全 文 ：［收稿日期］ 20101026(015)
［基金项目］ 广西 企 业 科 技 特 派 员 专 项 项 目 (桂 科 产
09321001);广西区卫生厅自筹经费科研课题
(Z2009174);广西壮药质量标准(第二卷)标准研
究项目(MZY2010044)
［第一作者］ 刘元，高级实验师，从事中药药理学研究与新药开
发，Tel:0771-5868275，E-mail:liuyuan0821 @
vip. 163. com
亮叶杨桐指纹图谱研究
刘元，宋志钊，李文琪
(广西中医药研究院，南宁 530022)
［摘要］ 目的:采用反相高效液相色谱法建立亮叶杨桐叶指纹图谱。方法:采用反相高效液相色谱法，以 Kromasil C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)为分离柱，乙腈-0. 1%磷酸溶液梯度洗脱;流速 1 mL·min －1;检测波长 254 nm。结果:以梯度洗脱得
到的色谱图各色谱峰分离较好，达到指纹图谱的技术要求，10 批样品相似度大于 0. 9。结论:采用 HPLC指纹图谱检测技术可
有效控制亮叶杨桐叶药材的质量。
［关键词］ 亮叶杨桐叶;指纹图谱;反相高效液相法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)06-0071-03
HPLC Fingerprint Analysis of Adinandra nitida
LIU Yuan，SONG Zhi-zhao，LI Wen-qi
(Guangxi Institute for Chinese Medicine ＆ Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China)
［Abstract］ Objective:To establish the fingerprint of leaves of Adinandra nitida by RP-HPLC. Method:
The chromatographic conditions were as follows:a Kromasil C18 column was used;the mobile phase was composed
of acetonitrile-0. 1% phosphoric acid with gradient elution;the flow rate was 1 mL·min －1 and the UV absorbance
detection was set at 254 nm. Result:Under the selected chromatographic conditions，10 batches of HPLC
fingerprint of A. nitida with good similarity were obtained，no less than 0. 9. Conclusion:Quality of A. nitida can
be controlled effectively by HPLC-UV fingerprint.
［Key words］ Adinandra nitida;fingerprint;RP-HPLC
亮叶杨桐叶为山茶科杨桐属植物亮叶杨桐
Adinandra nitida Merr. ex Li的干燥叶，俗称石芽茶或
亮叶杨桐叶。亮叶杨桐叶香气浓郁，口味甘甜持久，
其中含黄酮类 20%、茶多酚 23. 47%、氨基酸 0. 4%，
并具有明显的消炎、解毒、止血和降压等功效，是目
前植物中黄酮类含量较高的植物［1］。亮叶杨桐叶的
化学成分主要有黄酮类［2］、三萜皂苷类［3］，但未见
到有关其指纹图谱的研究。本文以分析黄酮类为主
的 HPLC色谱方法，通过化学计量学统计，建立了亮
叶杨桐叶药材的液相色谱指纹图谱，较全面地分析
和评价亮叶杨桐叶的质量。
1 材料
1. 1 样品 亮叶杨桐叶批号 090204(金秀)、
090605(金秀)、090711(昭平)、090712 (马山)、
090711(上思)、090802(金秀)、091118 (马山)、
091210(昭平)、091215(上思)、091221(金秀)。鉴
定人为广西中医药研究院中药所助理研究员黄
云峰。
1. 2 试药 水为高纯水;乙腈为色谱纯。槲皮苷对
照品由中国药品生物制品检定所提供，批号 111538-
200403;芹菜素、山茶苷 A 对照品均为自制，
纯度 > 95%。
LC-20ATVP 液相色谱仪、SPD-20AVP 检测器
(日本岛津);威玛龙色谱工作站(广西南宁威玛龙
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第 17 卷第 6 期
2011 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 6
Mar.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.06.075
色谱科技有限公司);TC-100 色谱柱恒温箱(天津特
纳科技公司)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱 Kromasil C18(4. 6 mm ×250
