全 文 ：蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及
内皮型一氧化氮合酶表达的对比研究
陈 融 !，李 莉 !，任冬梅 ，王婧婧 !，邴鲁军 #，李瑞峰 !
$山东大学 !%医学院病理生理学教研室；%药学院天然药物化学教研室； #%医学院组织胚胎学教研室，山东 济南 &’’!） (摘要) 目的：探讨蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素和内皮型一氧化氮合酶表达的影响，并比较 两种制剂的药效差别。方法：提取蚤休总皂甙与半边莲生物碱，观察两种制剂对高脂血症大鼠主动脉内皮 细胞内皮素（*+）合成、血浆 *+浓度和血浆内皮型一氧化氮合酶（,-./0）浓度的影响。结果：高脂喂养大 鼠动脉内皮细胞 *+1!的合成与释放明显增高2而 ,-./0 明显降低；应用蚤休总皂甙 3’ 4 后，动脉内皮细 胞 *+ 的合成与释放显著低于高脂对照组（!5’%’&），但血浆 ,-./0 含量无明显变化；应用半边莲生物碱 3’ 4后，动脉内皮细胞 *+的合成、释放减少（!5’%’&）的同时，血浆 ,-./0含量较高脂对照组显著升高。结 论：蚤休总皂甙与半边莲生物碱均能抑制 *+的合成和释放2半边莲生物碱同时还能够促进 ,-./0合成和 释放2其药效优于蚤休总皂甙。 (关键词) 动脉硬化；蚤休；半边莲属；内皮缩血管肽类；一氧化氮合酶 (中图分类号) 67#!%3 (文献标识码) 8 (基金项目) 山东省中医药局立项课题，博士学科点专项基金（’’#’9’3:）。 (作者简介) 陈融（!73#; ）2女2学士2主要从事动脉粥样硬化发病机制的研究。 (通讯作者) 李瑞峰（!7&&; ），男，教授，主要从事心血管和内分泌病理生理学的研究。 <=>?@ -A?B,@?@ C>=B-A DED=F @=GEB?B =B4 =FH=FE?4 ?B FEI,F?= -A?B,B@?@ FEJ> EB DA, @KBDA,@?@ EL ,B4EDA,F?B =B4 ,B4EDA,F?=F B?D>?- EM?4, @KBDA=@,N = -EBD>=@D @DJ4K OP*. 6EBQ2 RS R?2 6*. TEBQ1U,?2 V8.W X?BQ1Y?BQ2 ZS.W RJ1YJB2 RS 6J?1L,BQ$!%T,G=>DU,BD EL <=DAEGAK@?EFEQK2 0-AEEF EL [,4?-?B,\ %T,G=>DU,BD EL OA,U?@D>K EL .=DJ>=F T>JQ2
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DED=F @=GEB?B =B4 =FH=FE?4 ?B FEI,F?= -A?B,B@?@ FEJ> -=B >,4J-, DA, GF=@U= -EB-,BD>=D?EB EL *+，IJD =F1
山 东 大 学 学 报 （医 学 版）
X/]6.8R /C 0P8.T/.W ].Sa*60S+b（P*8R+P 0OS*.O*0）
第 !卷第 #期
$%%&年 #月 aEF%9# .E%! X=B%’’& 文章编号：!3:!;:&&9$’’&_’!;’’9!;’#
!#$%& %’ #$()#% *+%’)’,%, #$-. *’ #,$ %’*.),) /+) *$’*)’/./%$’ $0 )*1234 5#!#$%& %’ #$()#% *+%6 ’)’,%, #$-. %, 7$.) )00)*/ /+’ 8.’*+ /$/# ,9$’%’4 !#$ %&’()* 5./).%$,*#).$,%,: ;.%, *+%’),) 8.’*+: <$()#%: =’&$/+)#%’,: 1%/.%*6$>%&) ,?’/+,) 动脉内皮细胞的内皮素（)’&$/+)#%’，=@）与内皮
型一氧化氮合酶（)’&$/+)#%# ’%/.%*$>%&) ,?’/+,)，
)*123）表达失衡是动脉粥样硬化（/+).$,*#).$,%,A
53）早期病变动脉内皮损伤的主要因素。=@与蛇
