全 文 ：一 1 0 2 4一 药物分析杂志 Ci hn J P hrn a An l a 206
,
26 ( 9 )
RP
一 H P L C 法测定狼毒中岩大戟内醋 A 和 B 的含量
乔春峰 ,韩全斌 , 贺震旦 , 宋景政 , 徐宏喜 ’
(香港赛马会中药研究院中药实验室 ,香港 )
摘要 目的 :建立测定狼毒药材中 2个二菇内醋类成分岩大戟内醋 A 和 B 的 HP LC 定量分析方法。 方法 :采用 C l 。柱 ( 4 . 6 m m
、
25 0 m m
,
5 林m) , 乙睛 一水 ( 75 : 25 )洗脱 ,流速为 1 . 0 m L · m in 一 ’ ,检测波长为 250 n m 。 结果 :狼毒大戟和月腺大戟中普遍含
有岩大戟内醋 A 和 B , 2 个成分的含量范围分别为 0 . 0 7% 一 0 . 04 3% 和 0 . 0 12 % 一 0 . 204 % 。 瑞香狼毒和海芋中不含有这 2 个
成分 。 结论 :本方法专属性强 ,结果准确 ,简便可行 ,适用于狼毒药材中岩大戟内醋 A 和 B 的含量测定 。
关键词 :狼毒 ;岩大戟内醋 A ;岩大戟内醋 ;B 高效液相色谱法 ;含量测定
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A 文章编号 : 02 54 一 179 3 ( 20 06 ) 09 一 1204 一 03
H P L C d e t e r m in a it o n o f j
o l ik n o l i d e A a n d j
o lik n o l id e B i n
C ih n e s e h e r b m e d i c ine
“
L a n g 一 d u ”
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,
H E Zh e n 一 d a n , SO N G Ji n g 一 z h e n g , X U H o n g 一 x i
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.
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,
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.
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.
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K e y wo
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狼毒为传统的中药材 , 具有杀虫 、 破积等功效 ,
用于治疗牛皮癣 、慢性支气管炎 、滴虫性阴道炎和皮
肤结核等疾病〔`〕 。 狼毒来源于大戟科植物狼毒大
戟 EuP ho br at 户 che ir a an tS eu d . 、月腺大戟 E . eb ar c eot -
lat
a H ay at 和瑞香科植物瑞香狼毒 set l l e r a hc a lan e -
asj me L
. 的根川 , 在我国广东 、 广西和香港等省区 ,
天南星科植物海芋 A lo c o ia ~ or 诚ha ( L
.
) Shc ot
的根茎也 被用作狼毒的代用 品 , 称 为 “ 广东狼
毒 ,[ ’ 〕 。 不同来源的狼毒药材所含主要成分类型也
不同 。 文献报道采用 L C 一 M S/ M S 法对瑞香狼毒 、
狼毒大戟和月腺大戟中的各 自特征性成分进行了分
析 [4〕 。 大量的化学成分研究文献表明来源于大戟
科的狼毒大戟和月腺大戟主要含有二菇内醋类成
分 [’ 一 ’ 0 ] ,其中岩大戟内醋 A ( j o lk i n o l id e A )和岩大戟
内酷 B ( j o lk i n o l id e B ) 显 示 出很 好的抗肿瘤活
性〔’ ,小 ” 〕 。 文献报道采用 HP L C 法对狼毒大戟 、 月
腺大戟及其同属多种植物中的岩大戟内醋 B 进行
了含量测定 , 表明狼毒大戟中岩大戟内醋 B 的含
量为 0 . 04 % 一 0 . 17 0% , 而在月腺大戟中未检测
到 〔’ ] 。
为了更全面地对狼毒中的活性成分进行分析 ,
我们建立了狼毒药材中岩大戟内醋 A 和岩大戟内
* 通讯作者 eT l : ( 8 52 ) 3 4 0 6 2 87 3 ; E 一 ~ l : x hu o n加@ h kj e i e m . o铭
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2006. 09. 003
药物分析杂志 C h in JP h ~A na l2 0 (拓 , 6 ( 9) 一 12 05 一
醋 B 的 H P L C 含量测定方法 , 并对收集到的 9 份药
材进行了分析 。
1 仪器 、 试剂与药材
高效液相色谱仪 : Aigl en t n o 系列 , D AD 检测
器 。 水为超纯水 ,乙睛为 H PCL 级 , 甲醇 、氯仿为分析
纯。 岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B 为中国药科大学
阂知大教授赠送 ,其结构经核磁共振光谱鉴定 ,纯度
经 H P LC 检测超过 98 % 。 9 份狼毒药材为香港中文
大学毕培曦教授和邵鹏柱教授赠送 ,均经作者鉴定 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件 色谱柱 : oz ht ax X D B RP 一 lC : (4 . 6
m m x 2 50 m m
,
5 林m ) ;流动相 : 乙睛 一 水 ( 7 5 “ 25 ) ;
流速 : 1 . 0 m L · m i n 一 ’ ;检测波长 : 250 n m 。
2
.
