全 文 ：的治疗作用增强。提示，GSα-PKA-cAMP 信号通路是抗抑郁治
疗的靶点之一。
本研究结果显示模型组大鼠额叶皮质与海马区 GSα、
PKA、cAMP 表达显著减少，提示抑郁症的发生可能与 GSα-
PKA-CAMP 信号通路的变化有关。紧张、恐惧、抑郁等心理应
激能够导致大鼠神经细胞信号通路失衡并出现抑郁样行为，如
GSα、PKA、cAMP 含量降低等，从而加重神经元损伤。与模型
组相比，药对刺五加-栀子治疗后大鼠额叶皮层与海马区 GSα、
PKA、cAMP 表达显著升高，表明药对刺五加-栀子能明显提高
大鼠额叶皮层与海马区 GSα、PKA、cAMP 的表达。
综上所述，前期研究证实药对刺五加-栀子有明显抗抑郁
治疗作用，其抗抑郁作用机制可能与 GSα-PKA-cAMP 信号通路
上调有关。
4 参考文献
1 Duman ＲS，Kehne JH. Depression〔J〕．CNS Neurol Disord Drag Targets，
2007;6(3):161-2.
2 张明圆 . 抑郁障碍的患病概况〔J〕．中华全科医师杂志，2003;2(3):
133-4.
3 徐向青．刺五加配伍栀子治疗老年抑郁障碍患者的疗效〔J〕．中国老
年学杂志，2012;32(24):5383-4.
4 Garza JC，Guo M，Zhang W，et al. Leptin restores adult hippocampal neu-
rogenesis in a chronic unpredictable stress model of depression and rever-
ses glucocorticoid-induced inhibition of GSK-3β /β-catenin signaling〔J〕．
Mol Psychiatry，2012;17(8):790-808.
5 Hennebelle M，Balasse L，Latour A，et al. Influence of omega-3 fatty acid
status on the way rats adapt to chronic restraint stress〔J〕． PLoS One，
2012;7(7):e42142.
6 Lu XY，Kim CS，Frazer A，et al. Leptin:a potential novel antidepressant
〔J〕．Proc Natl Acad Sci U S A，2006;103(5):1593-8.
7 李金兵，李翼鹏，田俊生，等 . 基于慢性温和不可预知应激模型内源
性代谢物变化探讨抑郁症病理机制〔J〕．中草药，2013;44(1):
108-15.
8 刘纪猛，李恒芬，谢 正 . 抑郁模型大鼠中枢 G 蛋白的研究〔J〕．中
国神经精神疾病杂志，2009;35(2):108-10.
9 俞红五，朱才丰，陈 颖 . 开四关加人中针刺治疗中风后抑郁状态
32例〔J〕．中医药临床杂志，2007;19(3):243-5.
10 符文彬，刘健华，白艳甫，等 . 电针对抑郁症大鼠海马 CＲEB-BDNF
受体后信号转导通路的作用〔J〕．中国老年学杂志，2009;29(23):
3038-42.
11 蒋 丽 . 针刺四关穴治疗肝郁型抑郁症的临床及 cAMP-PKA信号
通路研究〔D〕．广州:广州中医药大学，2012.
