全 文 :2013年 8月第 30卷第 8期
Aug. 2013,Vol.30 No.8
天 津 中 医 药
Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine
纤花线纹香茶菜和溪黄草水提物
的 抗 炎 作 用 比 较 研 究 *
匡艳辉,林 青,黄 琳,利 幼,王德勤
(广州白云山和记黄埔中药有限公司中药研究院,广州 510515)
摘要:[目的]观察对比纤花线纹香茶菜和溪黄草属植物溪黄草水提物的抗炎作用。[方法]取 SPF级昆明种小鼠
随机分为模型对照组、阳性药物组[阿司匹林(0. 2 g/kg)]、纤花线纹香茶菜水提物组(2.57、1.28、0. 64 g/kg)、溪黄草水
提物组(2.67、1.33、0. 67 g/kg)。每天 1次,连续灌胃给药 5 d。末次给药后约 1 h选用二甲苯致耳肿胀、醋酸致腹腔炎症
方法观察抗炎作用。[结果]纤花线纹香茶菜水提物能明显降低二甲苯致耳肿胀度和抑制醋酸致腹腔毛细血管通透性
增高,而溪黄草水提物未见明显影响二甲苯致小鼠耳肿胀度,在抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高时,其抗炎
活性也明显低于纤花线纹香茶菜水提物。[结论]纤花线纹香茶菜水提物的抗炎作用强于溪黄草水提物。
关键词:纤花线纹香茶菜;溪黄草;抗炎
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1672-1519(2013)08-0495-04
*基金项目:国家科技重大专项项目(Z009ZX09308)。
作者简介:匡艳辉(1984-),女,硕士,从事中药质量标准研究
工作。
通讯作者:林 青,E-mail:linqinglore@sohu.com。
溪黄草是成药消炎利胆片处方中的一味重要
中药,是预防和治疗肝病及消化系统疾病的常用药
物,已有很长的使用历史。但是溪黄草的来源复杂,
同名异物,品种混乱[1]。为考察溪黄草习用品种纤花
线纹香茶菜(俗称甜草)和溪黄草(俗称苦草)水提
物的抗炎效果,本研究对比观察了两种水提物对小
鼠耳肿胀和腹腔毛细血管通透性两种病理性炎症
反应的作用,探讨两种水提物的抗炎作用和作用差
异,以期为溪黄草资源研究与开发利用提供参考。
1 材料
1.1 药品和试剂 纤花线纹香茶菜及溪黄草药材
由白云山和记黄埔中药有限公司 GAP基地提供,经
中国科学院华南植物园叶华谷教授鉴定为纤花线
纹香茶菜 [Isodon lophanthoides(Buch.-Ham. ex D.
Don)Hara var. graciliflora(Benth.)] 及溪黄草[Rab-
dosia serra(Maxim.)H. Hara]。
实验共设 8组,为模型对照组,阳性对照组(阿
司匹林组),纤花线纹香茶菜水提物高、中、低剂量
组,溪黄草水提物高、中、低剂量组。每组 12只小
鼠。阿司匹林剂量为 200 mg/kg。纤花线纹香茶菜水
提物和溪黄草水提物高、中、低剂量组剂量均为生
药 8、4、2 g/kg,按等效剂量法折算约相当于成人临
床每日拟用量的 4、2、1倍。
纤花线纹香茶菜及溪黄草(自制)流膏:按中国
药典 2010版一部消炎利胆片项下[2],纤花线纹香茶
菜或溪黄草加水煎煮 2次,煎液合并,浓缩至相对
密度 1.20~1.25(55~60 ℃),加 5 倍量 70%乙醇,搅
匀,静置 24 h,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至适量,
备用。
纤花线纹香茶菜水提物高剂量(生药 2.57 g/kg,
8.0 g/kg):称取水提纤花线纹香茶菜浸膏若干,加
0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)若干毫升配制成浓
度为 128.5 g/L的药液,现配现用。
纤花线纹香茶菜水提物中剂量(生药 1.28 g/kg,
4.0 g/kg):同上法,制成浓度为 64.0 g/L的药液。
纤花线纹香茶菜水提物低剂量(生药 0.64 g/kg,
2.0 g/kg):同上法,制成浓度为 32.1 g/L的药液。
溪黄草水提物高剂量(生药 2.67 g/kg,8.0 g/kg):
称取水提溪黄草(苦草)浸膏若干,加 0.5%CMC-Na
若干毫升配制成浓度为 133.3 g/L的药液,现配现用。
溪黄草水提物中剂量(生药 1.33 g/kg,4.0 g/kg):
同上法,制成浓度为 66.7 g/L的药液。
溪黄草水提物低剂量(生药 0.67 g/kg,2.0 g/kg):
同上法,制成浓度为 33.3 g/L的药液。
阴性对照品:称取 CMC-Na若干,加超纯水若
