆素、肉桂酸、槲皮素、木犀草素、异鼠李素的加样
回收率分别为 96. 8%、97. 1%、97. 4%、98. 2%、
101. 3%、96. 6%、97. 8%、97. 7%、99. 2%、98. 4%;
ＲSD 分别为 0. 87%、0. 64%、1. 2%、2. 4%、1. 1%、
3. 5%、2. 8%、0. 49%、0. 18%、2. 9%，表明该方法具
有较好的回收率。
2. 5 一测多评法
2. 5. 1 相对校正因子的计算:以白藜芦醇为内参
物，采用斜率校正法〔4〕，根据相对校正因子计算公
式 fk /s = ak /as(a 为各成分回归方程的斜率，s 为内
参物，k为其他待测组分)，分别计算绿原酸、咖啡
酸、毛蕊花糖苷、芦丁、7-甲氧基香豆素、肉桂酸、槲
皮素、木犀草素、异鼠李素与内参物白藜芦醇的相对
校正因子。
2. 5. 2 校正因子重现性考察:精密吸取“2. 2”项下
混合对照品溶液 10 μL，进行测定分析，考察不同实
验室 2 种高效液相色谱系统(Shimadzu LC-20A 和
Agilent 1260)和 3 种不同品牌的色谱柱(InertSustain
C18、Syncronis C18和 Sharpsil-U C18，规格均为 250 mm
× 4. 6 mm，5 μm)对相对校正因子的影响，结果 ＲSD
均小于 2%，表明在不同实验室、不同色谱系统和不
同色谱柱下具有良好的重现性。结果见表 2。
2. 5. 3 待测组分色谱峰的定位:在无对照品的条
件下，准确定位每个色谱峰是一测多评法成功应用
的关键，文献〔5，6〕大都采用相对保留时间或保留时
间差来定位。本试验以白藜芦醇为内参物，采用相
对保留时间结合化合物的紫外光谱特征来定位，计
算不同色谱仪与色谱柱的相对保留时间。结果见表
3，ＲSD小于 3%，表明该方法重现性好。
·328·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 4 期 2016 年 4 月
表 2 在不同色谱仪与色谱柱中蒌蒿药材 9 种成分的校正因子
仪器 Shimadzu LC-20A Agilent 1260
色谱柱 InertSustain Syncronis Sharpsil-U Sharpsil-U
平均值 ＲSD /%
f绿原酸 /白藜芦醇 0. 376 0. 382 0. 377 0. 376 0. 378 0. 76
f咖啡酸 /白藜芦醇 0. 230 0. 228 0. 237 0. 230 0. 231 1. 71
f毛蕊花糖苷 /白藜芦醇 0. 759 0. 751 0. 764 0. 759 0. 758 0. 71
f芦丁 /白藜芦醇 0. 218 0. 217 0. 215 0. 218 0. 217 0. 65
f7-甲氧基香豆素 /白藜芦醇 0. 846 0. 852 0. 849 0. 846 0. 848 0. 34
f肉桂酸 /白藜芦醇 0. 031 0. 030 0. 031 0. 031 0. 031 1. 63
f槲皮素 /白藜芦醇 0. 192 0. 188 0. 190 0. 192 0. 191 1. 01
f木犀草素 /白藜芦醇 0. 339 0. 344 0. 342 0. 339 0. 341 0. 72
f异鼠李素 /白藜芦醇 0. 302 0. 308 0. 311 0. 302 0. 306 1. 47
表 3 不同条件下的相对保留时间
仪器 Shimadzu LC-20A Agilent 1260
色谱柱 InertSustain Syncronis Sharpsil-U Sharpsil-U
平均值 ＲSD /%
r绿原酸 /白藜芦醇 0. 534 0. 512 0. 541 0. 539 0. 532 2. 51
r咖啡酸 /白藜芦醇 0. 621 0. 615 0. 608 0. 623 0. 617 1. 09
r毛蕊花糖苷 /白藜芦醇 0. 886 0. 895 0. 904 0. 872 0. 889 1. 53
r芦丁 /白藜芦醇 0. 983 0. 949 0. 995 0. 992 0. 980 2. 16
r7-甲氧基香豆素 /白藜芦醇 1. 063 1. 024 1. 058 1. 086 1. 058 2. 42
r肉桂酸 /白藜芦醇 1. 199 1. 237 1. 219 1. 213 1. 217 1. 29
r槲皮素 /白藜芦醇 1. 229 1. 275 1. 297 1. 264 1. 266 2. 24
