全 文 ：郭巧会，章四庆，吴 玲，等． 噻苯隆预处理结合低温储藏对杨桐切枝衰老的影响［J］． 江苏农业科学，2013，41(8):252 － 254．
噻苯隆预处理结合低温储藏对杨桐切枝衰老的影响
郭巧会1，章四庆2，吴 玲2，申雪颖2，杨金雨露2，赖齐贤1
(浙江农林大学风景园林与建筑学院，浙江临安 311300)
摘要:为了研究噻苯隆(TDZ)预处理液对低温储藏过程中杨桐切枝品质和生理生化的影响，以杨桐切枝为试材，
采用 TDZ预处理液浸泡杨桐枝条基部 24 h，以湿藏法于 2 ～ 4 ℃环境中低温储藏 37 d。结果表明，TDZ预处理结合低
温储藏能够推迟杨桐叶片的黄化，延缓可溶性蛋白和叶绿素含量的下降，提高 CAT 和 SOD 活性，降低相对电导率、
MDA含量，增加切枝的瓶插寿命。
关键词:杨桐;噻苯隆(TDZ);低温储藏;衰老
中图分类号:S609 + ． 3 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2013)08 － 0252 － 03
收稿日期:2013 － 01 － 31
基金项目:浙江省大学生科技创新基金(编号:100109)。
作者简介:郭巧会(1987—)，女，河南洛阳人，硕士研究生，从事观赏
植物衰老研究。E － mail:guoqiaohui111@ 163． com。
通信作者:赖齐贤，博士，教授。E － mail:laiqixian@ zifc． edu． cn。
杨桐(Cleyera japonica Thunb．)在日本称为“神木”，大量
用于供神祭佛已有 2 000 多年历史［1］，是日本插枝的主要原
料，我国年均出口量约占日本年均总需求量的 65%，产生了
巨大的社会效益和经济效益［2］。日本对杨桐的需求一年四
季不断［3］，为了提供长期的杨桐产品，国内各公司都会预先
数周或 1 个月对产品进行制作和储藏，加上从我国内地到日
本要经历 1 周时间的海运，所以储藏和运输最长需要 40 d，这
段时间的低温环境对杨桐保鲜至关重要。噻苯隆(TDZ)是
Schering公司 1976 年合成的新型植物生长调节剂，化学名为
N －苯基 － N － 1，2，3 －噻二唑 － 5 －脲［4］。TDZ 具有一般细
胞分裂素 1 000 倍以上的活性，通常使用的浓度有高浓度
(100 μmol /L)和低浓度(1 μmol /L)，分别用在脱叶灵或组培
中促进再生［5］。近年来，Ferrante 等发现，TDZ 能延长六出
花、菊花、羽扇豆、郁金香和夹竹桃等鲜切花的寿命，还能延缓
叶片黄化，但其反应机制还未确定［6 － 9］。另外，Ferrante 等对
桉树切枝进行 24 h TDZ脉冲处理的研究表明，它对桉树切枝
的瓶插寿命影响不大，但可以很好地抑制叶绿素降解［10］。本
研究使用 TDZ浸泡杨桐枝条基部 24 h，用湿藏法于 2 ～ 4 ℃
环境中低温储藏 37 d，探讨低温储藏期新型保鲜预处理剂
TDZ对杨桐品质及生理生化特性的影响，以期为杨桐的储藏
运输和 TDZ的应用提供一定的理论基础。
1 材料与方法
1． 1 材料及处理
供试材料取自浙江省临安市高虹镇杨桐林木科技示范基
地。选择发育程度和长短一致、无病虫害的杨桐当年生枝条，
采摘后立即运回实验室，在水中剪去枝条基部，将叶片擦拭干
净。留枝长 30 ～ 40 cm，叶子 10 ～ 20 张，随机分成 2 组，分别
用 100 μmol /L TDZ溶液和清水浸泡切枝基部 24 h，然后用湿
水的脱脂棉包裹枝条底部，并用塑料纸包扎，最后于 4 ℃冰箱
中放置 37 d。
各处理的样品分为品质和生理测定组，品质组每处理 5
枝，每 3 d观察并记录叶片颜色、斑点、萎焉、卷曲状况;生理
组每处理 10 枝，隔 5 d从 1 枝上随机取 1 张叶片进行生理指
标测定，每组均 3 次重复。
1． 2 测定指标及方法
瓶插寿命以瓶插日起至一半以上叶片严重萎焉、卷曲、黄
化而失去观赏价值之日为标志;叶绿素含量测定使用 80%丙
酮乙醇混合液提取法［11］;相对电导率使用 DDS － 11A 型电导
率仪测定［12］。
取 0． 2 g 植物材料，加入少量石英砂于液氮中，研磨为粉
末，然后加入 2% PVP和预冷的 0． 05 mol /L 磷酸缓冲液(pH
值 7． 8)研磨均匀，定容至 4 mL，于 12 000 g(4 ℃)离心
20 min，取上清液备用［13］，用于测定 SOD 活性、POD 活性、
MDA含量和可溶性蛋白含量。SOD 活性用 NBT 比色法测
