全 文 ：藏荆芥不同溶剂提取物清除ＤＰＰＨ活性的研究
刘征堂，黄　山，胡丹丹，王聚乐
摘要：目的　通过ＤＰＰＨ自由基清除实验研究藏荆芥提取物的体外抗氧化活性。方法　将藏荆芥提取物依次用石油醚、二氯
甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇进行萃取，各组分都配制成适当稀释倍数的溶液，采用ＤＰＰＨ法测定各组分的抗氧化活性，并计算各
组分的ＩＣ５０。结果　藏荆芥二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、正丁醇、石油醚提取部分都具有明显清除ＤＰＰＨ自由基的作用。结论　藏
荆芥提取物对ＤＰＰＨ自由基的清除率与样品浓度存在较明显的量效关系，藏荆芥具有较强的抗氧化能力。
关键词：藏荆芥；提取物；ＤＰＰＨ
　　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－１３４９．２０１４．０８．０４７　文章编号：１６７２－１３４９（２０１４）０８－０９９３－０２
　　藏荆芥（Ｎｅｐｅｔａ　ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ　Ｃ．Ｙ．Ｗｕ）又名萨都那保（藏
语），为唇形科荆芥属植物，味苦，性凉，具有开窍醒神的作用，主
治神昏痉厥、中风、癫痫、脑出血、疮伤及疼痛等症。藏荆芥主要
分布于西藏中部和南部地区，在藏药中以全草入药［１］。作为藏
医常用药之一，藏荆芥在临床上有着良好的疗效，而且，课题组
前期研究结果显示，藏荆芥挥发油有明显的抗炎、镇痛作用［２］。
但是，目前对该药的抗氧化活性研究较少，这也妨碍对该药的进
一步开发，限制了其应用。本研究通过ＤＰＰＨ 法［３－５］抗氧化活
性体外评价体系测定藏荆芥不同溶剂提取物的抗氧化活性，为
该药的充分利用及合理开发提供了依据。
１　仪器与试药
电子天平（梅特勒－托利公司，ＡＬ２０４）；紫外－可见分光光度
计（北京普析通用仪器有限责任公司，Ｔ６系列）；旋转蒸发器（上
海亚荣生化仪器厂，ＲＥ－５２ＣＳ）；数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪
器厂，ＨＨ－Ｓ４）。藏荆芥（Ｎｅｐｅｔａ　ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ　Ｃ．Ｙ．Ｗｕ），由西藏
弘祥医药科技开发有效公司提供，经成都中医药大学生药学教
研室龙飞副教授鉴定符合药用。ＤＰＰＨ（１，１－二苯基－２－三硝基
苯肼，Ｓｉｇｍａ－Ｆｌｕｋａ公司产品）；维生素Ｃ（Ｖｃ，上海源叶生物技
术有限公司）；芦丁（上海江莱生物科技有限公司）；乙醇、二氯甲
烷、石油醚、醋酸乙酯、正丁醇等均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　原料的预处理及藏荆芥提取物的提取分离　将藏荆芥１
ｋｇ粉碎，过８０目筛，采用７０％乙醇浸泡提取３次，每次７ｄ，合
并３次提取液，浓缩、制备成浸膏。将浸膏用热水分散后，依次
用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇分别萃取制备不同
极性提取浸膏。
２．２　ＤＰＰＨ法测定藏荆芥不同极性提取物的抗氧化活性
２．２．１　样品及Ｖｃ、芦丁溶液的配制　准确称取干燥至恒重的
藏荆芥提取物石油醚部分、二氯甲烷部分、乙酸乙酯部分、正丁
醇部分、乙醇部分浸膏１００ｍｇ，加入适量９５％乙醇超声溶解，溶
液转移至１００ｍＬ容量瓶中，加入９５％乙醇定容。精密量取上
述溶液，稀释为浓度为０．５ｇ／Ｌ，０．４ｇ／Ｌ，０．３ｇ／Ｌ，０．２ｇ／Ｌ，０．１
ｇ／Ｌ，０．０９ｇ／Ｌ，０．０８ｇ／Ｌ，０．０７ｇ／Ｌ，０．０６ｇ／Ｌ，０．０５ｇ／Ｌ的溶
液。以Ｖｃ和芦丁作为阳性对照。按公式计算自由基清除率：
自由基清除率（％）＝
（Ａｓ－Ａ）
Ａ０ ×１００％
Ａｓ：加入待测溶液后的吸光度；Ａ：待测溶液的本底吸收
Ａ０：空白对照液的吸光度。
２．２．２　ＤＰＰＨ标准曲线的绘制　准确称取 ＤＰＰＨ 试剂２５．０
ｍｇ，用９５％乙醇溶解，并定量转入１００ｍＬ的容量瓶中，用９５％
乙醇定容，摇匀，得质量浓度为０．２５ｇ／Ｌ的储备液，置于冰箱中
冷藏备用。分别取０ｍＬ，２ｍＬ，４ｍＬ，８ｍＬ，１２ｍＬ，１６ｍＬ，２０
ｍＬ　ＤＰＰＨ储备液，用乙醇定容至１００ｍＬ，最终质量浓度分别
为０μｇ／ｍＬ，５μｇ／ｍＬ，１　０μｇ／ｍＬ，２　０μｇ／ｍＬ，３　０μｇ／ｍＬ，４　０
