全 文 ：［收稿日期］ 20131024(022)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81241139) ;云南省重点产业创新工程项目(2008IF012)
［第一作者］ 杨盛春，讲师，从事有机合成和光谱分析研究，E-mail:dlyangsc@ sohu． com
［通讯作者］ * 赖泳，教授，硕士生导师，从事中药药理、临床药理，Tel:0872-2257412，Fax:(0872)2257401，E-mail:laiyong8879@ 163. com
微毛诃子对家兔胸主动脉环的作用及其机制
杨盛春，赖泳* ，杜月，李代航，莽朝永
( 大理学院药学与化学学院，云南 大理 671000)
［摘要］ 目的:研究微毛诃子甲醇提取物和乙醇提取物对家兔离体胸主动脉环的作用并探讨其可能的作用机制。方法:
采用累积加药法，观察 0. 01 ～ 0. 08 g·mL －1微毛诃子对家兔离体胸主动脉环血管张力的影响;观察乙酰胆碱、酚妥拉明预处理
对 0. 01 g·mL －1微毛诃子缩血管作用的影响;采用 Ca2 +剥夺和复加法，观察 0. 01 g·mL －1微毛诃子对细胞内钙释放和外钙内流
动脉收缩作用的影响。结果:微毛诃子甲醇提取物浓度依赖性对内皮完整的家兔胸主动脉环收缩幅度低于内皮不完整的收
缩幅度 (P ＜ 0. 05) ，乙醇提取物对内皮完整的家兔胸主动脉环收缩幅度高于内皮不完整的收缩幅度 (P ＜ 0. 05) ，且具有浓度
依赖性;0. 01 g·mL －1的微毛诃子的甲醇提取物或乙醇提取物均可使乙酰胆碱(Ach，1 × 10 －5mol·L －1)、酚妥拉明(10 mg·L －1)
预舒张的血管条收缩;维拉帕米(1 × 10 －7 mol·L －1)预处理可消除 0. 01 g·mL －1微毛诃子甲醇提取物的缩血管作用;在无 Ca2 +
液中，0. 01 g·mL －1的微毛诃子甲醇提取物对去内皮主动脉环的收缩幅度显著低于有 Ca2 +液中的收缩幅度(P ＜ 0. 05)。结论:
微毛诃子甲醇提取物和乙醇提取物对家兔离体胸主动脉均有收缩作用;其缩血管作用可能与 M受体及 α受体有关;微毛诃子
甲醇提取物的收缩作用具有内皮依赖性，可能与其促使血管平滑肌细胞外 Ca2 +内流进入细胞有关。
［关键词］ 微毛诃子醇提取物;缩血管;胸主动脉环;乙酰胆碱;酚妥拉明;维拉帕米
［中图分类号］ Ｒ285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)13-0134-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014130134
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20140513． 1529． 017． html
［网络出版时间］ 2014-05-13 15:29
Effect and Mechanism of Terminalia chebula var． tomentella
on Ｒabbit Thoracic Aorta
YANG Sheng-chun，LAI Yong* ，DU Yue，LI Dai-hang，MANG Chao-yong
(Dali University of Pharmacy and Chemical Institute，Dali 671000，China)
［Abstract］ Objective:To study the effect of methanol extract (ME)and ethanol extract (EE)of
Terminalia chebula var． tomentella on rabbit thoracic aorta and to discuss the preliminary mechanism． Method:The
method of cumulative dosing (concentration of extracts increased from 0. 01 g·mL －1 to 0. 08 g·mL －1，respectively．)