mm，5 μm);检测波长 254 nm;柱温室温;流动相乙
腈-0. 1%磷酸溶液，二元梯度洗脱，洗脱时间 70
min，流速为 1 mL·min －1;进样量为 10 μL，所有组
分在 70 min内出峰完毕。梯度洗脱条件见表 1。
表 1 流动相梯度洗脱条件
t /min 乙腈 /% 0. 1%磷酸 /%
0
20
30
65
70
15
15
19
19
15
85
85
81
81
85
2. 2 对照品溶液制备 精密称取芹菜素、槲皮苷、
山茶苷 A对照品适量，加甲醇制成每 1 mL含芹菜素
100 μg、槲皮苷 20 μg、山茶苷 A 100 μg 的混合对照
品溶液，即得。
2. 3 供试品的制备 取本品药材粉末(过 80 目筛)
0. 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲
醇 50 mL，称定质量，加热回流 1 h，放冷，再称定质
量，用 50%甲醇补足缺失的质量，摇匀，用 0. 45 μm
微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 精密度和稳定性试验 取批号为 090204 的亮
叶杨桐叶，按供试品溶液制备方法制备供试品，分别
在 0，4，8，12，16 h进样，检测指纹图谱，记录各共有
峰的保留时间和峰面积，以山茶苷 A 色谱峰的保留
时间和峰面积为参照，计算各共有峰的相对保留时
间和相对峰面积。结果显示，各共有峰的相对保留
时间和相对峰面积没有明显变化，RSD 均 < 3%，符
合指纹图的技术要求。
2. 5 重复性试验 取批号为 090802 的亮叶杨桐叶
共 6 份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶
液，检测指纹图谱，记录各共有峰的保留时间和峰
面积，以山茶苷 A色谱峰的保留时间和峰面积为参
照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
结果显示，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积
没有明显变化，RSD 均 < 3%，符合指纹图的技术
要求。
2. 6 指纹图谱的建立 按照供试品溶液制备方法
将 10 批药材制备成供试品溶液，分别进样检测，测
定所有供试品溶液的 H P L C 色谱图。根据 1 0 批
次供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)
和相对保 留时间等相关参数，进行分析、比较，制定
优化的指纹图谱。见图 1。
图 1 混合对照品 HPLC指纹图谱
2. 7 共有峰确定 根据 10 批亮叶杨桐叶供试品的
检测结果，比较色谱图。选择亮叶杨桐叶供试液图
谱中峰面积较大、峰形较好的色谱峰作为共有峰，共
8 个(图 2)，其中 7 号峰为山茶苷 A(为亮叶杨桐叶
主要成分)，其峰面积约占总峰面积 5 0%，峰形稳
定，可将该峰作为参照峰。
图 2 亮叶杨桐叶 HPLC指纹图谱
2. 8 共有峰相关信息 根据 10 批亮叶杨桐叶样品
的色谱图结果，以 7 号峰作为参照峰，计算各共有
峰相对保留时间，结果 RSD <2%(表 2)。8 个共有
峰其峰面积总和占总峰面积平均百分比为 93%以
上。以参照峰峰面积为基准，计算各共有峰峰面积
与参照峰峰面积的比值，共有峰面积比值基本固定
(表 3)。均符合指纹图谱的要求。
2. 9 指纹图谱相似度评价 本实验记录了广西 4
个区域 l0 批亮叶杨桐叶的指纹图谱(图 3)。将 10
批样品的电平信号转换为数字数据后，测试数据导
入国家药典委员会 2 0 0 4 年 A 版“ 中药色谱指纹
图谱相似度评价系统”进行数据处理。得到亮叶杨
桐叶指纹峰共有模式 R(图 3);与共有模式比较，广
西 4 个区域 10 批亮叶杨桐叶药材的指 纹图谱相似
度分别为 0. 989，0. 982，0. 990，0. 994，0. 990，0. 999，
0. 971，0. 962，0. 997，0. 997。
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第 17 卷第 6 期
2011 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 6
Mar.，2011
表 2 10 批石崖茶样品共有峰相对保留时间比较
峰号
090204
金秀
090605
金秀
090711
昭平
090711
上思
090712
马山
090802
金秀
091118
马山
091210
昭平
091215
上思
091221
金秀
平均值
RSD
/%
1 0. 488 6 0. 484 5 0. 487 4 0. 484 3 0. 479 9 0. 491 7 0. 487 8 0. 496 3 0. 501 3 0. 492 0 0. 489 4 1. 27
2 0. 570 6 0. 565 6 0. 567 4 0. 566 8 0. 564 2 0. 571 5 0. 568 6 0. 569 6 0. 571 2 0. 572 5 0. 568 8 0. 48