毒有共同的祖基因，同源染色体结构及相似的生
物学效应 BCD，中药半边莲E#$()#% *+%’)’,%, #$-.F和
蚤休E9.%, *+%’)’,%, 8.’*+F的方剂对动脉内皮具
有一定的保护作用 BGD，进一步研究表明，半边莲的
生物碱和蚤休总蚤甙是有效成分，本研究应用蚤
休总皂甙对高脂血症大鼠 =@ 与 )*123 表达的影
响，并与半边莲生物总碱的作用效果进行了比较
研究。
C 材料与方法
C4C 主要试剂 血清总胆固醇（/$/# *+$#),/).$#A @H）及甘油三酯（/.%I#?*).%&),A @J）由北京中山生 物工程高技术公司提供；放免药盒由 KLC 医院科 技开发中心放免所提供；试剂盒由南京建成生物 工程研究所提供；动脉内皮细胞 =@6C 表达试剂购 自武汉博士德生物工程有限公司。 C4G 动物实验 雄性 M%,/. 大鼠 NL 只由山东大 学医学院实验动物中心提供，体重 COLPGLL I，随 机分为 N 组Q 空白对照组 CL 只，喂饲大鼠基础饲 料，任意进食，于第 RL 天处死；高脂对照组 CL 只， 在基础饲料中加入 CLS猪油、GS胆固醇和 L4TS 猪胆盐，任意进食，于第 RL天处死。蚤休组 CL只， 高脂喂养 KL & 左右血脂水平升高，在继续高脂饮 食的同时，每天插管灌胃 TS蚤休总皂甙水溶液 N 7# U !I，持续 OL &，于第 RL 天处死；半边莲生物碱 组 CL 只，高脂喂养 KL & 左右血脂水平升高，在继 续高脂饮食的同时，每天插管灌胃 TS半边莲生物 碱水溶液 N 7# U !I，持续 OL &，于第 RL天处死。 C4K 蚤休总皂甙与半边莲生物碱的提取 蚤休 加 RTS乙醇水浴加热回流 CG + 过滤，滤液于搅拌 状态下加石灰乳过滤，滤液加稀盐酸调 9V 至中 性，减压回收溶剂得流浸膏，加入新制氧化镁，搅 拌均匀，OL W烘干研磨，通过 NL目筛，加入乙醇浸 泡过夜过滤，乙醇溶液减压浓缩得蚤休总蚤甙。取 半边莲粉末置于索式提取器中A加入酒精A在酸性 条件下回流 G +，取酒精滤液，蒸馏去酒精A用乙醚 多次萃取；将乙醚溶液用碳酸钠溶液萃取，盐酸酸 化后浓缩成有机酸。取乙醚多次萃取后的水溶液 调至碱性A在乙醚多次萃取、浓缩、静置、过滤得粗 结晶为半边莲生物总碱。 C4N 测定指标与方法 C4N4C 血脂测定 在高脂喂养前、喂养第 KL 天和 第 RL 天，于禁食 CG + 后断尾取血，酶法测定血清 @H和 @J。 C4N4G 血浆 =@ 及 )*123 活性测定 分别在高脂 喂养前、喂养第 KL 天和第 RL 天，用乙醚麻醉大 鼠，断鼠尾取血。用依地酸和抑肽酶抗凝处理后， KX W水浴静置 CT 7%’，K LLL . U 7%’ 离心 CL 7%’， 分离血浆，6GL W保存待测。 C4N4K 主动脉内皮细胞 =@6C检测 大鼠腹腔注射 C4TS戊巴比妥钠 KT 7I U !I，于左颈总动脉插管，恒 压 CK4K !; 灌注 L4C 7$# U < 磷酸缓冲液配制的 NS
多聚甲醛（9VX4G），持续 CL 7%’，剥离出主动脉置于
上述固定液内 C +。进行动脉内皮铺片BND，免疫组化
法检测动脉内皮细胞 =@6C表达。显微镜下计算内
皮细胞 =@6C阳性细胞率。
C4T 统计学处理 根据每只动物的测量数据计
算每组动物的均数!标准差E!#F，进行两组均数间
的 $检验和多组均数间的方差分析，以 %YL4LT 为 差异有统计学意义。 G 结 果 G4C 血清 @H和 @J含量 高脂喂养 KL &后，大鼠 血清 @H 和 @J 含量明显增高（%YL4LT）；蚤休组和 半边莲组用药 OL & 后，@H 与 @J 值仍比正常对照 组显著增高A 与高脂对照组相比无统计学意义，见 图 C。 G4G 血浆 =@、)*123 活性 高脂喂养 KL & 后，大 鼠血浆 =@ 含量显著增高，血浆 )*123 活性显著 降低（%YL4LT）。蚤休组用药 OL &后，血浆 =@浓度 显著低于高脂对照组（%YL4LT），但血浆 )*123 含 量与高脂对照组比较无统计学意义。半边莲组用 山 东 大 学 学 报 （医 学 版） !卷 #期!$
