全 文 ：收稿日期:2008-09-26
基金项目:湖南省科技厅资助课题(2008FJ3077), 湖南省大
学生创新性实验设计项目(2008269)
作者简介:欧阳玉祝(1956-), 男 ,教授 , 主要从事天然产物
开发研究。 E-mail:ouyang1227@126.com
海金沙提取物体外抑菌性能研究
欧阳玉祝 ,唐赛燕 ,秦海琼 ,唐红玉
(吉首大学 化学化工学院 , 湖南 吉首 416000)
摘　要　用 MIC和纸片法考查了海金沙提取物对藤黄球菌 、枯草芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌
的抑菌性能。结果表明:海金沙对 4种受试菌株都有抑菌活性;37℃时 , 醇提物对乙型溶血性链球菌的抑菌效果最
好 , 最大抑菌圈为 8.5mm;42℃时 , 对藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌效果最好 , 最大抑菌圈分别为
21、13.2和 6.5 mm。pH值为 7.6时 , 海金沙醇提物在对藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草杆菌和乙型溶血性链球
菌的最大抑菌圈分别为 9.1、8.2、 9mm和 11.3 mm。海金沙水提物和醇提物对藤黄球菌 、乙型溶血性链球菌 、枯草
芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌的最低抑菌质量分数分别为 25%、12.5 %、 12.5%、25%和 3.12 %、1.56%、6.25%、
3.12%。
关键词　海金沙;提取物;抑菌性能;抑菌圈
中图分类号:S567　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2009)03-0041-04
StudyonBacteriostasisPerformanceoftheExtractsfromthe
LygodiumjaponicuminVitro
OuyangYuzhu, TanSaiyan, QinHaiqiong, TangHongyu
(ColegeofChemistryandChemicalEngineering, JishouUniversity, Jishou416000, China)
Abstract　TheBacteriostasisperformanceoftheLygodiumjaponicumextractstogambogecoccus, subti-
lis, staphylococcusaureusandbetahemolyticstreptococcuswasinvestigatedbyMICandscripmethod.
TheresultsshowedthatLygodiumjaponicumtofourkindsteststrainhasbacteriostasisactivity.Thebac-
teriostasisefectofLygodiumjaponicumalcoholextractsonbetahemolyticstreptococcuswasbestat
37 ℃, maxbacteriostasisringwas8.5 mm.ThebacteriostasisefectofLygodiumjaponicumalcoholex-
tractsongambogecoccus, staphylococcusaureusandsubtiliswasbestat42 ℃, maxbacteriostasisring
was21 mm, 13.2 mmand6.5 mm, respectively.Themaxantibacterialringofalcoholextractstogam-
bogecoccus, staphylococcusaureus, subtilisandbetahemolyticstreptococcusatpHfor7.6 were9.1
mm, 8.2 mm, 9 mmand11.3 mm, respectively.TheMICofLygodiumjaponicumaqueousandtheal-
coholextractstothegambogecoccus, betahemolyticstreptococcus, subtilisandstaphylococcusaureus
were25%, 12.5%, 12.5%, 25% and3.12%, 1.56%, 6.25%, 3.12%, respectively.
Keywords　Lygodiumjaponicum;extracts;bacteriostasisperformance;bacteriostasisring
