全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 September，Vol． 26 No． 5
·质量分析研究·
收稿日期：2015- 04- 09
作者简介：冯秀丽，女，硕士研究生，研究方向：中药与天然药物化学成分及质量评价。Email：592677561@qq.com。通信作者：林朝展，博士，
副教授，研究方向：中药药效物质基础及新药研制。Email：linchaozhan@sina.com。
基金项目：基于澳大利亚 TGA标准的南药质量评价体系示范研究（2008A050200005）。
猴耳环为豆科含羞草亚科猴耳环属植物猴耳环
P i t h e c e l l o b i u m c l y p e a r i a（Jack）Benth的干燥幼枝、茎、
叶，性偏寒凉味苦涩，具有清热解毒、凉血消肿、收
敛止泻的功效，是广东地区常用中药；其主要化学成
分有黄酮苷类、酚类、氨基酸、鞣质、糖类等[1]。猴
耳环的单味制剂如猴耳环消炎片及猴耳环消炎颗粒
HPLC法同时测定猴耳环药材中 3种黄酮类成分的含量
冯秀丽，王 欢，祝晨蔯，林朝展（广州中医药大学临床药理研究所，广东 广州 510405）
摘要：目的 建立同时测定猴耳环药材中杨梅苷（1）、5，3’，4’，5’-四羟基黄烷 -7-没食子酸酯（2）、槲皮
苷（3）含量的方法，并对不同批次猴耳环药材中 3种黄酮的含量进行测定。方法 采用 Hypersil BDS C18色谱
柱（150 mm×4.0 mm，5 μm）；流动相：0.2 %磷酸 -乙腈，梯度洗脱；检测波长：320 nm。结果 3种黄酮分
离度良好；各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系（r≥0.9994）；平均加样回收率在
99.91 %~100.98 %之间，RSD为 0.36 %~1.20 %（n=6）；所测 11批猴耳环药材中 3种黄酮（1~3）含量分别在
0.36~2.23 mg·g-1（1），6.46~22.41 mg·g-1（2），1.06~4.59 mg·g-1（3）之间。结论 该方法简单、准确，具有良好
的重复性和稳定性，可作为猴耳环药材的质量控制方法。
关键词：猴耳环；黄酮类；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2015）05-0668-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.05.022
668· ·
Simultaneous Determination of Three Flavonoids in Pithecellobium clypearia by HPLC
FENG Xiuli，WANG Huan，ZHU Chenchen，LIN Chaozhan（Institute of Clinical Pharmacology，Guangzhou
University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405 Guangdong，China）
Abstract： Objective To establish a HPLC method for the simultaneous determination of myricintrin（1），
5，3，4，5-tetrahydroxyflavan-7-gallate（2），and quercitrin（3） in Pithecellobium clypearia by HPLC，and to
determine their contents in different batches of Pithecellobium clypearia．Methods HPLC was performed on
Hypersil BDS C18 colum（150 mm×4.0 mm，5 μm）with a mobile phase of acetonitrile and 0.2 % phosphoric acid
at a flow rate of 1.0 mL·min-1 by gradient elution. The detection wavelength was set at 320 nm．Results The three
kinds of flavonoids were separated well. Good linear relationship showed between the concentrations and the peak
areas of the three flavonoids （1-3） in the range of 0.020-0.600 μg （r=0.9997）， 0.067-1.995 μg（r=0.9994），
0.044-1.266 μg（r= 0.9994），respectively．The recoveries of the three flavonoids were between 99.91 %~100.98 %，
and the relative standard deviations（RSDs）were between 0.36 %-1.20 %．The contents of the three flavonoids in