was used to observe the influence on the tension of rabbit thoracic aorta． The effect of extracts of T． chebula var．
tomentella (0. 01 g·mL －1)on vasoconstrictive action after acetylcholine and phentolamine pretreatment，in the
absence of calcium and increasing calcium the effect of extracts T． chebula tomentella (0. 01 g·mL －1)on arterial
systole was observed under the condition of intracellular calcium release and calcium influx． Ｒesult:The influence
of ME on contraction extent of isolating thoracic aorta with endothelium was not obvious compared with the thoracic
aorta without endothelium(P ＜ 0. 05)． The action of EE was more obvious P ＜ 0. 05)and showed concentration
dependent． ME (0. 01 g·mL －1)and EE (0. 01 g·mL －1)all depressed the predilated vascular strips by
acetylcholine-induced (1 × 10 －5 mol·L －1) and phentolamine-induced (10 mg·L －1) ，respectively． The
vasoconstrictor effect of ME (0. 01 g·mL －1)was inhibited by verapamil． In the absence of Ca2 + solution，the
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第 20 卷第 13 期
2014 年 7 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 13
Jul．，2014
contraction amplitude in endothelium-denuded aorta rings treated by ME (0. 01 g·mL －1)was significantly lower
than those of contraction in Ca2 + solution (P ＜ 0. 05)． Conclusion:ME and EE has contraction effect on rabbit
thoracic aorta and the mechanism of vasoconstrictor effect may be in connection with M receptor，α-receptor
and Ca2 + ．
［Key words］ alcohol extraction liquid of Terminalia chebula var． tomentella;contraction;thoracicaorta;
acetylcholine;phentolamine;verapamil
诃子是一种高大乔木类落叶植物，属于使君子
科，主产于马来西亚、印度、缅甸等国，我国云南、西
藏、广东、广西等地均有分布。诃子具有抗菌、强心、
抗氧化、抗肿瘤、抗过敏、抗休克、抗心绞痛等多种药
理作用［1］。在民间用途广泛，但迄今为止对诃子的
药理研究较少，现有文献也过多的局限于诃子原种
的研究，尚未见对其变种药理研究。本实验使用的
是诃子的原变种微毛诃子的甲醇、乙醇提取物，观察
其对家兔离体胸主动脉环的作用，并初步探讨其作
用机制。
1 材料
1. 1 动物 家兔，雄性，体质量 2. 7 ～ 3. 0 kg，由大
理学院实验动物中心提供，合格证号 SCXK(滇)
2010-0003。
1. 2 药品、试剂 微毛诃子于 2013 年 3 月采自云
