全 文 ：毛蒟挥发油测定及其贮存期考察
谢凤凤， 曾锦燕， 曾祥燕， 蔡 毅*
(广西中医药大学，广西 南宁 530001)
收稿日期:2014-11-04
基金项目:广西自然科学基金创新研究团队项目 (2011GXNSFF018006);广西“2011 协同创新中心”-壮瑶药协同创新中心项目 (桂教
科研 ［2013］ 20 号);壮药毛蒟质量标准研究项目 (MZY2013063) ;广西壮瑶药重点实验 (桂科基字 ［2014］ 32 号) ;广西重点学科 (壮
药学) (桂教科研 ［2013］ 16 号)
作者简介:谢凤凤 (1989—)，女，硕士，主要从事中药及民族药品种鉴别与开发利用。Tel:15177143553，E-mail:15177143553@
qq． com
* 通信作者:蔡 毅 (1962—) ，男，教授，主要从事生药鉴别研究。E-mail:Caiyi118@ 163． com
摘要:目的 水蒸汽蒸馏法提取广西产毛蒟中挥发油，GC-MS法测定挥发油中 β-石竹烯含有量，并对其最佳贮存期进
行考察。方法 挥发油的分析色谱柱为 HP-5MS (30 m × 0. 25 mm，0. 25 μm) ;程序升温;载气为氦气;水杨酸甲酯
为内标物。结果 挥发油得油率在 0. 23%～ 1. 64%之间，贮存 1 年后其下降率为 22. 68%，1. 5 年后下降率为 41. 63%;
β-石竹烯在 0. 033 9 ～ 0. 542 4 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系 (r = 0. 999 6)，平均回收率为 98. 5% (ＲSD =
2. 0%，n = 6);β-石竹烯含有量在 31. 363 8 ～ 338. 957 2 mg /mL之间，一年后其下降率为 35. 03%，一年半后下降率为
44. 53%。结论 建议毛蒟的贮存时间不超过 1 年。
关键词:毛蒟;挥发油;β-石竹烯;GC-MS;贮存期
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)08-1776-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 08. 031
Determination of volatile oil in Piper puberulum and its proper storage time
XIE Feng-feng， ZENG Jin-yan， ZENG Xiang-yan， CAI Yi*
(Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China)
ABSTＲACT:AIM To determine β-caryophyllene content in volatile oil isolated from Piper puberulum by GC-
MS choose its proper storage time． METHODS The analysis of volatile oil was performed on HP-5MS (30 m ×
0. 25 mm，0. 25 μm) column with temperature-programming mode，carrier gas was He，and internal standard
substance was methyl salicylate． ＲESULTS Volatile oil rate was between 0. 23% and 1. 64% ． A year later，its
drop rate was 22. 68% ． After a year and a half，it was 41. 63% ． There was a good linear relationship for β-caryo-
phyllene during 0. 033 9 － 0. 542 4 μg (r = 0. 999 6)，the average recovery rate was 98. 5% (ＲSD =2. 0%，n =
6) ，the content of β-caryophyllene was 31. 363 8 － 338. 957 2 mg /mL． A year later，its drop rate was 35. 03% ．
After a year and a half，it was 44. 53% ． CONCLUSION It suggests that the storage time of P． puberulum