定［14］;POD活性采用愈创木酚法测定［15］;CAT活性采用可见
光分光光度法［16］;MDA含量用硫代巴比妥酸法［17］测定;可溶
性蛋白含量采用考马斯亮蓝染料结合法［18］测定。
1． 3 数据处理
采用 DPS进行方差分析，使用 Excel 2007 处理数据并制
作图表。
2 结果与分析
2． 1 不同处理对杨桐切枝寿命和叶片状况的影响
由表 1 可知，储藏期 100 μmol /L TDZ 组保鲜效果较理
想，而对照从 20 d起出现黄化、斑点、萎焉的衰老现象，说明
在 37 d的 2 ～ 4 ℃低温储藏中 TDZ预处理能够提升杨桐枝条
的品质;瓶插期间对照在储藏后 3 d失水加速，而 100 μmol /L
TDZ处理在 1 周后才衰老，也能延长枝条的瓶插寿命。
表 1 不同处理对杨桐切枝寿命及叶片状况的影响
处理 储藏期形态变化
瓶插寿命
(d)
100 μmol /L TDZ 叶片翠绿、无黄化现象，始终有光泽 9． 33a
清水(CK) 20 d 后逐渐出现黄化现象，叶片在
22 d 时出现黄褐斑点，30 d时叶片向
外翻卷，轻度萎焉
4． 83b
注:同列数据后不同字母表示在 0． 05 水平差异显著。
—252— 江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 8 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2013.08.135
2． 2 不同处理对杨桐叶片可溶性蛋白的影响
大量研究表明，在器官衰老和细胞死亡过程中，蛋白质含
量明显减少，它是导致衰老和死亡的一个主要原因。整个低
温储藏期间可溶性蛋白含量先增加后降低，在储藏 13 d 时，
可溶性蛋白含量达到最大值，随后逐渐降低。前期可能是由
于叶片自身尚具有较高的蛋白质合成能力，蛋白质不断积累，
因而可溶性蛋白含量上升，后期降低是由于衰老而分解。
100 μmol /L TDZ处理的可溶性蛋白含量持续上升，一直到
25 d 时达到最大值，比对照的高峰推迟了 12 d，且含量始终
高于对照。显著性分析结果表明，储藏 19 d 时，两者差异达
到极显著水平，且后期差异一直极显著。因此，TDZ预处理液
在一定程度上能够缓解可溶性蛋白水平的下降。
2． 3 不同处理对杨桐叶片叶绿素含量的影响
图 2 表明，在储藏的前 13 d，100 μmol /L TDZ 处理和对
照叶片的叶绿素含量均逐渐下降，后期则分别有不同程度的
回升，这种回升可能是由于 TDZ 具有细胞分裂素活性，通过
叶绿素的有关合成酶增加了叶绿素含量。100 μmol /L TDZ
处理在储藏 19 d时达到高峰，且比初始值提高了 10%，而此
时对照则相应降低了 1． 7%，100 μmol /L TDZ 处理在后期能
够维持一个较高的叶绿素水平，表明 TDZ预处理在一定程度
上能够延缓叶绿素的降解。
2． 4 不同处理对杨桐叶片 CAT和 SOD活性的影响
图 3 显示，在整个低温储藏期间，CAT活性从开始骤降后
一直处于较低水平，而 100 μmol /L TDZ 处理 CAT 活性在储
藏的前 7 d与对照组相比变化不大，储藏后 13 d 开始显著高
于 CK，表明 TDZ 预处理能够提高杨桐枝条在低温储藏期的
CAT活性水平。2 组处理的 SOD 活性都是先下降再上升后
又下降，100 μmol /L TDZ处理的 SOD 活性一直高于对照组，
表明低温储藏期 TDZ预处理能够提高杨桐枝条的 SOD活性。
2． 5 不同处理对杨桐叶片 MDA含量的影响
植物器官衰老时或在逆境条件下，往往发生过氧化作用，
MDA是膜脂过氧化的最终产物，因此 MDA 的积累程度可作
为膜和细胞受伤害的重要指标。MDA 含量在储藏期逐渐下
降，可能是由于 2 个处理的叶片细胞内在低温储藏下产生的
自由基受到了有效抑制，但 CK 在前 6 d 有一个积累过程，表
明前期自由基清除的速率高于自由基产生速率;经 TDZ处理
的 MDA含量一直显著低于对照，表明 TDZ 预处理结合低温
储藏的膜脂过氧化程度小于对照，有利于延缓衰老。
2． 6 不同处理对杨桐叶片相对电导率的影响
细胞膜透性是反映细胞受损程度的一个重要指标。膜脂
过氧化作用使膜结构遭到破坏，膜内电解质外渗，电导率即可
与细胞膜透性呈完全正相关关系。试验结果表明，低温储藏
期间，叶片相对电导率均是先下降再上升后下降，且 TDZ 预
处理组与清水对照差异不显著(图 5)，说明在低温储藏初期
细胞内蛋白质等合成能力较高(图 1)，使得相对电导率也增