南临沧市耿马县孟定镇，经大理学院生药教研室张
德全副教授鉴定为诃子的原变种微毛诃子［2］
Terminalia chebula var． tomentella。实验前，将新鲜药
材晒干，粉碎。称取微毛诃子根皮和枝叶的混合物
50 g，分别用甲醇和乙醇回流提取、过滤、浓缩后，得
到 1 g·mL －1的乙醇提取物和 0. 6 g·mL －1的甲醇提
取物，即 1 g浸膏相当于 4 g原药材，冷藏备用。
乙酰胆碱(ACh，Solarbio 公司) ，去甲肾上腺素
(NE，自广州明兴制药厂，批号 840731-1) ，维拉帕米
(verapamil，上海禾丰制药有限公司，批号 120401) ，酚
妥拉明(phentolamine，上海旭东海普药业有限公司，
批号 100403) ，其余试剂为国产市售分析纯。K-H液
(NaCl 6. 9 g，KCl 0. 35 g，KH2PO4 0. 16 g，NaHCO3
2. 1 g，CaCl2 0. 28 g，glucose 2 g，临用前配置)。
1. 3 仪器 BL-420E + 生物机能实验系统、HW-
400E恒温平滑肌槽、张力换能器(成都泰盟电子有
限公司)。
2 方法
2. 1 家兔胸主动脉环的制备与稳定 按文献［3］
方法。健康家兔用 10%水合氯醛 850 mg·kg －1，ip
麻醉后，迅速游离胸主动脉置通以 95% O2 + 5% CO2
混合气体的 4 ℃ K-H 液中，洗净残血，剔除外膜脂
肪及结缔组织，将血管条剪成约 3 ～ 4 mm 宽的血管
环，避免过度牵拉以损伤内皮，可根据实验需要，用
棉签磨擦血管环内表面，以去除内皮细胞。设置
BL-420E +生物机能实验系统各项参数，将处理好的
血管环一端固定在通气钩，另一端连接张力换能器，
放入含 20 mL K-H 液的浴槽内，持续通以 95%O2 +
5%CO2的混合气体，先在 37 ℃ 0. 5 g 张力状态下稳
定 15 min后，将静息张力调至 2. 0 g，稳定90 min，期
间每 20 min换液 1次，记录血管环张力变化。
记录一段正常曲线，用 KCl(60 mmol·L －1)重复
刺激 3 次检验动脉环的收缩性，收缩幅度相差 ＜
10%的可用于实验。用 ACh 检验血管内皮活性:待
动脉环稳定后，换液 1 次，浴槽中加入 10 μmol·L －1
去甲肾上腺素(NE) ，收缩达峰值 15 min 后，加入乙
酰胆碱 ACh(1 × 10 －5 mol·L －1)检验血管内皮完整
程度(预收缩的血管舒张程度 ＞ 90%，可认为内皮
完整，舒张程度 ＜ 10%则认为去除内皮成功)。
2. 2 分组及处理
2. 2. 1 对血管环基础张力的影响 当内皮完整或
去除内皮的血管环在静息状态下稳定后，采用累积
加药方法，每隔 10 min 加入微毛诃子乙醇或甲醇提
取物(预先溶于 K-H液) ，使恒温浴槽内药物质量浓
度分别达 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08 g·mL －1，记录血管
环张力变化。
2. 2. 2 对 ACh(1 × 10 －5mol·L －1)预舒张的内皮完
整血管环张力的影响 当内皮完整的血管环达稳定
状态，用 ACh(1 × 10 －5mol·L －1)预舒张血管达稳定
后，加入微毛诃子甲醇或乙醇提取物使浴槽内药物
质量浓度为 0. 01 g·mL －1，观察其对 ACh(1 × 10 －5
mol·L －1)预舒张内皮完整血管环张力的影响。
2. 2. 3 对酚妥拉明(10 mg·L －1)预舒张的内皮完
整血管环张力的影响 内皮完整的血管达稳定状
态，用酚妥拉明(10 mg·L －1)预舒张血管达稳定后，
加入微毛诃子甲醇或乙醇提取物使浴槽内药物质量
浓度为 0. 01 g·mL －1，观察其对酚妥拉明(10 mg·
L －1)预舒张内皮完整血管环张力的影响。
2. 2. 4 维拉帕米对微毛诃子甲醇、乙醇提取物缩血
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杨盛春，等:微毛诃子对家兔胸主动脉环的作用及其机制
管作用的影响［4］ 去内皮的家兔胸主动脉环用
0. 01 g·mL －1的微毛诃子甲醇提取物或乙醇提取物
作用 15 min 后，加入 1 × 10 －7mol·L －1维拉帕米，观