　　海金沙是蕨类植物海金沙科海金沙属一年生草
质藤本植物 ,主要分布于广东 、浙江 、江苏 、江西 、湖
南 、湖北 、广西 、云南 、四川 、贵州 、陕西等省 ,多生于
山坡 、林边 、灌木丛 、草地中 [ 1] 。海金沙全草或成熟
孢子入药 ,味甘淡 ,性寒 ,具有清热解毒 、利湿利胆 、
调节生物功能 、降低血脂血糖 、抗菌抗炎和抗衰老活
性等功效 ,临床用于治疗尿路感染 、泌尿系统和呼吸
道感染以及流行性腮腺炎等 [ 2-3] 。海金沙富含多
糖 、酚和黄酮类化合物[ 4-5] ,在医药领域有广泛的应
—41—
第 28卷第 3期
2009年 6月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.28 No.3Jun.2009
用 。目前 , 对海金沙的研究大多是化学成分的分
析 [ 6] ,对海金沙提取物的抑菌性能和抗氧化性能的
研究报道很少。本文用水和乙醇为提取介质 ,用超
声辅助提取法从海金沙中提取活性成分 ,研究提取
物对 4种受试菌株的抑菌活性 ,研究结果能为海金
沙的开发利用提供理论依据。
1　实验部分
1.1　实验仪器与材料
1.1.1　实验仪器
FZ102型粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公
司);KQ-250E型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);YXQ-LS-40100SII高压灭菌锅(上海
涵今仪器仪表有限公司);HP400HS全温培养箱(武
汉瑞华仪器设备有限责任公司);pHS-25酸度计
(上海伟业仪器厂)、FD-3型真空冷冻干燥机(上
海精宏实验仪器有限公司)。
1.1.2　实验材料和试剂
海金沙于十月份采于湖南宁远 ,采回的样本经
洗净 、晾干 、切碎 ,于 60 ℃, 0.08 MPa真空干燥后 ,
置于干燥器中备用;乙醇 ,石油醚 ,氯化钠为国产分
析纯试剂;蛋白胨 ,牛肉膏 ,琼脂等为食品用材料。
1.1.3　菌种
藤黄球菌 、枯草芽孢杆菌 、金黄色葡萄球菌 、乙
型溶血性链球菌 4种菌种由吉首大学资环学院微生
物实验室提供。
1.1.4　培养基
培养基按文献[ 7]配制。用 10.0 g蛋白胨 、3.0 g
牛肉膏 、5.0 g氯化钠加 1 000 mL蒸馏水配制营养
肉汤培养基 。用 10.0 g蛋白胨 、3.0 g牛肉膏 、5.0 g
氯化钠 、15.0 g琼脂加 1 000 mL蒸馏水配制营养琼
脂培养基。
1.2　实验方法
1.2.1　海金沙提取物的制备
将 60 ℃真空干燥的海金沙粉碎成粉末 ,称取干
粉 100 g,用 2 ～ 3倍干粉料的石油醚脱色 ,滤渣晾干
后加入 8倍水或乙醇浸泡 ,置于超声波清洗器中超
声提取 ,抽滤 ,滤渣再加 200 mL溶剂重复提取 2次 ,
合并滤液。用旋转蒸发仪浓缩 ,定容到 200 mL容量
瓶中 ,置于冰箱冷藏室中备用。
1.2.2　菌种活化及种子培养
将 4种斜面保存的菌种划线接种至牛肉膏蛋白
胨平板上 , 37 ℃恒温培养 24 h后挑取单菌落接种于
营养肉汤中 ,置 37 ℃恒温培养 16 ～ 18 h后用于抑
菌性能测定。
1.3　海金沙提取物体外抑菌实验
1.3.1　海金沙提取物抑菌圈测定
抑菌圈的大小按文献[ 8]采用纸片法测定 。调
节琼脂培养基的 pH值 ,并将 15 mL琼脂培养基倒
入灭菌平皿内 ,凝结后加 0.2 mL菌液涂布均匀。取
经灭菌的标准滤纸片(直径为 6 mm),蘸取提取物
并贴于平板表面 ,分别培养 24 h后观察并测量抑菌
圈大小。每种提取液对 4种受试菌株分别测定 2
次 ,结果取其平均值。抑菌圈直径大于 8 mm为有
明显抑菌效果 ,小于 6 mm为没有抑菌效果 , 6 ～
8 mm有一定的抑菌作用 。
1.3.2　海金沙提取物最小抑菌浓度的测定
按照文献 [ 9]采用试管 2倍稀释法测定受试菌株
的最小抑菌浓度(MIC)。取无菌试管 13支 ,其中 12
支里分别加 5 mL营养肉汤 ,第 1管加 5 mL定容后
的提取液混匀(浓度为 50%),从第 1管里取 5 mL
混合液加入第 2管中混匀 , 然后再从第 2管中取
5 mL混合液加入第 3管中 ,依次倍比稀释至第 12
管 ,第 13支试管中加无菌水做空白对照试验 ,由此
得到海金沙提取物的质量分数依次为 50%、25%、
12.5%、 6.25%、 3.12%、 1.56%、 0.78%、 0.39%
……、0%。溶液混匀后置于 37 ℃培养箱中培养
24 h,以肉眼观察培养液浑浊度确定细菌生长情况。
2　结果与讨论