加;但随着储藏时间的推迟，细胞膜也受到一定的伤害，因而
有所上升，后期又下降可能是由于体内过氧化酶系统能够有
效清除自由基(图 4)，延缓了杨桐叶片细胞膜的损害。
3 结论与讨论
对杨桐切枝衰老过程进行了研究，结果发现，植物在低温
—352—江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 8 期
储藏期间发生了一系列形态、生理等方面的变化。从形态上
看，失水和黄化是叶片衰老失去观赏价值的最初症状，随之表
现为叶片卷曲，而后枯萎死亡。在生理上则表现为叶绿素、蛋
白质含量迅速下降，体内自由基大量积累，相应的抗氧化酶活
性发生变化，同时破坏膜透性，使细胞逐渐死亡。
试验表明，TDZ预处理后低温储藏期间杨桐叶片的叶绿
素含量与清水对照相比在后期保持了较高的水平，能够推迟
叶片的黄化，延长其瓶插保鲜寿命。Ferrante 等曾报道六出
花经 10 μmol /L TDZ脉冲处理 24 h后，延迟离体叶片黄化时
间达到 2 个月［6］。在研究紫罗兰保鲜中发现，TDZ 可以延缓
叶片在整个有光阶段(30 d)中的黄化，虽然对经黑暗储藏的
花朵没有太多的保鲜效果，但也能延缓叶绿素的降解，达 10
～12 d［19］。在桉树瓶插保鲜研究中发现，TDZ 虽然不能延长
保鲜寿命，但是是一种很好的叶绿素降解抑制剂［10］。这可能
是由于 TDZ具有高效的细胞分裂素活性，通过抑制细胞分裂
素氧化酶的活性来催化细胞分裂素 N6 上不饱和侧链裂解而
使其彻底失活［20］，进而增加细胞分裂素的积累，然而也有报
道提出细胞分裂素激活有关叶绿素生物合成酶———NADH还
原酶能够减少叶绿素的损失［11］，有关 TDZ的细胞分裂素活性
机制还须作更深的研究。
植物细胞通过多途径产生·OH、O －·2 、H2O2 等自由基，同
时植物体内存在 SOD、CAT、POD 等多种抗氧化酶，能够很好
地清除这些自由基。植物衰老时，这种平衡被破坏，自由基积
累导致膜脂过氧化，同时产生大量的过氧化物 MDA，这种细
胞内部酶活性与细胞膜透性变化也是细胞应对外界环境而做
出的适应性防御。在本试验的 4 ℃储藏环境下，100 μmol /L
TDZ处理的叶片中 MDA 含量一直减少，说明受到低温胁迫
后枝条细胞在相应的抗氧化酶系统的调节下做出了积极的防
御反应，即 SOD和 CAT 酶活性的增加清除了体内产生的自
由基，能够在 4 ℃中维持较好的细胞膜透性，延缓衰老。
综上所述，TDZ预处理液处理有利于延缓叶片衰老，但长
时间的低温储藏对杨桐切枝保鲜有一定的局限，在较长的低
温储藏期间水分的控制至关重要，TDZ 预处理作为防止冷藏
中叶片黄化是有效的，对长时间储藏运输保鲜也是可行的措
施。在低温储藏期间，各种代谢虽然有所减缓，但切枝仍消耗
自身的养分，所以经低温储藏后再进行瓶插的寿命可能比常
温下直接瓶插的短，这与刁留彦在马蹄莲的预处理液结合低
温储藏研究的结果［21］相同，而经 TDZ预处理后瓶插寿命有所
延长，因此 TDZ预处理液有一定的商业应用价值。
参考文献:
［1］徐昌棠． 杨桐苗的人工繁育［J］． 新农村，2003(5):11 － 12．
［2］吴海峰． 破解杨桐柃木出口难题［J］． 中国花卉园艺，2007(7):
24 － 25．
［3］钱玉红，孙丽华． 浙江杨桐考察［J］． 浙江林业科技，1994，14
(1):42 － 46．
［4］陈肖英，叶庆生，刘 伟． TDZ 研究进展［J］． 亚热带植物科学，
2003，32(3):59 － 63，58．
［5］Grossmann K． Induction of leaf abscission in cotton is a common
effect of urea and adenine － type cytokinins［J］． Plant Physiol，1991
(95):234 － 237．
［6］Ferrante A，Hunter D A，Hackett W P，et al． Thidiazuron—a potent
inhibitor of leaf senescence in Alstroemeria［J］． Postharvest Biol
Technol，2002，25:333 － 338．
［7］Ferrante A，Tognoni F，Memsuali － Sodi A，et al． Treatment with
thidiazuron for preventing leaf yellowing in cut tulips and chrysanthe-