3 0. 608 9 0. 605 1 0. 605 3 0. 607 4 0. 604 8 0. 609 7 0. 596 5 0. 607 2 0. 610 5 0. 610 5 0. 606 6 0. 68
4 0. 725 7 0. 721 8 0. 721 6 0. 723 7 0. 722 0 0. 724 7 0. 714 3 0. 720 0 0. 723 8 0. 725 5 0. 722 3 0. 46
5 0. 746 7 0. 742 9 0. 742 7 0. 744 9 0. 743 0 0. 745 9 0. 735 4 0. 741 3 0. 745 2 0. 746 7 0. 743 5 0. 45
6 0. 768 9 0. 766 3 0. 765 5 0. 768 8 0. 766 6 0. 768 4 0. 763 6 0. 769 7 0. 771 8 0. 769 2 0. 767 9 0. 31
7 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 0. 00
8 1. 132 9 1. 132 4 1. 133 3 1. 132 0 1. 132 3 1. 134 0 1. 126 1 1. 127 7 1. 129 2 1. 133 4 1. 131 3 0. 24
表 3 10 批石崖茶样品共有峰相对峰面积比较
峰
号
090204
金秀
090605
金秀
090711
昭平
090711
上思
090712
马山
090802
金秀
091118
马山
091210
昭平
091215
上思
091221
金秀
平均值
RSD
/%
1 0. 486 2 0. 712 9 4. 922 6 0. 633 6 1. 207 7 1. 333 0 0. 329 1 0. 377 8 0. 286 3 0. 767 1 1. 105 6 125. 4
2 0. 035 3 0. 047 4 0. 350 6 0. 031 9 0. 058 7 0. 077 1 0. 022 1 0. 026 5 0. 017 8 0. 051 0 0. 071 8 138. 7
3 0. 031 6 0. 028 1 0. 102 9 0. 048 8 0. 050 5 0. 037 1 0. 051 6 0. 044 1 0. 026 7 0. 044 5 0. 046 6 46. 8
4 0. 017 2 0. 018 7 0. 025 7 0. 018 7 0. 024 2 0. 021 8 0. 024 1 0. 022 5 0. 011 2 0. 013 5 0. 019 8 24. 2
5 0. 041 3 0. 039 6 0. 066 5 0. 046 1 0. 040 5 0. 041 8 0. 056 1 0. 055 8 0. 028 2 0. 031 6 0. 044 8 26. 2
6 0. 170 9 0. 260 8 0. 507 5 0. 221 3 0. 070 4 0. 232 2 0. 135 0 0. 186 1 0. 042 1 0. 178 8 0. 200 5 63. 8
7 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 0. 00
8 0. 062 1 0. 076 6 0. 086 9 0. 049 6 0. 057 4 0. 064 7 0. 060 4 0. 045 5 0. 028 8 0. 055 0 0. 058 7 27. 4
图 3 10 批亮叶杨桐叶药材指纹图谱 (时间窗:0. 8)
3 讨论
3. 1 提取溶剂的选择 取同样量的亮叶杨桐叶药
材分别采用 50%甲醇超声提取、甲醇超声提取、水
超声后过滤提取，微孔滤膜过滤直接进样。结果表
明，50%甲醇超声提取，色谱峰数适中，主要成分分
离较好。
3. 2 梯度洗脱条件的选择 参考 2005 年版《中国
药典》一部有关槲皮苷含量测定项下流动相，采用乙
腈-0. 1%磷酸系统进行洗脱效果最佳。试验结果表
明:等度洗脱，色谱峰重叠严重，分离效果不好。由
于成分复杂，为保证尽可能多峰且分离效果好，采用
了梯度洗脱，梯度洗脱的色谱峰形及分离较好，可比
较全面的反映亮叶杨桐叶的各化学成分。
3. 3 相似度分析 广西 4 个区域 10 批亮叶杨桐叶
的相似度很好，品质基本一致。本实验对亮叶杨桐
叶药材指纹图谱的构建进行的初步探索，可以为亮
叶杨桐叶药材的品质评价、质量控制提供检测方法。
［参考文献］
［1］ Chen M Z，Yu J，She G Z，et al. Analysis of nutritional
components and medicinal components in wild Shi Ya Cha
［J］. Nat Prod Res Deve，1996，8:85.
［2］ 刘本国，战宇，许克勇，等，液质联用鉴定亮叶杨桐叶中
的类黄酮化合物［J］. 食品研究与开发，2007，28
(3):118.
［3］ 王英，叶文才，殷志琦，等，亮叶杨桐的三萜皂苷类成分
［J］.药学学报，2008，43(5):504.
［责任编辑 蔡仲德］
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刘元，等:亮叶杨桐指纹图谱研究