2.1　环境因素对海金沙提取物抑菌性能的影响
2.1.1　提取介质对海金沙提取物的抑菌活性影响
在海金沙的提取过程中 ,不同溶剂萃取海金沙
的活性成分不同 ,提取物的抑菌活性也将不同。本
实验采用乙醇和水两种溶剂作介质提取海金沙的活
性成分 ,室温下将两种提取物做抑菌实验 ,考查 2种
提取物对 4种受试菌株的抑菌活性 ,结果如表 1所
示。
—42—
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 28卷
表 1　不同提取介质的海金沙提取物的抑菌活性
提取物
受试菌株
藤黄球菌 金黄色葡萄球菌
枯草芽
孢杆菌
乙型溶血
性链球菌 空白
水提取物 + - - + -
乙醇提取物 + + + + -
　注:“ +”表示有抑菌活性 , “ -”表示没有抑菌活性
实验结果表明:室温下 2种提取物对 4种受试
菌株表现出不同的抑菌活性 ,其中水提取物对金黄
色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌没有抑菌活性 ,醇提取
物对 4种菌株都表现出良好的抑菌活性。
2.1.2　温度对海金沙提取物抑菌性能的影响
将琼脂培养基的 pH值调节到 7.2,按照 1.3.1
节方法将提取物贴于平板表面 ,分别在 25、30、37、
42℃培养箱里培养 24 h后观察并测量抑菌圈大小 ,
结果如表 2 ～ 3所示。
表 2　不同温度下海金沙水提取物对受试菌株的
抑菌圈大小 mm
受试菌株 温度 /℃
25 30 37 42 空白(25-42)
藤黄球菌 7 7.3 7.8 16 6
金黄色葡萄球菌 6 6 6.1 8.8 6
枯草芽孢杆菌 6 6.1 6.1 6.2 6
乙型溶血性链球菌 7 7 7 7 6
表 3　不同温度下海金沙乙醇提取物对受试菌株的
抑菌圈大小 mm
受试菌株 温度 /℃
25 30 37 42 空白(25-42)
藤黄球菌 7 7.6 8.8 21 6
金黄色葡萄球菌 8 8.6 9 13.2 6
枯草芽孢杆菌 6.5 6.5 6.5 6.8 6
乙型溶血性链球菌 8.3 8.2 8.5 6.6 6
　　表 2 ～ 3结果表明 ,海金沙水提取物对金黄色葡
萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性不大 ,对藤黄球
菌和乙型溶血性链球菌的抑菌活性较大。从温度实
验结果分析 , 42 ℃时对 4种菌株的抑菌效果最好 ,
对藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌和乙型
溶血性链球菌的最大抑菌圈分别为 16 mm、
8.8 mm、6.2 mm和 7 mm。海金沙乙醇提取物在 25
～ 42 ℃对 4种受试菌株都有良好的抑制作用 。
42 ℃温度时 ,醇提物对藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌
和枯草杆菌的抑菌效果最好 , 最大抑菌圈分别为
21 mm、13.2 mm和 6.8 mm,在 37℃温度时 ,醇提物
对乙型溶血性链球菌的抑菌效果最好 ,最大抑菌圈
为 8.5 mm。
2.1.3　pH对海金沙提取物抑菌性能的影响
微生物对 pH值非常敏感 ,不同 pH值环境下表
现出不同的抑菌活性 。按 1.3.1节方法做抑菌实
验 ,蘸取提取药液贴于平板表面 ,于 37 ℃培养箱培
养 24 h后观察并测量抑菌圈大小 ,结果如表 4 ～ 5
所示 。
表 4　不同 pH值时海金沙水提取物对受试菌株的
抑菌圈大小 mm
受试菌株 pH
6 6.5 7.2 7.6 8 空白(6-8)
藤黄球菌 6.2 7 7.3 6 6 6
金黄色葡萄球菌 6 6.1 6.2 6.2 6.1 6
枯草芽孢杆菌 6 6.4 7.6 6 6 6
乙型溶血性链球菌 6 7.5 7.6 8.3 6 6
表 5　不同 pH值时海金沙醇提取物对受试菌株
的抑菌圈大小 mm
受试菌株 pH
6 6.5 7.2 7.6 8 空白(6-8)
藤黄球菌 6 8 8.1 9.1 9 6
金黄色葡萄球菌 6 6.7 8.5 8.2 8 6
枯草芽孢杆菌 6.6 7 7.6 9 6.6 6
乙型溶血性链球菌 7 8 9.3 11.3 9.4 6
　　实验结果表明:在不同 pH值条件下 , 2种提取
物对 4种菌株都有抑菌作用 。水提物对藤黄球菌 、
金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性以 pH
值 7.2最好 ,抑菌圈分别为 7.3、6.2、7.6 mm;对乙
型溶血性链球菌的抑菌活性则以 pH值 7.6最好 ,
最大抑菌圈为 8.3 mm。
而海金沙的乙醇提取物表现出的抑菌活性更