干,充分溶解后配制成浓度为 0.5%CMC-Na。
阳性对照品:阿司匹林肠溶片,生产厂家,拜耳
医药保健有限公司,100 mg/片,批号:BJ03249,有效
DOI:10.11656/j.issn.1672-1519.2013.08.18
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期至 2016年 03月 07日。配制方法:取阿司匹林肠
溶片若干,加 0.5%CMC-Na适量研磨,配制成浓度
为 20 g/L的混悬液,现用现配。
冰醋酸(批号:200303032,广州化学试剂厂)、
伊文思蓝[规格:每瓶 10 g,进口分装,中国医药(集
团)上海化学试剂公司]、氯化钠注射液(批号 11042701,
东莞市普济药物有限公司)、其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器 电子分析天平(型号 BS224S、BL3100、
BS400S-WE1,德国赛多利斯生产)、耳肿打耳器
(YLS-Q4,山东省医学科学院设备站)、高速冷冻离
心机(3-18K,美国 Sigma公司)、可见-紫外分光光
度计(722型,上海现科分光生产)。
1.3 动物 SPF级昆明种小鼠,广东省医学实验动
物中心提供,实验动物生产许可证号:SCXK(粤)
2008~0009,实验动物质量合格证号 No.0093817。
2 方法
2.1 小鼠耳廓肿胀实验[3] 选取检疫合格的昆明种
小鼠 96只,随机分为 8组,即模型对照组,阳性对
照组(阿司匹林组),纤花线纹香茶菜水提物高、中、
低剂量组,溪黄草水提物高、中、低剂量组,每组
12 只,全部雄性。分组后各实验组进行灌胃给药,每
天 1次,连续 5 d,模型对照组给予等容积的 0.5%
CMC-Na。阿司匹林组仅末期给药 1次,其余时间给
予 0.5%CMC-Na。给药期间动物每 2天称量 1次体
质量。末次给药后各实验组立刻于各鼠右耳廓涂二
甲苯(0.03 mL/只)致耳廓肿胀,左耳作对照。120 min
后脱颈椎处死小鼠,用直径 8 mm的打孔器将双耳
同部位等面积切下,用精密电子天平称质量,左、右
耳片质量之差即为肿胀度。
肿胀率 = (左耳耳片质量 -右耳耳片质量) /右
耳耳片质量 × 100%
2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性实验[4] 选取检疫合
格的昆明种小鼠 96只,按照随机数字表法分为 8组,
即模型对照组,阳性对照组(阿司匹林组),纤花线
纹香茶菜水提物高、中、低剂量组,溪黄草水提物、
高、中、低剂量组,每组 12只,雌雄各半。分组后各
实验组进行灌胃给药,每天 1次,连续 5 d,模型组
给予等容积的 0.5%CMC-Na。阿司匹林组仅末期给
药 1次,其余时间给予 0.5%CMC-Na。给药期间动
物每 2 d称量 1次体质量。末次给药后约 1 h各实
验组动物均静脉注射 0.5%伊文思蓝生理盐水溶液
10 mL/kg,注射完伊文思蓝后每鼠立即腹腔注射
0.7%冰醋酸 10 mL/kg进行致炎,20 min后脱颈椎处
死动物。腹腔内注入生理盐水 5 mL,轻揉小鼠腹部,
以使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀,
然后开腹,倾出洗涤液,将洗涤液加入刻度离心管,
以 3 000 r/min 离心 15 min,取上清液,用紫外分光
光度计于波长 590 nm处比色吸光度 A值,比较各
组间吸光度值的差异,通过考察伊文思蓝的渗出量
来反映各受试物的抗炎作用。
2.3 统计分析 本实验计量资料均用均数±标准差
(x±s)表示,各实验组进行组间比较之前先进行组
间方差分析(F-test),当组间方差齐同时,组间比较
采用 Student-检验(非配对的 T检验)进行统计,组
间方差不齐时,采用校正的 Student-T检验进行统
计分析。P<0.05有统计学意义。
3 结果
3.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 本课题研
究结果表明,模型组小鼠右耳质量明显大于左耳,
表明二甲苯致耳肿胀模型造模成功。与模型组相
比,阿司匹林组能明显降低小鼠右耳的肿胀度,差
别具有统计学意义(P<0.01);溪黄草水提物各剂量
组对小鼠右耳肿胀度均未见明显影响,无统计学意
义(P>0.05);纤花线纹香茶菜水提物各剂量组均能
明显降低小鼠右耳的肿胀度,差别均具有统计学意
义(P<0.05或 0.01),表明水提纤花线纹香茶菜的抗
炎作用强于水提溪黄草,水提纤花线纹香茶菜为抗
炎优势提取工艺。见表 1。