mum［J］． Acta Hort，2003(624):357 － 363．
［8］Sankhla N，Mackay W A，Davis T D，et al． Ｒeduction of flower ab-
scission and leaf senescence in cut phlox inflorescence by thidiazuron
［J］． Acta Hort，2003，628(2):837 － 841．
［9］Sankhla N，Mackay W A，Davis T D，et al． Effect of thidiazuron on
senescence of flowers in cut inflorescences of Lupinus densiflorus
Benth［J］． Acta Hort，2005(669):239 － 243．
［10］Ferrante A，Mensuali － Sodi M，Serra G，et al． Effects of ethylene
and cytokinins on vase life of cut Eucalyptus parvifolia Cambage
branches［J］． Plant Growth Ｒegulation，2002，38(2):119 － 125．
［11］张宪政． 植物叶绿素含量测定———丙酮乙醇混合液法［J］． 辽
宁农业科学，1986(3):26 － 28．
［12］Xu Q，Huang B． Growth and physiological reponses of creeping bent-
grass to differential shoot and root temperatures［J］． Crop Science，
2000，40:1363 － 1368．
［13］Zhu Z J，Gerendas J，Bendixen Ｒ，et al． Different tolerance to;light
stress in NO3
－ and NH4
+ grown Phaseolus vulgaris L．［J］． Plant
Biology，2000，2:558 － 570．
［14］Beyer W F Jr，Fridovich I． Assaying for superoxide dismutase activi-
ty:some large consequences of minor changes in conditions［J］．
Analytical Biochemistry，1987，161(2):559 － 566．
［15］华东师范大学生物系植物生理教研组． 植物生理学实验指导
［M］． 北京:高等教育出版社，1980:143 － 147．
［16］Bailly C，Binamar A，Corbineau F． Changes in malondialdehyde con-
tent and in superoxide dismutase，catalase and glutathione reductase
activities in sunflower seeds as related to deterioration during acce-
lerated aging［J］． 1996，97:104 － 110．
［17］赵世杰，许长成，邹 琦，等． 植物组织中丙二醛测定方法的改
进［J］． 植物生理学通讯，1994，30(3):207 － 210．
［18］李如亮． 生物化学实验［M］． 武汉:武汉大学出版社，1998:57 －
58．
［19］Ferrante A，Mensuali － Sodi M，Serra G，et al． Effect of thidiazuron
and gibberellic acid on leaf yellowing of cut stock flowers［J］． Cent
Eur J Biol，2009，4(4):461 － 468．
［20］徐晓峰，黄学林． TDZ:一种有效的植物生长调节剂［J］． 植物学
通报，2003，20(2):227 － 237．
［21］刁留彦． 预处理液及低温储藏保鲜技术对马蹄莲切花保鲜效应
的研究［D］． 雅安:四川农业大学，2007:29．
—452— 江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 8 期