should be no less than one year．
KEY WOＲDS:Piper puberulum;volatile oil;β-caryophyllene;GC-MS;storage time
毛蒟来源于胡椒科植物毛蒟 Piper puberulum
(Benth．)Maxim． 全草，异名小毛蒟、小墙风、野
芦子，为广西民间常用中草药［1］，主产于广西、
广东、南海各沿海岛屿［2］，具有祛风驱寒除湿，
行气活血止痛功效，主治风湿性腰痛、跌打损伤、
脘腹疼痛等［3］。其气味浓烈，富含挥发油，而且
其中非萜类成分 (尤其芳香族化合物)的比例较
大［4］。现代研究表明，毛蒟具有明显的抗炎、镇
痛和抗血小板聚集等药理作用［5-6］。本实验在完成
生药鉴别［7-8］、挥发油成分［9］、质量标准初步研
究［10］等工作的基础上，对产于广西各地毛蒟的挥
发油及其中 β-石竹烯含有量进行测定，并对其贮
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存期进行考察，为该植物进一步开发利用提供
基础。
1 仪器与试药
6890N-5973N型 GC-MS 联用仪 (美国 Agilent
公司);BP211D 电子天平 (德国赛多利斯公司) ;
HDM 2000 型调温恒温电热套 (常州国华电器有限
公司) ;L16875B 移液枪 (德国 Eppendorf公司)。
毛蒟采自广西各地，经广西中医药大学蔡毅教
授鉴定为胡椒科植物毛蒟 Piper puberulum (Benth．)
Maxim． 全草。β-石竹烯对照品 (美国 Sigma公司，
批号 22075-1MJ-F)。水杨酸甲酯和乙酸乙酯均为
分析纯 (国药集团化学试剂有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 挥发油的提取 分别取各批次毛蒟药材
110 g，剪成约 1 cm小段，置于 2 000 mL圆底烧瓶
中，水蒸汽蒸馏法提取 5 h。按 2010 年版《中国药
典》一部附录 XD 挥发油测定法测定，收集挥发
油，无水硫酸钠干燥，离心 10 min，得到毛蒟挥发
油样品。所得挥发油体轻，浮于水面，气味浓烈。
2. 2 内标物溶液的配制 精密量取水杨酸甲酯
200 μL，称重 242. 35 mg，乙酸乙酯定容至 10 mL，
摇匀，质量浓度为 24. 235 mg /mL，即得内标物
溶液。
2. 3 对照品溶液的配制 精密量取 β-石竹烯对照
品 36 μL，称重 33. 9 mg，加内标溶液 10 μL，乙酸
乙酯定容至 10 mL，摇匀，即得对照品溶液 (β-石
竹烯质量浓度为 3. 390 mg /mL)。
2. 4 供试品溶液的制备 精密量取不同产地毛蒟
挥发油样品 6 μL，置于 2 mL量瓶中，加内标溶液
10 μL，乙酸乙酯定容，即得供试品溶液。
2. 5 色谱条件 HP-5MS 石英毛细管色谱柱
(30 m × 0. 25 mm，0. 25 μm);程序升温，初始温
度 60 ℃，保持 2 min，然后以 10 ℃ /min 的速率升
至 110 ℃，并保持 15 min，再以 2 ℃ /min 的速率
升至 116 ℃，并保持 6 min，随即以 10 ℃ /min 的
速率升至 140 ℃，并保持 8 min，最后以 5 ℃ /min
的速率升至 260 ℃，并保持 2 min;载气为氦气
(He);体积流量 1. 0 mL /min;进样口温度 250 ℃;
检测器温度 280 ℃;溶剂延迟 3 min;进样量 0. 4
μL;分流比 1 ∶ 1。
2. 6 质谱条件 电离方式 EI;电子能量 70 eV;
四级杆温度 150 ℃;倍增电压 1 247 eV;接口温度
280 ℃;扫描范围 m/z 45 ～ 550。然后，分别对对
照品和供试品溶液 (MJ-4)进行扫描，结果见
图 1。
A． 对照品溶液 B． 供试品溶液 a． 内标物 b． β-石竹烯
A． reference solution B． test solution a． internal standard b． β-caryophyllene
图 1 总离子流图
Fig. 1 Total ion chromatogram
2. 7 方法学考察
2. 7. 1 线性关系的考察 精密移取对照品溶液
0. 05、0. 1、0. 4、0. 6、0. 8 mL，置于 2 mL 量瓶
中，分别按“2. 3”项下方法配制对照品溶液。再
各取 0. 4 μL进样，在 “2. 5”项条件下进行测定，
以对照品与内标浓度之比为 X，对照品与内标物峰