察血管环张力的变化。
2. 2. 5 无钙 K-H 液对微毛诃子甲醇提取物、乙醇
提取物的作用 去内皮的大鼠主动脉环，分别在正
常 K-H液及无钙 K-H 液中孵育 30 min 后，加入微
毛诃子甲醇提取物或乙醇提取物至药物质量浓度为
0. 01 g·mL －1，观察血管环张力的变化。
2. 3 统计学处理 所有数据均以 珋x ± s 表示，微毛诃
子甲醇提取物或乙醇提取物对内皮完整与去内皮家
兔胸主动脉环张力的作用比较采用两因素方差分析，
其余两组间均数比较采用 t 检验，P ＜ 0. 05 为差异有
显著性。以下收缩率均为血管环加药前后张力之差
与去甲肾上腺素收缩张力的比值，用百分数表示。
3 结果
3. 1 微毛诃子甲醇、乙醇提取物对内皮完整和不完
整主动脉环的收缩作用 在内皮完整及去内皮的主
动脉环，微毛诃子甲、乙醇提取物在 0. 01 ～ 0. 06
g·mL －1均可使主动脉环张力呈浓度依赖性升高，0. 08
g·mL －1主动脉环张力开始下降，与空白对照组相比，
均有显著性差异(P ＜ 0. 05)。最大收缩率达 65%。
微毛诃子甲醇提取物(0. 01 ～0. 08 g·mL －1)对去内皮
的主动脉环的收缩作用大于内皮完整的主动脉环
(P ＜0. 01)。微毛诃子乙醇提取物(0. 01 ～ 0. 08 g·
mL －1)对内皮完整的主动脉环的收缩作用大于去内
皮的主动脉环(P ＜0. 01)。如图 1，2所示。
3. 2 ACh，酚妥拉明预处理对微毛诃子甲醇和乙醇
提取物作用的影响 内皮完整的血管环达稳定状
图 1 微毛诃子甲醇提取液对主动脉环的收缩作用(珋x ± s，n = 10)
图 2 微毛诃子乙醇提取液对主动脉环的收缩作用(珋x ± s，n = 10)
态，分别用 ACh(1 × 10 －5 mol·L －1)、酚妥拉明(10
mg·L －1)预舒张血管达稳定后，加入微毛诃子甲醇
提取物 0. 01 g·mL －1对主动脉环的收缩率分别为
(90. 94 ± 2. 11)%，(85. 7 ± 1. 3)%，显著高于未处
理的血管环的收缩率(24. 6 ± 0. 33)%(P ＜ 0. 01) ;
ACh(1 × 10 －5 mol·L －1)、酚妥拉明(10 mg·L －1)预
处理后加入微毛诃子乙醇提取物至 0. 01 g·mL －1对
主动脉环的收缩率分别为(8. 09 ± 0. 11)%，(12. 6
± 0. 18)%，显著低于未处理的血管环的收缩率
(33. 02 ± 0. 52)%(P ＜ 0. 05) ，如表 1。
表 1 0. 01 g·mL －1微毛诃子醇提取物对 ACh和酚妥拉明预处理内皮完整血管环的作用(珋x ± s，n = 10)
组别 质量浓度 / g·mL －1
收缩率 /%
孵育前 ACh Phe
微毛诃子甲醇提取液 0. 01 24. 6 ± 0. 33 90. 94 ± 2. 112) 12. 6 ± 0. 181)
微毛诃子乙醇提取液 0. 01 33. 02 ± 0. 52 8. 09 ± 0. 111) 85. 7 ± 1. 31)
注:与未加试剂预处理比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01。
3. 3 维拉帕米预处理对微毛诃子甲醇和乙醇提取
物作用的影响 去内皮的家兔胸主动脉环用 0. 01
g·mL －1的微毛诃子甲醇或乙醇提取物作用 15 min
后，加入 1 × 10 －7 mol·L －1维拉帕米，其中甲醇提取
物组主动脉脉环的收缩幅度(67. 8 ± 0. 39)%显著
高于未处理的血管环的收缩幅度(9. 9 ± 0. 22)%
(P ＜ 0. 01) ;乙醇提取物组主动脉环的收缩幅度
(22. 05 ± 0. 29)%，与未处理的血管环的收缩幅度
比较无显著变化(8. 7 ± 0. 12)%，如表 2。
3. 4 无钙 K-H液对微毛诃子甲醇和乙醇提取物作
用的影响 微毛诃子甲醇提取物(0. 01 g·mL －1)在
无 Ca2 +的 K-H 液中引起的血管环收缩率(29. 1 ±
0. 17)% 明显低于在正常 K-H 液中的收缩率
(41. 4 ±0. 11)%(P ＜ 0. 05) ;微毛诃子乙醇提取物
(0. 01 g·mL －1)在无 Ca2 +的 K-H液(含 1 ×10 －4 mol·