r木犀草素 /白藜芦醇 1. 280 1. 292 1. 304 1. 275 1. 288 1. 01
r异鼠李素 /白藜芦醇 1. 410 1. 429 1. 437 1. 401 1. 419 1. 17
2. 5. 4 一测多评法与外标法测定结果的比较:取
采自鄱阳湖畔蒌蒿样品 3 批，按“2. 3”项下方法制
备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液与混合对
照品溶液各 10 μL，进样测定，采用 QAMS 法与外标
法计算各成分含量，相对偏差 ＜ 2%，表明 2 种方法
所测含量无显著差异，见表 4。
表 4 一测多评法与外标法测定蒌蒿药材中 10 种成分含量对比(mg/g)
序号 方法 白藜芦醇 绿原酸 咖啡酸 毛蕊花糖苷 芦丁
7-甲氧基
香豆素
肉桂酸 槲皮素 木犀草素 异鼠李素
1 外标法 1. 224 0. 254 0. 743 0. 039 1. 078 0. 233 0. 766 0. 951 2. 419 0. 237
QAMS 0. 247 0. 750 0. 039 1. 055 0. 230 0. 759 0. 948 2. 425 0. 241
2 外标法 1. 594 0. 312 0. 815 0. 045 1. 004 0. 215 0. 845 0. 974 2. 526 0. 283
QAMS 0. 309 0. 808 0. 046 0. 997 0. 212 0. 841 0. 971 2. 527 0. 282
3 外标法 2. 117 0. 471 0. 694 0. 100 1. 125 0. 354 0. 785 0. 912 2. 382 0. 254
QAMS 0. 466 0. 702 0. 098 1. 130 0. 349 0. 779 0. 917 2. 385 0. 256
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 本试验采用 DAD 检测器，
在 190 ～ 400 nm波长下对混合对照品溶液中的待测
成分进行了全波长扫描，结果芦丁、肉桂酸、槲皮素
的最大吸收波长分别为 255、276、254 nm;木犀草素
和异鼠李素的最大吸收波长为 350、370 nm;绿原
酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、白藜芦醇、7-甲氧基香豆素
的最大吸收波长分别为 325、323、330、305、322 nm。
兼顾各待测成分色谱峰的峰高与分离度，最终选择
320 nm为检测波长。
3. 2 内参物的选择 蒌蒿中白藜芦醇含量相对较
高，作为蒌蒿的主要质量控制成分，可获得性较强，
以白藜芦醇为内参物，建立其与绿原酸、咖啡酸、毛
蕊花糖苷、芦丁、7-甲氧基香豆素、肉桂酸、槲皮素、
木犀草素、异鼠李素的相对校正因子，在不同液相色
谱系统与色谱柱中 ＲSD 小于 2%，相对保留时间
ＲSD小于 3%。采用一测多评法与外标法同时检测
3 批蒌蒿药材中 10 种成分的含量，相对偏差小于
2%。该方法可作为蒌蒿药材质量的一种有效评价
方式。
·428· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 4 期 2016 年 4 月
参 考 文 献
［1］林镕，林有润 . 中国植物志［M］．第 76(2)卷 . 北京:科
学出版社，1991:144.
［2］段和祥，黄宇枚，王栋，等 . 蒌蒿抗肿瘤作用活性部位的
筛选［J］．中国医药导报，2015，12(12):13-16.
［3］段和祥，罗文艳，杨毅生，等 . 蒌蒿醋酸乙酯部位化学成
分研究［J］．中草药，2015，46(10):1441-1444.
［4］何兵，杨世艳，张燕 . 一测多评中待测成分校正和定位
的新方法研究［J］．药学学报，2012，47(12):1653-1659.
［5］宋丽萍 . 一测多评法测定茵陈中 4 种酚酸类成分含量
［J］．中药材，2015，38(4):774-776.
［6］林绍霞，张清海，席培宇，等 . 一测多评法同时测定栀子
中 6 种成分研究［J］．中药材，2015，38(3):531-535.
·528·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 4 期 2016 年 4 月