全 文 ：　 收稿日期：２０１５－０５－１０　　　修回日期：２０１５－０６－２４
基金项目：国家科技重大专项（Ｎｏ．２００９ＺＸ０９５０２０２７－００３）
　＊通讯作者：吴加伦，男，副教授，硕士研究生导师，主要从事中药材中农药环境毒理和农药残留分析研究．
Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｌｗｕ＠ｚｊｕ．ａｄｕ．ｃｎ
第３２卷第３期
Ｖｏｌ．３２　Ｎｏ．３
分 析 科 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ
２０１６年６月

Ｊｕｎ． ２０１６
ＤＯＩ：１０．１３５２６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－６１４４．２０１６．０３．０２３
二甲戊乐灵在溪黄草及土壤中的残留分析方法研究
刘凯丽１，段敏敏１，吴加伦＊１，王德勤２，张慧晔２，徐友阳２
（１．农业部植物病原及昆虫分子生物学重点实验室，浙江大学农药与环境毒理研究所，浙江杭州３１００５８；
２．广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东广州５１００００）
摘　要：本文对溪黄草样品采用丙酮－正己烷提取，活性炭－中性氧化铝柱净化，石油醚－
丙酮淋洗前处理；土壤样品经乙腈提取等步骤前处理，建立了溪黄草及土壤中二甲戊乐
灵残留的气相色谱－电子捕获检测器（ＧＣ－ＥＣＤ）的分析方法。结果表明：二甲戊乐灵的
最小检出量为０．１ｎｇ，其在溪黄草和土壤中的最低检测浓度均为０．０１ｍｇ／ｋｇ，在溪黄
草中的平均回收率为８８．５３％～９０．４５％，相对标准偏差（ＲＳＤ）为１．３３％～２．７６％；在
土壤中的平均回收率为９３．９４％～９６．２３％，ＲＳＤ为４．６７％～４．８０％，二甲戊乐灵在
０．０１～２ｍｇ／Ｌ范围内具有良好的线性关系。
关键词：二甲戊乐灵；溪黄草；土壤；气相色谱法
中图分类号：Ｏ６５７．７＋１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００６－６１４４（２０１６）０３－４０１－０４
溪黄草为唇形科植物线纹香茶菜［Ｒａｂｄｏｓｉａ　ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ（Ｈａｍ．ｅｘ　Ｄ．Ｄｏｎ）Ｈａｒａ］的干燥全草［１］，
别名山熊胆、风血草等，它具有清热利湿、退黄、凉血散瘀之功，用于湿热黄疸、跌打瘀肿［２］，对肝癌细胞、肺
癌细胞、胃癌细胞也有一定的抑制作用［３－５］。但溪黄草在种植过程中经常受到杂草的危害，而除草剂的使
用可以大大降低除草成本，且能有效提高产量，因此，农药残留量的检测对中草药的安全生产十分重要。
二甲戊乐灵（Ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ）具有毒性低，酸碱中稳定，杀草谱广的特点［６］，可有效防除田间多种杂
草，尤其对禾本科杂草有较好的防除效果。其检测方法有多种，如李永新等［７］用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）测
定水中的二甲戊乐灵；杨挺等［８］用气相色谱－电子捕获检测法（ＧＣ－ＥＣＤ）检测豆类蔬菜中二甲戊乐灵的残
留；Ｅｓｒｔｕｋ等［９］建立了测定生菜中二甲戊乐灵等多残留的液相色谱－串联质谱（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）方法。但尚
未见二甲戊乐灵在溪黄草中的残留分析方法的报道。本文建立了一种简便、高效检测溪黄草及土壤中二
甲戊乐灵残留的ＧＣ－ＥＣＤ分析方法，该方法精确度和准确度均符合残留分析的要求。
１　实验部分
１．１　主要仪器与试剂
Ａｇｉｌｅｎｔ－７８９０Ａ型气相色谱仪（美国，Ａｇｉｌｅｎｔ公司），带６３Ｎｉ－μＥＣＤ检测器；ＫＱ５２００ＤＥ型数控超声波
清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ＵＩＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ型匀浆机（德国，ＩＫＡ公司）；ＤＤ０１型中药粉碎机
（浙江温岭市大德中药机械有限公司）；Ｈｅｉｄｏｌｐｈ　Ｌａｂｏｒｏｔａ　４０１０ｄｉｇｉｔａｌ旋转蒸发仪（德国，Ｈｅｉｄｏｌｐｈ集团）。