3.2 对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
模型对照组小鼠腹腔清洗液 OD值明显升高,表明
冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强模型造模
成功。与模型对照组相比,阿司匹林组小鼠腹腔清
洗液 OD值明显降低,差别具有统计学意义(P<
0.01)。溪黄草水提物中、高剂量组、纤花线纹香茶菜
水提物各剂量组均能明显降低小鼠腹腔清洗液的
OD值,并具有良好的量—效关系,但水提溪黄草低
剂量组小鼠腹腔清洗液 OD值没有差别,无统计学
意义(P>0.05),表明水提溪黄草和水提纤花线纹香
茶菜提取物均具有一定的抗炎活性,但水提纤花线
纹香茶菜的抗炎作用更强。见表 2。
4 讨论
在本研究条件下,纤花线纹香茶菜水提物在剂
量为生药 8、4、2 g/kg(按体表面积等效剂量法折算
相当于成人日用量的 4、2、1倍)时对二甲苯致小鼠
耳廓肿胀模型具有明显的抑制作用;溪黄草水提物
在剂量为生药 8、4、2 g/kg(按体表面积等效剂量法
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表 1 纤花线纹香茶菜与溪黄草水提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x±s,n=12)
Tab.1 Effects of Isodonis Lophanthoidis var. graciliflora and Rabdosia serra extracts on the auricular swelling induced by
xylene(x±s,n=12)
组别
剂量
(生药 g/kg)
体质量(g) 左耳质量
(mg)
右耳质量
(mg)
右耳肿胀度
(mg)第 1 天 第 3 天 第 5 天
模型对照组 — 21.8±2.4 25.6±1.6 29.1±1.8 12.4±0.8 28.0±2.9 15.6±3.0
阿司匹林组 — 21.1±1.3 25.5±1.6 29.0±1.9 13.0±1.0 21.1±1.7** 08.2±1.7**
纤花线纹香茶菜低剂量组 2 21.0±1.3 25.0±1.2 28.5±1.5 13.5±0.7 25.3±4.8 11.8±5.1*
纤花线纹香茶菜中剂量组 4 21.1±1.4 24.6±1.7 27.4±2.6 12.8±1.2 22.4±5.1 09.6±5.7**
纤花线纹香茶菜高剂量组 8 21.0±1.2 25.1±1.7 28.7±2.4 12.9±1.3 24.3±5.3 11.4±4.5*
溪黄草低剂量组 2 21.0±1.5 24.9±1.9 28.4±2.0 12.8±0.9 25.2±4.9 12.5±4.7
溪黄草中剂量组 4 21.0±1.4 25.1±2.2 28.5±2.5 13.1±0.9 26.9±5.1 13.8±4.5
溪黄草高剂量组 8 21.0±1.4 24.8±1.5 28.3±1.7 13.2±0.8 29.0±4.0 15.8±3.7
注:与模型对照组相比,*表示 P<0.05,**表示 P<0.01。
表 2 纤花线纹香茶菜与溪黄草水提物对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增强的影响(x±s,n=12)
Tab.2 Effects of Isodonis Lophanthoidis var. graciliflora and Rabdosia serra extracts on the increased permeability of blood
capillary induced by acetic acid(x±s,n=12)
组别
剂量
(生药 g/kg)
体质量(g) 左耳质量
(mg)第 1 天 第 3 天 第 5 天
模型对照组 — 21.9±1.2 25.9±1.8 27.4±2.2 0.757±0.189
阿司匹林组 — 22.0±1.3 26.5±2.0 28.3±2.4 0.318±0.122**
纤花线纹香茶菜低剂量组 2 21.9±1.4 25.7±2.0 27.0±2.0 0.542±0.200*
纤花线纹香茶菜中剂量组 4 22.0±1.2 25.5±1.9 27.0±2.6 0.531±0.106**
纤花线纹香茶菜高剂量组 8 22.1±1.3 25.6±1.1 27.1±1.5 0.469±0.145**
溪黄草低剂量组 2 22.0±1.4 25.8±1.9 27.2±2.6 0.516±0.089