面积之比为 Y，进行线性回归，回归方程为 Y =
1. 367 0X + 0. 124 8 (r = 0. 999 6)，β-石竹烯在
0. 033 9 ～ 0. 542 4 μg 范围内与峰面积呈良好线性
关系。
2. 7. 2 精密度试验 精密吸取质量浓度为 0. 169 5
mg /mL的 β-石竹烯对照品溶液 0. 4 μL，在 “2. 5”
项色谱条件下连续进样 6 次，测定峰面积值，计算
出 ＲSD为 2. 06% (n =6)，表明仪器精密度良好。
2. 7. 3 重复性试验 精密移取毛蒟供试品溶液
(MJ-4)6份，各 6 μL，分别按“2. 4”项下方法配
制供试品溶液，在“2. 5”项色谱条件下分析，计算
出 ＲSD为 3. 00% (n =6)，表明方法重复性良好。
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2. 7. 4 稳定性试验 精密移取同一份供试品溶液
适量，分别于 0、2、4、6、8、10 h 进样 0. 4 μL，
在“2. 5”项色谱条件下分析，测定峰面积值，计
算出 ＲSD为 2. 07% (n = 6)，表明样品在 10 h 内
保持稳定。
2. 7. 5 加样回收率试验 精密移取对照品
28. 85 mg，定容至 2 mL;精密移取毛蒟挥发油样
品溶液 (MJ-4)3 μL，各 6 份;精密移取质量浓度
为 14. 425 mg /mL 的对照品溶液 10 μL (0. 144 3
mg)，分别加入 6 份挥发油样品溶液，按 “2. 4”
项下方法制备供试品溶液，在 “2. 5”项色谱条件
下进样分析。结果表明，β-石竹烯进样量在
0. 112 7 ～ 0. 115 2 μg 之间，在线性范围之内，平
均回收率为 98. 5%，ＲSD 为 2. 0% (n = 6)，说明
该方法准确度高，可作为毛蒟挥发油中 β-石竹烯
的测定方法，结果见表 1。
表 1 加样回收试验结果
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收率 /
%
ＲSD /
%
0. 143 8 0. 144 3 0. 282 7 96. 3
0. 143 8 0. 144 3 0. 287 9 99. 9
0. 143 8 0. 144 3 0. 287 4 99. 6 98. 5 2. 0
0. 143 8 0. 144 3 0. 287 9 99. 9
0. 143 8 0. 144 3 0. 281 7 95. 6
0. 143 8 0. 144 3 0. 287 7 99. 8
2. 8 样品测定 精密移取不同批次的毛蒟挥发油
供试品，各 6 μL，按“2. 4”项下方法制备供试品
溶液。再精密吸取 0. 4 μL，注入气质联用仪，在
“2. 5”项色谱条件下进样，内标法计算各产地毛
蒟挥发油中 β-石竹烯含有量，结果见表 2。
表 2 9 批毛蒟样品中挥发油得油率与 β-石竹烯的含有量
Tab. 2 Volatile oil yields and contents of β-caryophyllene in 9 batches of Piper puberulum
药材批次 产地 取得样品时间 得油率 /% 挥发油颜色
β-石竹烯含有量 /
(mg·mL －1)
β-石竹烯含有量平均值 /
(mg·mL －1)
ＲSD /%
30. 780 7
MJ-1 贵港平南 2012. 07. 07 1. 18 黄棕色 31. 057 4 31. 363 8 2. 50
32. 253 2
142. 902 1
MJ-2 玉林药市购买 2012. 10. 09 0. 27 深黄色 139. 225 3 139. 102 2. 78
135. 178 7
340. 693 8
MJ-3 钦州钦北区 2012. 12. 06 0. 27 黄色 343. 984 3 338. 957 2 1. 79
332. 193 5
45. 194 3
MJ-4 来宾金秀县 2013. 01. 09 1. 64 浅黄色 43. 627 2 45. 239 2 3. 61
46. 896 1
191. 513 8
MJ-5 桂林荔浦购买 2013. 01. 07 0. 32 黄色 184. 850 6 190. 670 9 2. 86
195. 648 2
64. 356 4
MJ-6 来宾金秀 2013. 05. 23 0. 82 黄色 61. 075 1 62. 209 5 2. 99
61. 197 1
126. 448
MJ-7 玉林药市购买 2013. 01. 05 0. 23 深黄色 132. 316 1 130. 196 2. 5
131. 824