Pithecellobium clypearia from different batches were between 0.36-2.23 mg·g-1（1），6.46-22.41 mg·g-1（2），and
1.06-4.59 mg·g-1（3）．Conclusion The established method is rapid，accurate with high repeatability，and could be
used for the quality control of Pithecellobium clypearia from different habitats．
Keywords：Pithecellobium Clypearia； Flavonoids；Content determination；HPLC
中药新药与临床药理 2015年 9月第 26卷第 5期
等作为抗炎和治疗呼吸道感染药物已得到广泛的应
用[2- 4]。研究表明[5]，猴耳环粗提物中有较好的体外抗
病毒作用，活性成分为其中的黄酮类和黄烷类化合
物。作者前期对猴耳环药材进行了系统分离，并从中
得到 11个黄酮苷类成分（另文报道），包括杨梅苷
（myricitrin）、槲皮苷（quercitrin）和 5，3’，4’，5’-
四羟基黄烷 - 7- 没食子酸酯（5， 3’， 4’， 5’
- tetrahydroxyflavan- 7- gallate）等；相关研究表明 [5- 6]，
槲皮苷、杨梅苷、5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7-
没食子酸酯都具有很强的 DPPH自由基消除活性，其
中杨梅苷与槲皮苷的氧自由基消除能力强于维生素
C，且各单体化合物对于不同的自由基表现出了不同
的体外抗氧化能力，亦有研究结果 [5]表明杨梅苷和
5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7- 没食子酸酯均具有
一定的抑制 T淋巴细胞增殖的活性与抑制巨噬细胞
一氧化氮（NO）释放的作用。有关猴耳环药材及其制
剂的质量控制和评价[7- 13]多以没食子酸和槲皮苷含量
为指标，为进一步完善和提高猴耳环药材及其制剂的
质量控制标准，本研究以 HPLC法同时测定槲皮苷、
杨梅苷及 5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7- 没食子
酸酯的含量，并测定不同产地的猴耳环药材含量，以
期为猴耳环药材质量控制的再提高提供借鉴依据。
1 材料
1 . 1 药品及试剂 猴耳环药材经广州中医药大学临床
药理研究所祝晨蔯研究员鉴定为豆科猴耳环属植物猴
耳环 P i t h e c e l l o b i u m c l y p e a r i a（Jack）Benth；对照品杨
梅苷（1）、5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7- 没食子
酸酯（2）、槲皮苷（3）均为自制，经光谱学鉴定结构，
采用高效液相色谱检测，峰面积归一化法计算含量，
纯度均大于 98 %；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯
水，其余试剂均为分析纯。
1 . 2 仪器 依利特 EC2000高效液相色谱仪系统，大
连依利特公司；旋转蒸发器 RE- 2000，上海亚荣生
化仪器厂；SHZ- D（Ⅲ） 循环水式真空泵，巩义市予
华仪器有限责任公司；KQ5200超声波清洗机，昆山
市超声仪器有限公司；TB- 25十万分之一电子天平，
丹佛仪器（北京）有限公司。
2 方法与结果
2 . 1 溶剂制备及色谱条件
2 . 1 . 1 对照品溶液制备 分别取干燥至恒质量的对照
品 1~3适量，精密称定，加甲醇充分溶解并定容于
10 mL量瓶中，制得各对照品标准储备液；分别精密
吸取上述对照品标准储备液各 1 mL，转移至 5 mL量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，即得混合对照溶液
[每 1 mL中含对照品分别为 20.0 μ g（1）、66.5 μ g
（2）、42.2 μ g（3）]。
2 . 1 . 2 供试品溶液制备 取猴耳环药材干燥粉末（过 4
号筛）约 0.5 g，精密称定，加 20 mL 80 %甲醇，超
声提取 2次，每次 30 min，提取液过滤，合并 2 次
滤液并蒸干，残渣用甲醇充分溶解并定容于 25 mL，
摇匀，过 0.45 μ m微孔滤膜，即得猴耳环药材供试品
溶液。
2 . 1 . 3 色谱条件 色谱柱：Hypersil BDS C18色谱柱
（150 mm× 4.0 mm，5 μ m）；流动相：乙腈（A）- 0.2 %
磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0 ~ 20 min，21 % ~ 25 %
A；20 ~ 34 min，25 % ~ 40 %A；34 ~ 43 min，40
% ~ 21 %A）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：320
nm；柱温：26 ℃ ；进样量：10 μ L；按上述色谱条
件得到混合对照品溶液、供试品溶液的色谱图，见
图 1。
t /min