二甲戊乐灵（Ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ）标准品，纯度为９８．４％，购于迪马科技有限公司。助滤剂Ｃｅｌｉｔｅ５４５（硅藻
土载体）；活性炭（分析纯，浓盐酸中加热煮沸１ｈ，用蒸馏水洗至中性，烘干后在６００℃灼烧２ｈ）。中性氧
化铝（粒径７５～１５０μｍ），弗罗里硅土（粒径１５０～２５０μｍ）。中性氧化铝、弗罗里硅土、无水 Ｎａ２ＳＯ４ 需
６００℃灼烧４ｈ，用前１３０℃烘２ｈ。中性氧化铝、弗罗里硅土用前加入３％的水脱活；正己烷（色谱纯），丙
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第３期 刘凯丽 等：二甲戊乐灵在溪黄草及土壤中的残留分析方法研究 第３２卷
酮、正己烷、苯、乙腈均经过全玻璃蒸馏装置重蒸（分析纯）。
溪黄草及土壤样品采自广东清远溪黄草ＧＡＰ基地（未施用过二甲戊乐灵），土壤用采样器取试验基
地０～１０ｃｍ的土层，磨碎过２０目筛，备用。
１．２　样品制备
１．２．１　土壤样品制备　称取过２０目筛的土壤样品２０．０ｇ，置于２５０ｍＬ的带螺纹盖样品瓶中，准确加入
乙腈８０ｍＬ，旋紧螺纹盖，超声提取３０ｍｉｎ，过滤，准确量取滤液４０ｍＬ，经无水Ｎａ２ＳＯ４ 脱水后，减压浓缩
近干，氮吹仪吹干，正己烷定容至４ｍＬ，待测。
１．２．２　溪黄草样品制备　称取溪黄草鲜样５．０ｇ（精确至０．０１ｇ），置于２５０ｍＬ的带螺纹盖样品瓶中，准
确加入６０ｍＬ丙酮∶正己烷＝１∶１（Ｖ／Ｖ），高速匀浆１ｍｉｎ，加入１ｇ助滤剂，超声提取３０ｍｉｎ，提取液经布
氏漏斗过滤，３０ｍＬ提取液洗涤残渣，合并滤液，转入２５０ｍＬ平底烧瓶中，经旋转蒸发仪浓缩至近干，氮
吹仪吹干，待净化。
层析柱（从下至上依次为２ｃｍ无水Ｎａ２ＳＯ４，０．１５ｇ活性炭、５ｇ中性氧化铝和２ｇ弗罗里硅土混合
物，２ｃｍ无水Ｎａ２ＳＯ４）均匀敲实，淋洗液为正己烷∶苯＝４∶１（Ｖ／Ｖ）。先用３０ｍＬ正己烷预淋洗，弃去淋出
液，将上述样品转入柱中，用８０ｍＬ淋洗液洗脱，收集洗脱液于２５０ｍＬ平底烧瓶中，经旋转蒸发仪浓缩近
干，氮吹仪吹干，正己烷定容至４ｍＬ，待测。
１．３　色谱条件
色谱柱：ＤＢ－５柱（３０ｍ×０．３２ｍｍ×０．２５μｍ）；进样口温度：２５０℃；检测器温度：３００℃；程序升温：起
始温度为１００℃，以２０℃／ｍｉｎ升至２２０℃，保持１０ｍｉｎ，以３０℃／ｍｉｎ升至２８０℃，保持５ｍｉｎ；不分流进
样；柱流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；尾吹：３０．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样体积：１μＬ。
２　结果与讨论
２．１　二甲戊乐灵提取溶剂的选择
土壤样品用丙酮或乙腈提取，两者回收率均能达到９０％以上，但丙酮提取，进样后杂质峰较多，而乙
腈提取，杂质峰较少，故土壤样品采用乙腈提取。溪黄草鲜样分别采用正己烷、丙酮、乙腈和体积比为１∶１
的丙酮∶正己烷提取，正己烷回收率低，仅为１５％左右；丙酮提取色素太重，层析柱净化后杂质仍很多；乙
腈提取有干扰峰；而用丙酮∶正己烷＝１∶１（Ｖ／Ｖ）提取，无干扰峰，且回收率可达８５％以上。
２．２　溪黄草中二甲戊乐灵的净化
李闯等［１０］采用中性氧化铝和活性炭净化，研究了乙氧氟草醚、二甲戊乐灵和乙草胺在大蒜植株和土
壤中的残留分析方法。Ｅｎｇｅｂｒｅｔｓｏｎ等［１１］采用固相萃取（ＳＰＥ）净化，建立了二甲戊乐灵在水果、蔬菜、坚
果和薄荷中的残留分析方法。本实验对溪黄草的净化手段和洗脱溶剂选取了几种方法，并进行了比较，结
果如表１。
表１　４种净化手段和２种洗脱液的净化效果比较
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　４ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　２ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｅｌｕｅｎｔｓ
Ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ
Ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ（％） ＲＳＤ（％）
ｎ－Ｈｅｘａｎｅ∶Ｂｅｎｚｅｎｅ
（Ｖ／Ｖ＝８∶２）８０ｍＬ
ｎ－Ｈｅｘａｎｅ∶Ａｃｅｔｏｎｅ
（Ｖ／Ｖ＝８∶２）８０ｍＬ
ｎ－Ｈｅｘａｎｅ∶Ｂｅｎｚｅｎｅ
（Ｖ／Ｖ＝８∶２）８０ｍＬ
ｎ－Ｈｅｘａｎｅ∶Ａｃｅｔｏｎｅ