L －1 EGTA)中引起的血管环收缩(17. 6 ± 0. 09)%与
正常 K-H液中的收缩幅度(15. 6 ± 0. 1)%无显著差
异，如表 2。
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 13
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表 2 Verapamil和外 Ca2 +内流对 0. 01 g·mL －1微毛诃子缩血管作用的影响(珋x ± s，n = 10)
组别 质量浓度 / g·mL －1
收缩率 /%
孵育前 有钙 无钙 Ver
微毛诃子甲醇提取液 0. 01 9. 9 ± 0. 22 41. 4 ± 0. 11 29. 1 ± 0. 172) 67. 8 ± 0. 391)
微毛诃子乙醇提取液 0. 01 8. 7 ± 0. 12 15. 6 ± 0. 1 17. 6 ± 0. 09 22. 05 ± 0. 29
注:与孵育前(未加试剂预处理)比较1)P ＜ 0. 05;与有 Ca2 +组比较2)P ＜ 0. 05。
4 讨论
本实验通过家兔离体胸主动脉环的张力变化，
观察微毛诃子甲醇或乙醇提取物对血管环张力的影
响，发现对内皮完整和去内皮的家兔胸主动脉环，微
毛诃子甲醇提取物或乙醇提取物都可以引起血管收
缩，而甲醇提取物对血管内皮不完整的收缩作用更
强，乙醇提取物对血管内皮完整的收缩作用更强，由
此表明微毛诃子甲醇或乙醇提取物均有直接作用于
血管平滑肌而导致血管收缩的作用，且微毛诃子乙
醇提取物更大程度上依赖于内皮。乙酰胆碱(ACh)
主要作用于血管平滑肌 M 胆碱受体［5］，其使 M 胆
碱受体激动从而使血管舒张，预先用乙酰胆碱作用
于血管平滑肌使血管舒张后，观察微毛诃子提取物
对血管环张力的影响，发现微毛诃子甲醇或乙醇提
取物对血管的收缩幅度与未加 ACh 前比较均具有
差异性，因此表明微毛诃子甲醇或乙醇提取物的缩
血管机制可能与其抑制血管平滑肌上的 M 胆碱受
体有关。酚妥拉明主要作用于血管平滑肌上的 α
受体［6］，其抑制 α 受体从而使血管舒张，预先用酚
妥拉明处理血管使其舒张后，观察微毛诃子提取物
对血管环张力的影响，发现微毛诃子甲醇或乙醇提
取物对血管的收缩幅度与未加药前比较均具有差异
性，由此表明微毛诃子甲醇或乙醇提取物的缩血管
机制可能与血管平滑肌上的 α 受体有关。已知血
管平滑肌细胞内 Ca2 +增高是引起血管平滑肌收缩
的必要条件。平滑肌收缩所需要的 Ca2 +来源于细
胞外 Ca2 +内流和细胞内 Ca2 +释放，通过电压依赖
性钙通道(voltage-dependent Ca2 + channel，VDC)的
Ca2 +内流是其中的主要途径［7］。在本实验无 Ca2 +
液中，微毛诃子甲醇提取物的作用明显减弱，提示
微毛诃子甲醇提取物收缩血管的作用可能依赖于细
胞外 Ca2 +内流;L型 VDC阻滞剂维拉帕米明显减弱
微毛诃子甲醇提取物作用，进一步表明微毛诃子甲
醇提取物可能通过引起 L 型 VDC 的开放、细胞外
Ca2 +内流而导致血管收缩。在本实验无 Ca2 +液中，
微毛诃子乙醇提取物的收缩作用无明显差异性，提
示微毛诃子乙醇提取物收缩血管的作用可能不依赖
于细胞外 Ca2 +内流;L型 VDC阻滞剂维拉帕米减弱
微毛诃子乙醇提取物作用无明显差异性，进一步表
明微毛诃子乙醇提取物的收缩机制可能与 L 型
VDC的开放、胞外 Ca2 +内流无关。
研究表明，微毛诃子甲醇提取物与微毛诃子乙
醇提取物对血管均具收缩作用，但其收缩机制有所
区别。提取物甲醇的脂溶性大于乙醇，因此其提取
的成分有异［8-9］，由此可以看出微毛微毛诃子中含
有不同成分致使其对主动脉具有收缩作用，可对其
进一步研究。
综上所述，本实验首次发现了微毛诃子甲醇或
乙醇提取物的血管收缩作用，并发现其缩血管机制
可能与其抑制血管平滑肌上的 M受体、兴奋血管平
滑肌上的 α受体有关;微毛诃子甲醇提取物的缩血
管机制还可能与血管平滑肌上的 L 型 VDC 的开放
而导致的细胞外 Ca2 +内流有关。
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［责任编辑 聂淑琴］
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