μｇ／ｍＬ，５０μｇ／ｍＬ。测定上述标准溶液在５１７ｎｍ波长处的吸
光度，制作标准曲线（见图１）。Ｙ＝０．０１５２Ｘ－０．００２７，Ｒ２＝
０．９９９　８。
图１　ＤＰＰＨ标准曲线
２．２．３　清除ＤＰＰＨ能力的测定　向２．５ｍＬ　Ｖｃ、芦丁和不同组
配制好的样品溶液中加入２．５ｍＬ　ＤＰＰＨ（５０ｍｇ／Ｌ），在室温下
放入暗室反应３０ｍｉｎ，用紫外－可见分光光度计测得其在５１７
ｎｍ的吸光度 Ａｓ；向不同溶剂提取物配制好的溶液中各加入
９５％乙醇溶液２．５ｍＬ混合均匀，测得其在波长５１７ｎｍ处吸光
度Ａ，以２．５ｍＬ　９５％乙醇溶液和２．５ｍＬ　ＤＰＰＨ作参比溶液，
测得其在波长５１７ｎｍ处空白溶液的吸光度Ａ０，以９５％乙醇溶
液校零，以Ｖｃ和芦丁作为阳性对照按公式计算自由基清除率，
其清除率结果详见图２。
图２　藏荆芥不同极性溶剂提取部分ＤＰＰＨ自由基清除率图
２．２．４　清除５０％自由基时样品浓度（ＩＣ５０）的计算　根据
ＤＰＰＨ法清除率与藏荆芥不同溶剂提物各组分添加量，制作二
者的关系曲线，通过线性回归分析可以得到回归方程，而根据回
归方程式可以计算出清除率为５０％时各组分的添加量即ＩＣ５０
值。通过图１和图２，选择石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇
·３９９·中西医结合心脑血管病杂志２０１４年８月第１２卷第８期
部分、乙醇部分、二氯甲烷部分及 Ｖｃ、芦丁做线性回归方程，并
计算其ＩＣ５０值，详见表１。
表１　藏荆芥不同极性溶剂提取部分ＩＣ５０值
不同溶剂提取部分及对照 ＩＣ５０（ｇ／Ｌ）
二氯甲烷 ０．０２４　４
乙酸乙酯 ０．０５９　１
乙醇 ０．０７６　０
正丁醇 ０．１０９　８
石油醚 ０．１１３　２
对照Ｖｃ　 ０．００６　５
对照芦丁 ０．００８　７
３　讨　论
由图１、图２可以看出，不同极性溶剂抗氧化活性强弱为石
油醚＜正丁醇＜乙醇＜乙酸乙酯＜二氯甲烷，即在相同质量浓
度下，二氯甲烷的清除活性最强，正丁醇、乙酸乙酯和乙醇次之，
石油醚最弱，针对不同极性溶剂的提取物，藏荆芥抗氧化作用随
着浓度的增加逐渐增强；当二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、正丁醇、
石油醚部分浓度达到０．３ｇ／Ｌ时，抗氧化作用也均大于６０％，
且清除作用接近甚至高于其阳性对照芦丁、Ｖｃ的作用。由表１
和图２发现，藏荆芥抗氧化作用部分主要集中于二氯甲烷、乙酸
乙酯、正丁醇、乙醇提取部分，其二氯甲烷的ＩＣ５０值最高。其中
用ＤＰＰＨ法测得的ＩＣ５０分别是二氯甲烷０．０２４　４ｇ／Ｌ，乙酸乙
酯０．０５９　１ｇ／Ｌ，乙醇０．０７６　０ｇ／Ｌ，正丁醇０．１０９　８ｇ／Ｌ，石油醚
０．１１３　２ｇ／Ｌ。
ＤＰＰＨ自由基清除法广泛用于评价天然产物的抗氧化能
力。此法是根据ＤＰＰＨ自由基有单电子，在５１７ｎｍ处有一强
吸收，其醇溶液呈紫色的特性，当有自由基清除剂存在时，由于
与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的
电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分
析。若加入受试物有一定的自由基清除能力，则能将其清除，其
清除率的高低与受试物具有的降低羟自由基、烷自由基或过氧
化自由基的强度和能力有关［６］。该方法灵敏、简便、实用且重复
性好，一般常用于天然有机化合物和植物提取物的抗氧化活性
观察。
本实验采用ＤＰＰＨ法对藏荆芥的不同极性溶剂提取组分
体外抗氧化活性进行了较为全面的研究，ＤＰＰＨ法是一种快速、
简便、灵敏、直接、可行的方法，从实验结果可以看出，各组分均
有不同程度的清除作用，且二氯甲烷的清除能力比较强，在浓度
达到０．３ｇ／Ｌ时，其还原能力几乎接近于Ｖｃ且抗氧化作用也均
大于６０％。本实验对藏荆芥的各组分抗氧化作用进行了定量
研究，确定了各组分清除５０％自由基时的样品浓度，发现二氯
甲烷提取部分ＩＣ５０为０．０２４　４ｇ／Ｌ，说明其提取部分具有较高
的抗氧化活性，可以考虑用二氯甲烷进行进一步的分离纯化，从
中筛选出具有自由基清除活性的单体化合物，对今后心脑血管
病的防治有重要价值，这使得藏荆芥更具有研究价值与开发
前景。
参考文献：
［１］　西藏自治区藏医院药物研究所．中华本草·藏药卷［Ｍ］．上海：上
海科学技术出版社，２００２：３５９－３６０．
［２］　黄山，江春艳，龙飞．藏荆芥挥发油抗炎与镇痛作用研究［Ｊ］．医药