2 线性关系考察 精密称取岩大戟内酷 A 和岩
大戟内醋 B 适量 , 加甲醇配制成浓度分别为 0 . 770
m g
·
m L
一 ’ 和 .0 801 m g · m L 一 ’ 的混合对照品储备
液 。 精密量取上述溶液 0 . 01 , 0 . 1 , 0 . 4 , 0 . 8 , 1 . 2 ,
1
.
6
,
2
.
0 m L
,分别转移至 10 m L 量瓶中 ,加甲醇稀释
至刻度 ,配制成不同浓度的溶液 。 精密吸取上述不
同浓度的溶液各 10 林L ,进样分析 ,测定峰面积 。 岩
大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B 的保留时间分别为
12
.
6 1 和 5 . 15 m i n (图 l 一 A ) 。 以进样量 ( 林g )为横
坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 计算得岩大
戟内醋 A 及岩大戟内醋 B 的回归方程分别为 :
Y = 1304
.
3 X 一 1
.
052 7 ; = 0
.
9 999
Y = 14 14
.
S X + 2
.
17 06 r = 0
.
9 998
结果表明岩大戟内醋 A在 7 . 70 一 1540 gn 之间
,
岩大戟内醋 B 在 8 . 01 一 1印 Z gn 之间线性关系良好 。
2
.
3 精密度试验 取岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋
B 浓度分别为 30 . 80 卜g · m L 一 ’ 和 32 . 04 卜g · m L 一 ’
的混合对照品溶液 , 进样 or 林L , 连续操作 5 次 , 测
定峰面积 ,计算 R SD 值 。 结果岩大戟内醋 A 及岩大
戟内醋 B 的峰面积平均值分别为 39 . 3 和 4 5 . ;1
RS D 分别为 0 . 7 7% 和 0 . 8 4% ( n = 5 ) 。
2
.
4 稳定性试验 取岩大戟内醋 A 和岩大戟内酷
B 浓度分别为 30 . 80 此 · m L 一 ’ 和 32 . 04 林g · m L 一 ’
的混合对照品溶液 ,于 24 h 内每间隔 6 h 分别进样
10 林L ,测定峰面积 ,计算 R SD 值 。 结果岩大戟内醋
A 及岩大戟内醋 B 的峰面积平均值分别为 392 . 5 和
科 9 . 7 ; R SD 分别为 0 . 96% 和 0 . 93% ( n = 5 ) 。
2
.
5 重复性试验 取 4 号样品粉末 ,按照样品测
定项下方法平行操作 5 份 ,计算岩大戟内醋 A 和岩
大戟内醋 B 的含量 , 平 均值分别 为 0 . 04 0% 和
0
.
0 64 % ; RSD 值分别为 1 . 5% 和 2 . 0% ( n = 5 ) 。
r es es es es es es es T ~ ~ ~ es es一 - - ,尸- - - - - - - - l es es es es eses es es
0 5 10 15 2 0
A
0 5 10 1 5 20 t / m i n
图 1 对照品( A )和狼毒大戟 ( 1号样品 ) ( B )HP LC 色谱图
F ig 1 HP LC
e
h o m
a t o gr a m s Of re fe re n e e su b s t a n c e s ( A )阴d R a d议 E u -
p h o山 iae iF cs h ier an ae ( N o
.
l ) ( B )
1
. 岩大戟内醋 B ( j o lk in ol id e B ) 2 . 岩大戟内醋 A ( jol k in o il d e A )
2
.