1. 杨梅苷；2. 5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7- 没食子酸酯；3. 槲皮苷
图 1 混合对照品（a）、猴耳环药材（b）H P L C 色谱图
Figure 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances（A）and P i t h e c e l l o b i u m c l y p e a r i a（B）
a b
669· ·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 September，Vol． 26 No． 5
2 . 2 方法学考察
2 . 2 . 1 标准曲线制备及线性关系考察 分别精密吸取
混合对照品溶液 1，2，4，8，10，15，20，30 μ L，
注入液相色谱仪，测定峰面积值，以峰面积积分值
（Y）对混合对照品进样量（X）制备标准曲线方程，得
到 3种黄酮标准曲线方程，见表 1。
表 1 3 种黄酮标准曲线及线性范围
Table 1 Standard curve and linear range of three kinds of
f l a v o n o i d s
2 . 2 . 2 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液，
进样 10 μ L，重复测定 6次，记录色谱峰面积，结果
对照品 1、2、3峰面积的 RSD分别为 1.4 %、1.4 %
和 1.3 %，表明仪器的精密度良好。
2 . 2 . 3 供试品溶液稳定性试验 精密吸取同一供试品
溶液，于配制后的 0，3，6，9，12，24，48 h测定，
记录色谱峰面积，结果对照品 1、2、3 峰面积的
RSD分别为 1.4 %、1.2 % 和 1.4 %，表明供试品溶
液在 48 h内均稳定。
2 . 2 . 4 重复性试验 取同一批次猴耳环药材 6份，按
2.1.2项方法制备供试品溶液，测定 3种黄酮峰面积
并计算其含量。结果对照品 1、2、3含量 RSD分别
为 1.7 %、 1.2 %和 2.8 %，表明方法重复性良好。
2 . 2 . 5 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批
次猴耳环药材干燥粉末（4号筛）0.25 g，6份，分别
精密加入各对照品储备液稀释制得的对照品溶液适量
后，按 2.1.2项方法制备供试品溶液，进样测定，计
算其回收率 ，见表 2。
2 . 3 样品含量测定 分别取猴耳环药材干燥粉末（4号
筛）0.5 g，精密称定，按 2.1.2 项方法制备供试品溶
液。分别精密吸取 10 μ L，按 2.1.3项色谱条件进行
测定，并计算 3种黄酮的含量，见表 3。
3 讨论
实验中对提取条件进行了优化，通过正交试验法
考察了甲醇浓度、料液比、提取时间、提取次数，对
猴耳环中 3种黄酮类成分含量的影响，并经验证得到
最优提取条件为 20 mL 80 % 甲醇，超声提取 2次，
每次 30 min。
实验中选用甲醇 - 水、乙腈 - 水、甲醇 - 0.2 %
磷酸水、乙腈 - 0.2 %磷酸水溶剂系统作为猴耳环含
量测定的流动相，结果发现，以甲醇 - 水系统、乙
腈 - 水系统、甲醇 - 0.2 %磷酸水系统作为流动相时，
各峰之间分离效果差，且会出现拖尾及基线不平稳等
现象，而以乙腈 - 0.2 %磷酸水系统作为流动相后，
各色谱峰峰形良好，分离度好，最终选用磷酸
- 0.2 %磷酸水系统作为本实验的流动相条件。还考
察了检测波长对色谱图的影响，分别选用了 4个不同
波长，包括 210 nm、254 nm、280 nm、320 nm，结
果发现，320 nm下，色谱图基线平稳，色谱峰强度
对照品
1
2
3
标准曲线方程
Y =2.8069X +64.119
Y =3.0394X - 179.38
Y =2.7198X +122.11
线性范围 / μ g
0.020~0.600
0.067~1.995
0.044~1.266
r
0.9997
0.9994
0.9994
表 2 加样回收率试验结果（n =6）
Table 2 Results of recovery test
对照品
1
2
3
样品含量 /mg
0.2230
0.2240
0.2330
0.2120
0.2290
0.2240
2.3010
2.1900
2.3600
2.3580
2.3900
2.2960
0.5260
0.5160
0.5410
0.5440
0.5590
0.4800
加入量 /mg
0.2200
0.2200
0.2200
0.2200
0.2200
0.2200
2.3000
2.3000
2.3000
2.3000
2.3000
2.3000
0.5400
0.5400
0.5400
0.5400
0.5400
0.5400
测得量 /mg
0.4410
0.4460
0.4600
0.4340
0.4520
0.4450
4.6090
4.4840
4.6620
4.6590
4.6930
4.5760
1.0680
1.0580
1.0820
1.0860
1.1060
1.0220
回收率 /%
99.09
100.91
103.18
100.91
101.36
100.45
100.35
99.74
100.09
100.04