导报，２０１１，３０（１０）：１２６２－１２６５．
［３］　Ｋｒｉｅｎｇｓａｋ　Ｔ，Ｕｎａｒｏｊ　Ｂ，Ｃｒｏｓｂｙ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＡＢＴＳ，ＤＰＰＨ，
ＦＲＡＰ，ａｎｄ　ＯＲＡＣ　ａｓｓａｙｓ　ｆｏｒ　ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｒｏｍ
ｇｕａｖａ　ｆｒｕｉｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｃｏｍｐｏｓ　Ａｎａｌ，２００６，１９：６６９．
［４］　Ａｒｄｅｓｔａｎｉ　Ａ，Ｙａｚｄａｎｐａｒａｓｔ　Ｒ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎ－
ｇｉｎｇ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　Ａｃｈｉｌｅａ　ｓａｎｔｏｌｉｎａ　ｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２００７，
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［５］　董秀英，吕青涛，张国英，等．ＤＰＰＨ法测定九州虫草不同极性部位
抗氧化活性［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１１，１７（１０）：７０．
［６］　钟媛，李江川，刘玉梅，等．全叶青兰提取物抗氧化活性的研究［Ｊ］．
中国食物与营养，２０１１，１７（５）：４４－４５．
作者简介：刘征堂，副主任医师，博士，现工作于中国中医科学院西苑医
院（邮编：１０００９１）；黄山、胡丹丹，工作于青岛科技大学化工学院；王聚乐
（通讯作者），工作于西藏大学医学院（邮编：８５００００）。
（收稿日期：２０１４－０２－１６）
（本文编辑 郭怀印）
应激性高血糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响
白　莉，贾永平，忽海洋
摘要：目的　观察应激性高血糖（ＳＨＧ）对大鼠心肌缺血／再灌注损伤（ＭＩＲＩ）时缺血期和再灌注期的不同影响，分析不同时期的
ＳＨＧ与心肌损伤之间的关系。方法　成年ＳＤ 大鼠５０只随机分为５组：假手术组（ＳＨＡＭ）、高糖组（ＨＧ）、生理盐水对照组
（ＣＯＮ）、缺血期高糖组（ＨＧＩ）和再灌注期高糖组（ＨＧＲ），每组各１０只；制备大鼠 ＭＩＲＩ模型（缺血３０ｍｉｎ，再灌注３ｈ），静脉输注高
浓度的葡萄糖液，造成应激性高血糖动物模型；术中监测血糖水平，再灌注结束后检测血清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，伊文斯兰染色
测心肌梗死面积（Ｉｎｆａｒｃｔ　ｓｉｚｅ，ＩＳ），分析不同时期高血糖对心肌损伤的影响。结果　与ＳＨＡＭ 组相比，静脉输注高糖 ＬＤＨ 表达并
未明显改变；与ＣＯＮ组相比，机体发生ＭＩＭＩ时，ＬＤＨ水平升高，ＨＧＩ组ＬＤＨ水平明显升高，ＩＳ显著扩大，差异有统计学意义
（Ｐ＜０．０１）；而 ＨＧＲ组心肌酶谱水平和ＩＳ与ＣＯＮ组比较差异无统计学意义。结论　缺血期应激性高血糖加重大鼠心肌缺血／再
灌注损伤。
关键词：缺血／再灌注；应激性高血糖；心肌损伤
　　中图分类号：Ｒ５４２．２ Ｒ２５６．２　文献标识码：Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－１３４９．２０１４．０８．０４８　文章编号：１６７２－１３４９（２０１４）０８－０９９４－０３
　　无论是否伴有糖尿病（ＤＭ），急性心肌梗死（ＡＭＩ）发病早
期血糖水平升高都很常见。在ＳＴ段抬高 ＡＭＩ（ＳＴＥＭＩ）患者
中，应激性高血糖（ａｃｕｔｅ　ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ，ＳＨＧ）发生率可高达
５０％［１］，而之前诊断为 ＤＭ 的患者仅占２０％～２５％［２］，一项
·４９９· ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＩＮＴＥＧＲＡＴＩＶＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＯＮ　ＣＡＲＤＩＯ－／ＣＥＲＥＢＲＯＶＡＳＣＵＬＡＲ　ＤＩＳＥＡＳＥ　Ａｕｇｕｓｔ　２０１４　Ｖｏｌ．１２　Ｎｏ．８