6 加样回收率试验 取已测知含量的 4 号样品
粉末 ,精密称取 1 9 , 共 5 份 , 各加人岩大戟内醋 A
和岩大戟内醋 B 浓度分别为 0 . 385 m g · m L 一 ’ 和
0
.
40 1 m g
·
m L
一 ’的混合对照品溶液 1 m L ,按照样品
测定项下方法平行操作 ,计算加样回收率。 结果表
明 2 个成分的加样回收率都在 95 % 一 105 % 之间 ,
岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B 的平均回收率分别
为 9 7 . 9% 和 97 . 3% , RSD 值分别为 3 . 0% 和 3 . 2%
(
n = 5 )
。
2
.
7 样品测定 取药材样品粉末 1 9 , 精密称重 ,
用氯仿 50 m L 索氏提取 3 h 。 氯仿提取液减压蒸
干 , 残渣用甲醇溶解 , 转移定容至 50 m L 量瓶 中。
取上述甲醇溶液用 0 . 45 林m 微孔滤膜过滤 , 取续
滤液 , 为供试品溶液 。 精密吸取各供试品溶液 10
林L 进样分析 , 测定峰面积 , 根据回归方程计算各
样品中岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B 的含量 (表
l
, 图 l 一 B ) 。
3 讨论
3
.
1 含量测定结果表明狼毒大戟和月腺大戟中普遍
含有岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B ,各样品中岩大戟
内醋 A 的含量低于岩大戟内醋 B 。 狼毒大戟中岩大戟
内醋 B 的含量较高 ,为 .0 田2% 一 .0 么辫% , 明显高于
月腺大戟。 与狼毒大戟和月腺大戟不同 ,瑞香狼毒和
海芋中均未检钡l到岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B 。
一 12 06 一 药物分析杂志 Chi n J Ph amr A n al 20 6 , 26 ( 9 )
表 1 , 份狼毒药材中岩大戟内醋 A和岩大戟内醋 B 的含 t 测定结果
aT b 1 C
o n t e n st of 」0】肠 n o il ds A a n d oj ldl n o舫ds B in 山 e ~ P】se of `飞翻堪 一 d u’ ,
种名
(
s伴 e i e s )
编号
( N
o
.
)
产地
(脚衍 n g , ig o n s )
含量 (co nt e snt )%
岩大戟内酷 A ( jo lki n o lid e A ) 岩大戟内醋 B ( Jol k in o li d e B )
狼毒大戟 E叩 ho 活 at 户 che urz an l 黑龙江大庆 ( D叫 i n g , H e ilo n自ian g )
黑龙江齐齐哈尔
( Qiq ih
a , e r , H e ilo明 ian g )
黑龙江齐齐哈尔
( Qiq ih
a ’ e r , H e ilo咱 iax lg )
辽宁本溪 ( B~
,
U ao n in g )
辽宁 ( U ao n in g )
辽宁 ( U ao n in g )
黑龙江北安 ( B e i , an , H e ilo n自ian g )
甘肃陇西 (助 n脚 , Ga n s u )
广东连州 ( U an z h ou , G u an gd o n g )
0
.
0 2 1 0
.
10 1
0
.
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.
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0 17 0
.
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.
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瑞香狼毒 st e l花r a hc a翻elz as me
海芋 A阮。 必
~
欣邵
“ 一 ” :未检测到 ( not d e t e e ted )
3
.
2 岩大戟内醋 A 和岩大戟内醋 B 的最大吸收
波长分别为 28 5 n m 和 2 40 n m , 在 25 0 n m 下 2 个
成分均有较强 的吸收 , 因此选用 250 n m 为检测
波长 。
3
.
3 在供试品溶液制备过程中 , 曾比较了石油醚 、
氯仿 、 乙酸乙醋 、 丙酮和甲醇不同溶剂的提取效果 ,
结果表明氯仿提取较完全 , 且杂质较少 , 因此采用氯
仿索氏提取 。
3
.
4 所建立的狼毒药材中岩大戟内醋 A 和岩大戟
内醋 B 的含量测定方法专属性强 , 准确可靠 , 简便
易行 , 可用于该药材的质量控制研究 。
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(本文于 20 5 年 4 月 27 日收到 )