100.13
99.13
100.37
100.37
100.19
100.37
101.30
100.37
平均回收率 /%
100.98
99.91
100.49
RSD/%
1.20
0.39
0.36
表 3 猴耳环药材中 3 种黄酮类成分含量测定结果
Table 3 Results of content determination of three kinds of
f l a v o n o i d s i n s a m p l e s o f P i t h e c e l l o b i u m c l y p e a r i a
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
产地
广东 从化
广东 从化
广东 从化
广东 湛江
广东 广州
湖南 长沙
湖南 郴州
江西 宜春
江西 赣州
广西 南宁
广西 贵港
平均含量
收集时间
2012.02
2012.10
2013.08
2012.10
2012.11
2012.11
2012.11
2013.08
2013.08
2013.07
2013.07
杨梅苷
/mg·g-1
0.91
1.64
2.23
0.85
1.72
0.96
1.24
1.51
1.33
1.57
0.36
1.30
5，3，4，5- 四羟基黄烷
- 7- 没食子酸酯 /mg·g-1
7.54
22.17
22.41
8.37
8.54
18.62
13.23
18.42
15.96
9.72
6.46
13.77
槲皮苷
/mg·g-1
1.37
1.52
1.83
1.08
1.87
1.62
2.05
3.41
1.63
4.59
1.06
2.00
670· ·
中药新药与临床药理 2015年 9月第 26卷第 5期
较高且其他峰干扰少，故选用 320 nm作为检测波长。
实验结果显示，所测 11批猴耳环药材中杨梅苷、
5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7- 没食子酸酯、槲皮苷
含量分别在 0.36~2.23 mg·g-1（平均含量为 1.30 mg·g-1），
6.46 ~ 22.41 mg·g-1（平均含量为 13.77 mg·g-1），
1.06~4.59 mg·g-1（平均含量为 2.00 mg·g-1）范围内，表
明不同产地猴耳环药材三者含量变化较大。黄酮类成
分为猴耳环属植物的有效成分，而此 3种黄酮在猴耳
环药材中均可察见且含量较高，因此建议将杨梅苷、
5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7- 没食子酸酯含量测
定亦纳入猴耳环药材的质量标准，并以平均含量的
70 %设限，建议猴耳环的质量以杨梅苷计，不得低
于 0.91 mg·g-1；以 5，3’，4’，5’- 四羟基黄烷 - 7-
没食子酸酯计，不得低于 9.64 mg·g-1。本研究建立猴
耳环药材中 3种黄酮类成分的含量测定方法，简便易
行、重现性好，可作为猴耳环药材质量控制方法，并
为合理利用该药用植物资源药材及不同产地猴耳环药
材的质量控制提供参考依据。
参考文献：
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验方剂学杂志，2015，21（3）：63- 66.
（编辑：邓响潮）
收稿日期：2015- 04- 09
作者简介：郑杰，女，硕士研究生，研究方向：天然药物分析。Email：1359526639@qq.com。通信作者：常军民，教授，博士，硕士生导师，研
究方向：天然药物分析。Email：1617265908@qq.com。
基金项目：国家自然基金项目（81460633）；新疆维吾尔自治区科技援疆计划（201491172）。
HPLC/ESI- MS法测定刺糖中低聚果糖的含量
郑 杰，李改茹，程煜凤，常军民（新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011）
摘要：目的 建立高效液相色谱 - 电喷雾离子阱质谱法（HPLC/ESI- MS）测定刺糖中低聚果糖含量的方法。方
法 采用 YMC- Pack NH2分析柱（250× 4.6 mml.D，S- 5 μ m，12 nm）分离；乙腈 - 水 =70∶ 30，流速：1.0 mL·
min-1。离子阱质谱检测器，电喷雾电离，负离子模式。结果 蔗果三糖的MS特征离子为：[M- 161]-（- 单糖基），
[M- 179]-（- 单糖基），[M- 341]-（- 二糖）；蔗果三糖在 0.013105～ 0.20968 mg·mL-1范围线性关系良好，r=0.9992；
低、中、高加标回收率分别为 96.9 %、99.8 %、96.7 %，相对标准差分别为 1.7 %、1.7 %、1.4 %。测定 4批刺
糖中蔗果三糖的含量，含量最高为 13.4 %，含量最低为 7 %。结论 该方法灵敏度高，准确度、精密度良好，
可用于刺糖中蔗果三糖的定性及定量分析。
关键词：刺糖；低聚果糖；高效液相色谱 - 电喷雾离子阱质谱法
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003- 9783（2015）05- 0671- 05
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