〔2016-03-17修回〕
(编辑 袁左鸣)
头花蓼提取物不同给药方式治疗炎症大鼠的效果
曹 芳 段 萍1 王洪平2 张友波2 (黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558000)
〔摘 要〕 目的 探讨灌胃给药及静脉注射头花蓼提取物治疗炎症大鼠的效果。方法 将 180只 SD雄性大鼠随机分为灌胃给药及静脉注射
组，各 90只，两组再各分为模型组、布洛芬组及头花蓼提取物组 3个亚组，各 30 只。模型组灌胃或静脉注射 5%吐温-80 溶液，布洛芬组灌胃或静脉
注射布洛芬配制液 7. 5 mg /kg，头花蓼提取物组灌胃或静脉注射头花蓼提取物 10 mg /kg，连续给药 7 d后，分别采用冰醋酸、二甲苯和醋酸制备炎症模
型，观察不同组大鼠炎症抑制效果。结果 不同的给药方案中，布洛芬组和头花蓼提取物组大鼠的扭体次数、耳廓肿胀度和腹腔毛细管通透性均明
显低于模型组(P＜0. 05);与灌胃给药相比，静脉注射布洛芬组大鼠上述各指标无显著变化(P＞0. 05)，而头花蓼提取物组则显著降低，且低于布洛芬
组(P＜0. 05)。结论 头花蓼提取物具有显著的抗炎、镇痛作用，静脉注射方式效果更显著。
〔关键词〕 头花蓼提取物;炎症
〔中图分类号〕 Ｒ284 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)24-6065-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 24. 008
基金项目:贵州省卫生厅科学技术基金资助(gzwkj2013-1-074)
1 黔南州药品食品检验所
2 北京大学药学院天然药物学系 天然药物及仿生药物国家重点实
验室
第一作者:曹 芳(1971-)，女，副教授，主要从事中草药药效学和药动
学方面的研究。
头花蓼(Polygonum，capitatatum)为蓼科属多年生草本植
物，中药传统理论认为，它具有清热解毒、活血止痛、利尿等功
效，现代药理活性研究发现，它具有抗菌、抗感染、抗氧化等多
种活性〔1〕，主要作用成分包括挥发油、酚酸类、黄酮类、有机酸、
酯、醛、醇类及其他类化合物〔2〕，主要用于泌尿系统感染的治
疗。研究显示头花蓼中成药与抗生素联合治疗尿路感染的总
有效率达 93. 3%〔3，4〕。此外，头花蓼提取物中的黄酮类化合物
还具有抗感染功能〔5，6〕，但目前关于其最佳给药方式仍然存在
巨大分歧。本实验拟观察头花蓼提取物的抗感染、镇痛效果。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 普通级健康 SD 雄性大鼠 180 只，体重 300 ～
400 g，平均体重(350. 26± 5. 31)g，购自兰州大学实验动物中
心，动物许可证号:SCXK(甘)2009-0004，在室温 21℃ ～ 23℃、
湿度 40%～60%、自然光照条件下饲养，自由摄食饮水。
1. 2 药品与仪器 头花蓼药材粉末购自贵州施秉;冰醋酸、二
甲苯(分析纯)、醋酸(分析纯)、三氟乙酸均购自生工生物工程
股份有限公司;布洛芬购自上海永叶生物科技有限公司;伊文
思蓝购自大连美仑生物技术有限公司;打孔器(直径8 mm)购
·5606·曹 芳等 头花蓼提取物不同给药方式治疗炎症大鼠的效果 第 24期
自北京普凯瑞生物科技有限公司;电子天平(AG135型)购自上
海鼎国生物技术有限公司;紫外可见分光光度计购自北京百泰
克生物技术有限公司。
1. 3 头花蓼提取 取头花蓼药材粉末 25. 56 g 过 60 目筛，
70%乙醇浸泡 15 h，索氏提取器中回流提取 1. 5 h，重复 3次，冷
却室温，减压抽滤，最后将过滤液浓缩，得乙醇提取物1. 45 g。
1. 4 实验分组 大鼠禁食 15 h后随机分为灌胃给药及静脉注
射组，各 90只，两组再分为 3个亚组，分别为模型组、布洛芬组
及头花蓼提取物组，各 30 只。模型组灌胃或静脉注射 5%吐
温-80溶液，布洛芬组给予布洛芬配制液(100 mg 布洛芬片+
100 ml 5%羧甲基纤维素钠)灌胃或静脉注射7. 5 mg /kg，头花
蓼提取物组灌胃或静脉注射头花蓼提取物 10 mg /kg，各组给药
均为 1次 /d，连续给药 7 d。给药后将 3亚组分成①～③号实验
组待用，每组 10只大鼠。
1. 5 冰醋酸致大鼠疼痛实验 末次给药 30 min 后，向①号实
验组大鼠腹腔注射 1%冰醋酸溶液 0. 2 ml 致痛，给药剂量为
0. 1 ml /10 g。致痛后 15 min观察大鼠扭体反应，即大鼠腹部内
凹、后肢与躯干伸张，同时臀部高起，记录扭体次数。