强 ,在 pH值为 6 ～ 8范围内对 4种受试菌种都有较
强的抑菌作用 ,其中以 pH值为 7.6时为最好。对
藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草杆菌和乙型溶血性
链球菌 4种菌株的抑菌圈分别为 9.1、8.2、9 mm和
11.3 mm。
2.1.4　海金沙提取物的最低抑菌浓度实验
按 1.3.2节方法测定两种海金沙提取物的最低
抑菌浓度 ,混合液于 37 ℃培养箱培养 24 h,以肉眼
—43—
第 3期　　　　　　　　　　　　　　欧阳玉祝 , 等:海金沙提取物体外抑菌性能研究 　　　　　　　　　　　　　　
观察培养液浑浊度确定细菌生长情况 ,结果如表 6
～ 7所示(注:表中 “ -”号表示没有菌株生长 , “ +”
号表示有少量菌株生长 , “ ++”号表示有大量菌株
生长 , “ +++”号表示有很多菌株生长)。
表 6　海金沙水提取物的最低抑菌质量分数
受试菌株 海金沙水提取物质量分数 /%
50 25 12.5 6.25 3.12
藤黄球菌 + ++ ++ +++
乙型溶血性链球菌 + ++ ++
枯草芽孢杆菌 + ++ +++
金黄色葡萄球菌 + ++ ++ ++
表 7　海金沙醇提取物的最低抑菌质量分数
供试菌株 海金沙醇提取物质量分数 /%
12.5 6.25 3.12 1.56 0.78 0.39
藤黄球菌 + ++ +++ +++
乙型溶血性链球菌 + ++ +++
枯草芽孢杆菌 + ++ +++ +++ +++
金黄色葡萄球菌 + ++ +++ +++
　　表 6 ～ 7结果表明:海金沙水提物和醇提物对 4
种菌株都有较好的抑菌作用。其中水提物对藤黄球
菌 、乙型溶血性性链球菌 、枯草芽孢杆菌 、金黄色葡
萄球菌的最低抑菌质量分数为 25%、 12.5%、
12.5%和 25%;醇提物对的最低抑菌质量分数分别
为 3.12%、1.56%、6.25%和 3.12%,醇提取物最低
浓度比海金沙水提取物最低浓度要低得多 ,说明海
金沙醇提取物比海金沙水提取物抑菌效果好。
3　结　论
海金沙提取物对藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌 、枯
草芽孢杆菌 、乙型溶血链球菌都有较好的抑制作用 ,
醇提物比水提物的抑菌效果更佳 。海金沙醇提取物
在 pH值为 7.6时抑菌效果最好 ,对藤黄球菌 、金黄
色葡萄球菌 、枯草杆菌和乙型溶血性链球菌 4种菌
株的抑菌圈分别为 9.1、8.2、9 mm和 11.3 mm。温
度为 42℃时 ,醇提物对藤黄球菌 、金黄色葡萄球菌
和枯草杆菌的抑菌效果最好 , 最大抑菌圈分别为
21 mm、13.2 mm和 6.8 mm,温度为 37℃时 ,对乙型
溶血性链球菌的抑菌效果最好 , 最大抑菌圈为
8.5 mm。最低抑菌质量分数实验表明:醇提取物和
水提物对藤黄球菌 、乙型溶血性性链球菌 、枯草芽孢
杆菌 、金黄色葡萄球菌的 MIC是分别为 3.12%和
25%, 1.56%和 12.5%, 6.25%和 12.50%、3.12%
和 25%。
参考文献:
[ 1] 　张雷红 ,殷志琦 ,叶文才 ,等.海金沙草化学成分的研究 [ J] .中
国中药杂志 , 2005, 30(19):1522 -1524.
[ 2] 　江苏医学院.中药大词典 [ M].上海:上海科学出版社 , 1986:
1259.
[ 3] 　苏育才.海金沙多糖的分离纯化及抗菌活性 [ J] .福建师范大
学学报:自然科学版 , 2005, 21(4):76 -79.
[ 4] 　余希成 ,卢　俊.超临界 CO2萃取海金沙中黄酮的研究 [ J].食
品研究与开发 , 2007, 28(12):33-35.
[ 5] 　蔡建秀 ,吴文珊 ,吴凌云 ,等.22种药用蕨类植物的总黄酮含量
研究 [ J] .福建师范大学学报:自然科学版 , 2000, 16(4):63-
66.
[ 6] 　张雷红 ,殷志琦 ,范春林 ,等.海金沙地上部分化学成分 [ J] .中
国天然药物 , 2006, 4(2):154-155.
[ 7] 　陈　奇.中药药理实验方法 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1994:8-10.
[ 8] 　庄惠如 ,卢海声 ,朱锦懋 ,等.药用蕨类水提液和醇提液平板抑
菌试验初报 [ J].福建师范大学学报 , 2000, 16(3):83-86.
[ 9] 　马绪荣 ,苏德摸.药品微生物学检验手册 [ M].北京:科学出版
社 , 2002:211.
—44—
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 28卷