药 ! # 后，除血浆 $% 浓度显著低于高脂对照组 外，血浆 &’()* 活性也明显高于高脂对照组（!+ ,-），见图 .。 .,/ 动脉内皮细胞$%01阳性率 正常对照组 $%0 1阳性细胞数量较少；高脂对照组$%01阳性细胞
数明显增多；蚤休组和半边莲组 $%01阳性细胞数 均较高脂对照组明显减少（!+,-），见图 /、表 1。 / 讨 论 临床上常用清热解毒类中药半边莲和蚤休治 疗蛇毒咬伤，张继峰报道这两种中药可使大鼠离 体胸主动脉环松弛，可以部分拮抗$%引起的小白
鼠猝死作用，延长存活时间，并显著抑制 $% 引起 的大白鼠血压升高效应2-3。基于上述理论分析和实 验依据，本研究进而发现半边莲生物总碱不通过 降低血脂的作用，而是通过拮抗$%的作用减轻内
皮损伤214.3。蚤休也可用于治疗毒蛇咬伤，是否也有
类似拮抗 $%的作用是值得研究的课题。 567’89:;; 等 2!3首次报道血管内皮细胞能合成 分泌血管内皮细胞舒血管因子（&<#:;8&=>6<0#&0 7>?&# 7&=@A><9 B@’;:74$CD5），()* 以 E0精氨酸和
分子氧为底物， （下转第 FG页）
图 1 各组大鼠血清胆固醇、甘油三酯含量H#$I 5>9,1 *&76J ’:<;&<;K :B ;:;@= ’8:=&K;&7:=@<# ;7>9=L’&7>#& >< &@’8 97:6MH#$I
图 . 各组大鼠血浆 $%与 &’()* 含量H#$I
5>9,. N=@KJ@ ’:<;&<;K :B &<#:;8&=>< @<# &<#:;8&=>@= <>;7>’
:A>#& KL<;8@K& >< &@’8 97:6MH#$I 表 1 内皮细胞铺片观测指标记录 观测指标 内皮细胞数 O高倍视野$%阳性率HPI
正常对照组 FG!QFR .,GRQ,./
高脂对照组 !/GQF.S G,./Q,.RS
蚤休组 -FRQ/RSS F,-TQ,.GSS
半边莲组 -1!QFFSS /,R.Q,1!!
分组
S!+,- ?K 正常对照组U SS!+,- ?K 高脂对照组U
!!+,1 ?K 高脂对照组
陈 融，等 , 蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及内皮型一氧化氮合酶表达的对比研究
图 / 动脉内皮铺片免疫组化染色，胞浆中金黄染色为 $%
阳性信号（VF）
W：正常对照大鼠
X：高脂血症大鼠
Y：蚤休总皂甙组大鼠
C：半边莲生物碱组大鼠
5>9,/“&< B@’&”M7&M@7@;>:’ &<#:;8&=>6J B:7 >J0
J6<:8>K;:’8&J>K;7L K;@><><94 ;8& &<#:;8&=>>;>?& K;@><><9 Z@K =:’@;&# >< ’L;:M=@KJ（VF）
W：(:7J@= 7@;
X：[LM&7=>M>#&J>’ 7@;
Y：[LM&7=>M>#&J>’ 7@; ;7&@;&# \L M@7>K ’8><&K>K
57@<’8 ;:;@= K@M:<><
C：[LM&7=>M>#&J>’ 7@; ;7&@;&# \L @=]@=:># >< =:\&=>@
’8><&K =:67
!
（上接第 !页）催化 #$精氨酸的两个等价胍基氮 之一，经 %电子氧化反应生成 &’和 #$胍氨酸。随
后的研究证明这种 ()*+就是 &’。&’ 除调节血
管平滑肌张力外，还具有抗氧化，抑制白细胞和血
小板粘附与激活、抑制平滑肌细胞增殖与诱导平
滑肌细胞凋亡等多种生理和病理作用 ,-.，因此在
/0形成过程中，可将 &’视为保护因素。
蚤休总皂甙组灌药后，血浆 (1含量与动脉内
皮细胞铺片 (1 阳性率与高脂对照组相比存在显
著性差异，说明它可以显著降低内皮细胞对 (1的
合成与释放。但未见其能显著增加血浆 23&’0活
性，综合考虑这两方面的指标，半边莲生物总碱的
药效要好于蚤休总皂甙。
高脂血症是动脉内皮细胞损伤的主要原因，
许多抗 /0 药物是通过降低血脂而起到其药理作
用的，但在临床上可以见到许多血脂难以降低的
/0患者，所以进一步研究这一类通过拮抗 (1生
物学效应的抗 /0药物更有其重要意义。
,参考文献.