1. 6 二甲苯致大鼠耳廓肿胀实验 末次给药 1 h后，分别在②
号实验组大鼠左耳前后两面均匀涂抹二甲苯 0. 1 ml，右耳不
涂，4 h后将大鼠脱颈处死，剪下双耳，用打孔器分别在两耳的
同一部位打下圆耳片，称重，以大鼠左右耳片质量差表示肿
胀度。
1. 7 醋酸致大鼠毛细管通透性增高实验 末次给药后 1 h，分
别向③号实验组大鼠尾静脉注射 0. 5%伊文思蓝生理盐水
0. 1 ml /g，随即腹腔注射 0. 6%醋酸 0. 2 ml /10 g，20 min后将大
鼠脱臼处死，剪开腹腔皮肤，用 2 ml生理盐水洗涤腹腔 3次，吸
取腹腔洗液，3 000 r /min 离心 15 min，取上清液用分光光度计
在620 nm处比色，测定光密度值(OD值)。
1. 8 统计学分析 采用 SPSS10. 0软件，计量资料采用 t检验、
单因素方差分析、χ2 检验。
2 结 果
2. 1 不同给药方式对冰醋酸致痛大鼠的作用 不同的给药方
案中，布洛芬组和头花蓼提取物组的扭体次数均明显少于模型
组〔灌胃给药:(47. 52±6. 86)次;静脉注射(47. 37±7. 01)次，P＜
0. 05〕。灌胃给药方案中，布洛芬组〔(31. 55±3. 25)次〕和头花
蓼提取物组〔(28. 56± 2. 99)次〕的扭体次数比较无差异(P＞
0. 05);静脉注射方案中，头花蓼提取物组的扭体次数
〔(20. 11±2. 13)次〕少于布洛芬组〔(31. 69 ± 3. 19) 次，P ＜
0. 05〕。与灌胃给药相比，静脉给药布洛芬组扭体次数无显著变
化(P＞0. 05)，而头花蓼提取物组扭体次数显著降低(P＜0. 05)。
2. 2 不同给药方式对二甲苯致大鼠耳廓肿胀的作用 灌胃给
药方案中，模型组、布洛芬组、头花蓼提取物组的耳廓肿胀度分
别为 (13. 25 ± 2. 10)mg /g、(7. 61 ± 0. 45)mg /g、(6. 45 ±
1. 21)mg /g，而静脉注射方案中三组的耳廓肿胀度分别为
(13. 72± 1. 56)mg /g、(7. 12 ± 0. 26)mg /g、(4. 37 ± 0. 38)mg /g。
不同的给药方案中，布洛芬组和头花蓼提取物组的大鼠耳廓肿
胀度均明显低于模型组(P＜0. 05)。灌胃给药方案中，布洛芬
组和头花蓼提取物组的耳廓肿胀度无显著差异(P＞0. 05);静
脉注射方案中，头花蓼提取物组的耳廓肿胀度低于布洛芬组
(P＜0. 05)。与灌胃给药相比，静脉注射布洛芬组的耳廓肿胀
度无显著变化(P＞0. 05)，而头花蓼提取物组的耳廓肿胀度则
显著降低(P＜0. 05)。
2. 3 不同给药方式对醋酸致大鼠腹腔毛细管通透性增高的作
用 灌胃给药方案中，模型组、布洛芬组、头花蓼提取物组的
OD值分别为(0. 52±0. 12)、(0. 33±0. 11)、(0. 30±0. 09)，而静
脉注射方案中三组的 OD 值分别为(0. 55 ± 0. 11)、(0. 37 ±
0. 12)、(0. 21±0. 14)。不同的给药方案中，布洛芬组和头花蓼
提取物组的 OD值均明显低于模型组(P＜0. 05)。灌胃给药方
案中，布洛芬组和头花蓼提取物组的 OD 值无显著差异(P＞
0. 05);静脉注射方案中，头花蓼提取物组的OD 值低于布洛芬
组(P＜0. 01)。与灌胃给药相比，静脉给药布洛芬组的 OD值无
显著变化(P＞0. 05)，而头花蓼提取物组的OD 值则显著降低
(P＜0. 05)。
3 讨 论
头花蓼是贵州苗族民间常用药物，其单方制剂也得到了广
泛的临床应用〔7〕。国内外对头花蓼的报道以其化学成分的分
离和临床药理研究居多，而对其具体的抗感染机制及抗感染有
效部位的研究较少。炎症是威胁人类健康的一种常见和多发
的疾病，其病理变化包括变质、渗出和增生〔8〕，主要表现为毛细
血管通透性增加致病变组织肿胀、疼痛。急性炎症通常具有
红、肿、热、痛等变化，同时往往伴有发热、白细胞增多等全身反
应。这些变化的实质是机体免疫系统对外来异物的客观反应。
致炎因子作用于机体后，一方面损害正常组织，使部分组织发
生趋化、变形;另一方面刺激增强机体抗病功能，消灭致炎因
子，修复受损害的组织，从而使机体内、外环境之间达到新的平
衡。化学研究表明，头花蓼所含的主要有效成分是黄酮类和酚
酸类化合物，这两种成分都具有抗菌和抗感染活性〔9，10〕。
布洛芬的解热、镇痛、抗感染作用已被临床研究证实〔11，12〕。
本研究结果表明，布洛芬和头花蓼提取物均有抗感染作用，甚
至在静脉注射给药方案下，其效果优于布洛芬，可能与其减少
炎性组织中前列腺素 E2 的生成、抑制组织炎症中脂质过氧化
产物形成和降低 NO的活力有关，具体抗感染机制有待进一步
研究。比较灌胃给药与静脉注射头花蓼对 3 组不同炎症大鼠