236. 125 8
MJ-8 来宾金秀购买 2013. 05. 23 0. 36 黄色 247. 105 8 242. 472 2 2. 35
244. 184 8
332. 253 4
MJ-9 桂平市购买 2012. 07. 06 0. 23 黄色 319. 603 8 332. 541 5 3. 93
345. 767 3
2. 9 考察不同贮存期对毛蒟挥发油的影响
2. 9. 1 挥发油得油率的变化 将上述毛蒟 (产
地 MJ-1 ～ MJ-5)贮存一年及一年半后，取各产地
药材 100 g，按照 “2. 1”项下方法提取挥发油。
结果，一年后所得的挥发油体轻，浮于水面，与
新鲜时相比，气味较淡、颜色偏深，而一年半后
所得挥发油性状与一年后变化不大，5 个产地挥
发油得油率的变化见表 3。
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表 3 不同贮存期下毛蒟挥发油得率的变化
Tab. 3 Change of volatile oil yields of Piper puberulum during different storage times
药材
批次
最初得油率 /
%
一年后得油率 /
%
一年后下降率 /
%
一年后平均下降率 /
%
一年半后得油率 /
%
一年半后下降率 /
%
一年半后平均下降率 /
%
MJ-1 1. 18 1. 06 10. 17 0. 68 42. 37
MJ-2 0. 27 0. 21 22. 22 0. 17 37. 04
MJ-3 0. 27 0. 19 29. 63 22. 68 0. 16 40. 74 41. 63
MJ-4 1. 64 1. 48 20. 73 0. 95 42. 07
MJ-5 0. 32 0. 25 21. 88 0. 20 37. 50
2. 9. 2 β-石竹烯含有量的变化 将 “2. 9. 1”项
下得到的挥发油在“2. 5”项色谱条件下进样，测
得 β-石竹烯含有量变化，见表 4。
表 4 不同贮存期下 β-石竹烯的含有量变化
Tab. 4 Change of β-caryophyllene contents during different storage times
药材
批次
原含有量 /
(mg·mL －1)
一年后含有量 /
(mg·mL －1)
一年后下降率 /
%
一年后平均下降率 /
%
一年半后含有量 /
(mg·mL －1)
一年半后下降率 /
%
一年半后平均下降率 /
%
MJ-1 31. 363 8 23. 147 2 26. 20 21. 038 9 32. 92
MJ-2 139. 102 0 79. 362 0 42. 95 69. 492 1 50. 04
MJ-3 338. 957 2 256. 259 0 24. 40 35. 03 214. 909 9 36. 60 44. 53
MJ-4 45. 239 2 28. 367 1 37. 30 23. 931 2 47. 10
MJ-5 190. 670 9 106. 176 1 44. 31 83. 928 7 55. 98
3 讨论
挥发油是一类由萜类 (单萜和倍半萜)、芳香
族、脂肪族成分等组成的复杂化合物，常存在于具
有明显气味的药材中，具有发散解表、芳香开窍、
理气止痛、祛风除湿等作用，对心脑血管系统、中
枢神经系统、呼吸系统、胃肠道系统等多方面疾病
都具有疗效［11-13］。毛蒟具有祛风散寒除湿，行气
活血止痛功效，其有效成分可能就是挥发油。实验
发现，不同产地毛蒟挥发油中均含 β-石竹烯，可
作为控制其质量的指标性成分。
本实验采用内标法，对毛蒟挥发油中的 β-石
竹烯进行定量测定。在考察萘与水杨酸甲酯作为内
标物时发现，水杨酸甲酯峰型好，对其他峰均无干
扰，故选用水杨酸甲酯作为内标物，避免了因手动
进样而导致的误差，确保其含有量测定的准确度。
从上述结果得出，各产地毛蒟挥发油的得油率
在 0. 23% ～ 1. 64%之间，相差较大;β-石竹烯的
含有量在 31. 3638 ～ 338. 9572 mg /mL 之间，差异
也较大，而且与得油率不呈正比关系，均受产地、
采收季节、贮藏时间等因素影响。
毛蒟属于胡椒科植物，挥发油含有量较高，在
贮存一年后，其得油率下降了 22. 68%，β-石竹烯
含有量下降了 35. 03%;一年半后，得油率下降了
41. 63%，含有量下降了 44. 53%。由于一年半内
得油率与 β-石竹烯含有量均迅速下降过半，故建
议毛蒟贮存期为一年，且贮存时注意密闭避光。
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