,4. #56756 8， 97:;5< /， =:;;>2?@ A， 2B 5;C (D:$;EBF:6 :G B<2 H5?5G:B:IF6 J 267:B<2;F6 HEK2?G5LF;M :G K?:B2F6H,N.C 1:IF3:6O 4PP4O QPRQ-SQ!!C ,Q. 杜艳芝，阎晓梅，胡维诚，等C 清热解毒液对高脂血症 大鼠内皮素影响的研究 ,N.C 中国病理生理杂志， 4PPP，4%（4Q）：44!S44-C ,. 李瑞峰，温海涛，李莉，等C 半边莲不同组分对动脉内 皮细胞内皮素及内皮源型一氧化氮合酶代谢的影响 ,N.C 中国动脉硬化杂志O QTTQO 4T（4）：US!4C ,!. 李莉O 刘玉梅O 胡维诚O等C V$17* 掺入定量分析在
体动脉内皮细胞损伤的方法学研究,N.C 中国动脉硬
化杂志O 4PPO 4W4XR%4S%!C
,%. 张继峰，田青，汤健，等C从抗蛇毒药探寻内皮素拮抗剂
的初步报告,N.C 南京医学院学报，4PPO 4RQQUC
,Y. +E?3<:BB *+O A5Z57[\F N]C 1<2 :>;F@5B:?M ?:;2 :G 26$7:B<2;F5; 32;;H F6 B<2 ?2;5I5BF:6 :G 5?B2?F5; HL::B< LEH3;2 >M 532BM;3<:;F62 ,N.C &5BE?2O 4PUTO QUUR-S -YC ,-. 田雪梅，刘建康，李进C一氧化氮对血管平滑肌细胞中 93;$Q、95I、^% 和 +5H 蛋白表达的影响 ,N.C 中国动脉
硬化杂志，4PPUO YRUS!4C
,收稿日期 QTT!$T%$4P.
（编辑：张翠英）
物歧化酶研究 ,N.C 内科急危重症杂志，4PP-， （Q）：
%!S%YC
,%. 任泽光，吴建中，尹可C 高血压脑出血后脑血流及自由
基变化规律及其与脑水肿的关系 ,N.C 中华神经外科
杂志，4PP%，44（!）：QTPSQ4QC
,Y. 05B:H 1，1:LL5@25 1，’<6FHL 1C (^* HKF6$B?5KKF6@ HBE7M :G &’ G:?L5BF:6 7E?F6@ >F;5B2?5; 35?:BF7 :33;E$
HF:6 F6 B<2 ?5BH ,N.C 9F:344U4：4P%S4P-C
,-. 杨中良，周君富，黄鉴政C 一氧化氮与脑出血关系的研
究,N.C 脑与神经疾病杂志，QTTT，U（4）：4QS4!C
,U. 罗国连，黎杏群C 脑溢安颗粒对出血性中风大鼠脑损
伤保护作用 ,N.C 湖南医科大学学报，QTTT， Q%（）：
Q!%SQ!-C
,P. 龚义仁，张晨玲C 急性脑出血和脑梗死血清一氧化氮
水平及临床意义,N.C 蛇志，QTT，4%（Q）：%QS%!C
,4T. _:6@ _， V:GG N1， ‘22K *+C /3EB2 F6G;5LL5B:?M
?253BF:6 G:;;:ZF6@ 2IK2?FL26B5; F6B?532?2>?5; <2L:?$?<5@2 F6 ?5B,N.C 9?5F6 *2H，QTTT，U-4（4$Q）：%-SY%C
,44. 李卫，郑飞波，李瑞芳，等C 脑出血急性期血清 a#$Y、 1&+$! 及 &’ 的动态监测及其意义 ,N.C 中风与神经
疾病杂志，4PPP，4Y（）：44YS44UC
,4Q. b5M62 b，&F=，c56 VN，2B 5;C /6BFH26H2 :;F@:72:IM6E$
3;2:BF72 F6FBF:6 :G BEL:? 623?:HFH G53B:?$!2IK?2H$
HF:6 FH 62E?:K?:B23BFD2 5GB2? F6B?532?2>?5; <2L:??<5@2
,N.C 0B?:\2，QTT4，Q（）：Q!TSQ!UC
,4. #FE 1O _;5?\ *‘O b3 ):662;; ^_O 2B 5;C 1EL:? 623?:$HFH G53B:?$! 2IK?2HHF:6 F6 FH3<2LF3 62E?:6H ,N.C
0B?:\2O 4PP!O Q%R 4!U4S4!UYC
,4!. 张敏，张辉C 七叶皂甙钠对脑缺血和再灌注时大鼠脑
组织中 &’ 代谢的影响 ,N.C 青岛大学医学院学报O
QTT，P（）：QP!SQPYC
,收稿日期 QTT!$TY$TP.
（编辑：张翠英）
周庆博，等 C —七叶皂甙钠对大鼠脑出血后血 0’)、&’、1&+$!的影响 !