模型的疗效发现，静脉注射给药方案效果更佳，可明显改善炎
症大鼠的组织肿胀、疼痛，抑制毛细血管通透性增加，具有较好
的抗感染作用。头花蓼提取物有效成分在肠道内滞留时间较
长，难以吸收，生物利用度低。而静脉注射起效快，可经血液循
环迅速扩散至全身，将药物达致疗效浓度，并可持续维持疗效
所需的恒定浓度，因此镇痛、抗感染效果显著。
4 参考文献
1 Liao SG，Zhang LJ，Sun F，et al. Antibacterial and anti-inflammatory
effects of extracts and fractions from Polygonum capitatum〔J〕． J Ethno-
pharmacol，2011;134(3):1006-9.
2 潘雯婷，张丽艳，谢 宇，等 . 主成分及聚类分析法对不同产地头花
蓼的综合质量评价〔J〕．中国实验方剂学杂志，2012;18(10):153-7.
·6606· 中国老年学杂志 2016年 12月第 36卷
3 赵旭东，谢红林，高文君，等 . 头孢地尼联合热淋清胶囊治疗泌尿道
感染 100例临床观察〔J〕．浙江中医杂志，2014;49(10):732.
4 李小玲，缪 娟 . 头孢克肟联合热淋清胶囊治疗女性尿路感染疗效
观察〔J〕．临床合理用药杂志，2012;5(16):93-4.
5 Zhang K，Zhang J，Wei S，et al. Development and validation of HPLC
coupled with triple quadrupole MS for the simultaneous determination of
six phenolic acids，six flavonoids，and a lignan in polygonum capitatum
〔J〕．J Sep Sci，2013;36(15):2407-13.
6 刘瑜新，宋晓勇，康文艺，等 . 头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌抗
菌作用研究〔J〕．中成药，2014;36(9):1818-21.
7 He CY，Fu J，Ma JY，et al. Biotransformation and in vitro metabolic pro-
file of bioactive extracts from a traditional miao-nationality herbal medi-
cine，polygonum capitatum〔J〕．Molecules，2014;19(7):10291-308.
8 Meng H，Liu Y，Lai L. Diverse ways of perturbing the human arachidonic
acid metabolic network to control inflammation〔J〕． Acc Chem Ｒes，
2015;48(8):2242-50.
9 唐 丽，刘 跃，黄 勇，等 . 离体外翻肠囊法研究头花蓼提取物中
5个成分的肠吸收特性〔J〕．中国药理学通报，2014;30(7):1031-2.
10 Zhang KX，Wang YS，Jing WG，et al. Improved quality control method
for prescriptions of Polygonum capitatum through simultaneous determi-
nation of nine major constituents by HPLC coupled with triple quadruple
mass spectrometry〔J〕．Molecules，2013;18(10):11824-35.
11 Heinbockel L，Marwitz S，Barcena Varela S，et al. Therapeutical admin-
istration of peptide Pep19-2. 5 and ibuprofen reduces inflammation and
prevents lethal sepsis〔J〕．PLoS One，2015;10(7):e0133291.
12 Mokhtari F，Yazdi K，Mahabadi AM，et al. Effect of premedication with
indomethacin and ibuprofen on postoperative endodontic pain:a clinical
trial〔J〕．Iran Endod J，2016;11(1):57-62.