（Ｖ／Ｖ＝８∶２）８０ｍＬ
０．１５ｇ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ／５ｇ　ｎｅｕ－
ｔｒａｌ　ａｌｕｍｉｎａ ８９．２２　 ９３．６３　 ２．１２　 ３．３８
０．１５ｇ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ／５ｇ　ｆｌｏｒｉｓｉｌ　 ９１．７３　 ９４．６６　 １．９８　 ２．６１
５ｇ　ｎｅｕｔｒａｌ　ａｌｕｍｉｎａ／２ｇ　ｆｌｏｒｉｓｉｌ　 ９０．８１ － ２．８６ －
０．１５ｇ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ／５ｇ　ｎｅｕｔｒａｌ
ａｌｕｍｉｎａ／２ｇ　ｆｌｏｒｉｓｉｌ
８９．４５　 ９１．１８　 １．９９　 ２．９７
最终选择０．１５ｇ活性炭、５ｇ中性氧化铝、２ｇ弗罗里硅土层析柱净化，正己烷∶苯（８∶２，Ｖ／Ｖ）８０ｍＬ
洗脱的方法，其他净化方法回收率虽然普遍高于本方法，但有些杂质会对目标峰产生干扰，同时浓缩定容
后色素含量高，进样后会严重影响色谱柱柱效。
２０４
第３期 分 析 科 学 学 报 第３２卷
２．３　检测器的选择
目前，二甲戊乐灵的检测方法有多种，普遍采用气相色谱法或高效液相色谱法。气相色谱法当前广泛
采用电子捕获检测器（ＥＣＤ）。林爱军等［１２］等采用气相色谱－氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）测定菘蓝中二甲
戊乐灵含量，但ＥＣＤ检测器灵敏度高，稳定性好，故本方法采用气相色谱法，ＥＣＤ检测器检测。
２．４　标准曲线
准确称取二甲戊乐灵标准品０．１０１６ｇ，用正己烷配制成１　０００ｍｇ／Ｌ的标准储备液，进而再稀释成质
量浓度分别为２、１、０．５、０．２、０．０５和０．０２ｍｇ／Ｌ的系列标准工作溶液，由低浓度向高浓度进行检测，平行
测定６次。以标准溶液质量浓度Ｘ（ｍｇ／Ｌ）为横坐标，峰面积Ｙ 为纵坐标，建立线性回归方程。线性回归
方程为：Ｙ＝３６２９５　Ｘ－４２５，相关系数Ｒ２为０．９９９８，二甲戊乐灵在质量浓度为０．０１～２ｍｇ／Ｌ之间时具有
良好的线性关系。
２．５　方法的准确度和精密度
选取适量土壤及溪黄草空白样品，分别进行二甲戊乐灵的添加回收率试验。分别称取土壤样品２０．０ｇ
和溪黄草样品５．０ｇ，土壤样品的添加水平分别为１．０、０．１、０．０１ｍｇ／ｋｇ，溪黄草样品的添加水平分别为
１．０、０．５、０．０１ｍｇ／ｋｇ。分别按１．２和１．３的方法进行样品处理和仪器分析，测定二甲戊乐灵的添加回收
率和相对标准偏差（ＲＳＤ），每个添加水平重复３次，结果见表２。
表２　二甲戊乐灵在土壤及溪黄草中添加回收率（ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ　ｉｎ　Ｒａｂｄｏｓｉａ　ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ　Ｈａｒａ　ａｎｄ　ｓｏｉｌ（ｎ＝３）
Ｓａｍｐｌｅ Ｓｐｉｋｅｄ　ｌｅｖｅｌ（ｍｇ／ｋｇ）
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ（％）
１　 ２　 ３
Ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ
（％）
ＲＳＤ
（％）
Ｓｏｉｌ　 １．０　 ８９．９２　 ９３．２８　 ９８．６２　 ９３．９４　 ４．６７
０．１　 ９３．７１　 １０１．３４　 ９２．５３　 ９５．８６　 ４．７８
０．０１　 ９０．９６　 ９９．５７　 ９８．１５　 ９６．２３　 ４．８０
Ｒａｂｄｏｓｉａ　 １．０　 ８９．２０　 ８７．５８　 ９１．３３　 ８９．３７　 １．８８
ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ　Ｈａｒａ　 ０．５　 ８９．１８　 ９１．８３　 ９０．３４　 ９０．４５　 １．３３
０．０１　 ８５．３７　 ８９．７２　 ９０．５０　 ８８．５３　 ２．７６
结果表明，土壤的回收率在８９．９２％～１０１．３４％之间，相对标准偏差（ＲＳＤ）为４．６７％～４．８０％；溪黄
草的回收率在８８．５３％～９０．４５％之间，相对标准偏差（ＲＳＤ）为１．３３％～２．７６％。分别以３倍和１０倍信
噪比（Ｓ／Ｎ）确定得二甲戊乐灵的最小检出量（ＬＯＤ）为０．１ｎｇ，土壤和溪黄草中最低检测浓度（ＬＯＱ）均为
０．０１ｍｇ／ｋｇ。
３　结论