〔2016-05-11修回〕
(编辑 李相军)
持续被动运动对兔骨关节炎软骨细胞凋亡相关基因 P53、caspase-3、
Bcl-2和 Bax的影响
黄吉利 罗 明1 潘 捷 赵鸿声 (江汉大学附属医院骨科，湖北 武汉 430015)
〔摘 要〕 目的 观察持续被动运动(CPM)对兔骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡及凋亡相关基因P53、caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法
36只新西兰大白兔随机分为对照组、模型组、治疗组，每组 12只。C组兔子在术后第 1天即开始进行 CPM治疗，8 h /d，连续 8 w。流式细胞术检测关
节软骨细胞凋亡情况。ＲT-PCＲ和 Western印迹方法检测关节软骨细胞凋亡相关基因 P53、caspase-3、Bcl-2、Bax表达情况。结果 与对照组软骨细胞
凋亡率(8. 08±1. 23)%相比，模型组软骨细胞凋亡率(39. 85±9. 93)%显著升高(P＜0. 01);凋亡相关基因P53、caspase-3、Bax表达出现显著上调，Bcl-2
表达出现显著下调。给予 CPM治疗后，与模型组相比，治疗组软骨细胞凋亡率显著降低(P＜0. 01)，凋亡相关基因P53、caspase-3、Bax表达出现显著
下调，Bcl-2显著上调。结论 CPM 可通过影响兔 OA 膝关节软骨细胞的凋亡情况，从而改善 OA 病情，其机制可能与调节凋亡相关基因 P53、
caspase-3、Bcl-2、Bax表达相关，为临床上利用 CPM治疗 OA提供了一定的科学依据。
〔关键词〕 持续被动运动;骨关节炎;软骨细胞;凋亡
〔中图分类号〕 Ｒ68 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)24-6067-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 24. 009
1 湖北医药学院附属太和医院急诊外科
第一作者:黄吉利(1979-)，男，硕士，主治医师，主要从事骨与关节损伤
研究。
骨关节炎(OA)是一种与年龄相关的退行性疾病，临床表
现为缓慢发展的关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和
关节畸形等〔1～3〕。OA病理特征是软骨细胞功能丧失和细胞外
基质(ECM)降解。软骨细胞凋亡改变了软骨基质的合成，从而
导致基质退化和破坏，最终导致 OA 发病。预防软骨细胞凋亡
已成为目前临床治疗 OA的潜在靶标之一〔4，5〕。已知持续被动
运动(CPM)在OA 治疗中具有显著的疗效。然而，CPM 治疗
OA的机制目前还不是很清楚。本研究拟观察 CPM 对兔软骨
细胞凋亡相关基因 P53、caspase-3、Bcl-2、Bax 表达的影响，深入
研究 CPM治疗 OA的机制。
1 材料与方法
1. 1 实验动物及分组 健康雄性新西兰大白兔 36只，购自重
庆医科大学实验动物中心〔许可证:SYXK(渝)20070001;动物
合格证号:SCXK(渝)20020001〕，体重 2. 0～2. 5 kg，随机分为对
照组、模型组、治疗组，每组 12只，对照组兔子仅手术切开关节
囊而不损伤关节软骨，术后笼内自由活动;模型组和治疗组采
用 Hulth 方法进行造模〔6〕，模型组兔子术后笼内活动;治疗组
兔子在术后第 1天即开始进行 CPM，8 h /d，连续 8 w。8 w后处
死所有兔子。
1. 2 软骨细胞获取方法 无菌条件下分离兔软骨组织，并采
用眼科剪剪碎至 1 ～ 3 mm，用 Hank 液清洗 2 次，随后加入
0. 25%Ⅱ型胶原酶在 37℃消化 1 h，采用 100目孔径滤网过滤，
收集滤过液，1 500 r /min 离心 5 min，所得沉淀即为兔软骨
细胞。
1. 3 凋亡染色方法 获取的软骨细胞以 ＲPMI1640 重悬并计
数。采用 Annexin V /7-AAD 方法检测细胞凋亡情况。具体操
作方法参见试剂盒说明书。
1. 4 ＲT-PCＲ Trizol提取细胞总 ＲNA，反转录成 cDNA。PCＲ
反应条件:95℃ 5 min，95℃10 s，60℃ 20 s，共 40个循环。得到
的数据通过比较 CT值法(2-△△Ct)进行定量分析。见表 1。
1. 5 Western印迹方法 采用 Novagen 公司的 Cytobuster 提取
细胞总蛋白，提取蛋白经 10% SDS-PAGE 分离胶和 5%浓缩胶
·7606·黄吉利等 持续被动运动对兔骨关节炎软骨细胞凋亡相关基因 P53、caspase-3、Bcl-2和 Bax的影响 第 24期