中草药的安全问题近年来备受重视，二甲戊乐灵作为世界上销售额最大的选择性除草剂，其残留检测
的需求极为迫切。本文建立的溪黄草和土壤中二甲戊乐灵残留的分析方法，操作简单，分析速度快，定性
定量准确，灵敏度高，稳定性好，同时可为制定二甲戊乐灵（二硝基苯胺类）在成分更加复杂的中草药中的
检测方法标准提供一定的参考。
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Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ（中国中药杂志）［Ｊ］，２００９，３４（１０）：１２９７．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｒｅｓｉｄｕｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ　ｉｎ
ＲａｂｄｏｓｉａｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓＨａｒａａｎｄ　Ｓｏｉｌ
ＬＩＵ　Ｋａｉ－ｌｉ　１，ＤＵＡＮ　Ｍｉｎ－ｍｉｎ１，ＷＵ　Ｊｉａ－ｌｕｎ＊１，ＷＡＮＧ　Ｄｅ－ｑｉｎ２，
ＺＨＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｈｕａ２，ＸＵ　Ｙｏｕ－ｙａｎｇ２
（１．Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｃｒｏｐ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ａｎｄ　Ｉｎｓｅｃｔｓ，
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５８；
２．Ｔｈｅ　Ｂａｉｙｕｎ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　ａｎｄ　ｙｅｌｌｏｗ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ｗｉｔｈ　ａｎ　ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ　ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＧＣ－ＥＣＤ）．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌｉｍｉｔ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ
ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ　ｗａｓ　０．１ｎｇ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　０．０１ｍｇ／ｋｇ　ｉｎ　ｂｏｔｈ
Ｒａｂｄｏｓｉａ　ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ　Ｈａｒａ　ａｎｄ　ｓｏｉｌ．Ｔｈｅ　ｆｏｒｔｉｆｉｅｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ　ｗｅｒｅ　８８．５３％－９０．４５％
ａｎｄ　９３．９４％－９６．２３％ｉｎ　Ｒａｂｄｏｓｉａ　ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ　Ｈａｒａａｎｄ　ｓｏｉｌ，ｗｉｔｈ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ（ＲＳＤｓ）
ｏｆ　１．３３％－２．７６％ａｎｄ　４．６７％－４．８０％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ
０．０１－２．０ｍｇ／Ｌ　ｆｏｒ　ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅｎｄｉｍｅｔｈａｌｉｎ；Ｒａｂｄｏｓｉａ　ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ　Ｈａｒａ；Ｓｏｉｌ；Ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
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