溪黄草中剂量组 4 21.9±1.5 25.4±1.9 28.8±1.8 0.631±0.293*
溪黄草高剂量组 8 22.1±1.1 25.2±2.0 26.8±2.6 0.524±0.244*
注:与模型对照组相比,*表示 P<0.05,**表示 P<0.01。
折算相当于成人日用量的 4、2倍)时对二甲苯致小
鼠耳廓肿胀模型未见明显影响。根据其降低小鼠耳
肿胀度的作用可判断:等剂量的纤花线纹香茶菜水
提物抗炎作用强于溪黄草水提物。
在本研究条件下,纤花线纹香茶菜水提物在剂
量为生药 8、4、2 g/kg(按体表面积等效剂量法折算
相当于成人日用量的 4、2、1倍)时对冰醋酸导致的
小鼠腹腔毛细血管通透性增强模型具有明显的抑
制作用,并具有一定的量效关系。溪黄草水提物生
药 8、4 g/kg(按体表面积等效剂量法折算相当于成
人日用量的 4、2倍)时对冰醋酸导致的小鼠腹腔毛
细血管通透性增强模型具有明显的抑制作用,并具
有一定的量效关系,但在剂量为 2 g生药时对冰醋
酸导致的小鼠腹腔毛细血管通透性增强模型未见
明显影响。根据各样品对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血
管通透性增强模型的影响,等剂量的纤花线纹香茶
菜水提物抗炎作用强于溪黄草水提物。
溪黄草的用途近年来不断拓宽,然而其来源一
直很复杂,地方标准不尽一致,造成了其药材在商
品流通领域混乱的严重现象。溪黄草主要药材来源
一直颇有争议,《广东省中药材标准》第 2册[5]将溪
黄草[Rabdosia serra(Maxim.)H. Hara]与线纹香茶菜
[Rabdosia lophanthoides(Buch. -Ham . ex D. Don)H.
Hara] 及其变种纤花香茶菜 [Rabdosia lophanthoide
(Buch. -Ham. ex D. Don)Hara var. graciliflora(Benth.)
H. Hara]均收录为正品来源,而化合物研究中发现两
者植物形态、化学成分差异明显,许多学者对其能
否同等使用表示质疑[6-10]。本研究对多来源的溪黄草
药材在药理方面进行品种整理比较,用实验数据说
明,纤花线纹香茶菜水提物的抗炎作用明显强于溪
黄草水提物,水提纤花线纹香茶菜具有更强的抗炎
活性。据文献报道,纤花线纹香茶菜和溪黄草在来
源、植物形态和化学成分方面均有较大差别,为保
证其安全与疗效,溪黄草及其制剂应使用纤花线纹
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香茶菜(甜草)为原料,不提倡使用混淆品种溪黄草
(苦草),这样才能明确和建立相应的质量标准,规
范临床使用。
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纹香茶菜细花变种的外观形态比较 [J].今日药学, 2012, 22(1):
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(收稿日期:2013-03-28)
Comparative study of anti-inflammatory effects between extracts of Isodonis Lophanthoidis var. graciliflora and Rabdosia serra
KUANG Yan-hui, LIN Qing, HUANG Lin, LI You, WANG De-qin
(Institute of Chinese Medicine,Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Co., Ltd., Guangzhou 510515, China)
Abstract: [Objective] To study and compare the anti-inflammatory effects of extracts from Isodonis Lophanthoidis var. graciliflora and
Rabdosia serra. [Methods] SPF Kunming mice were divided into model group,aspirin group(0.2 g/kg),Isodonis Lophanthoidis var. gracil-
iflora water extract group (2.57,1.28,0. 64 g/kg) group and Rabdosia serra extract (2.67,1.33,0. 67 g/kg) groups.Each drug was adminis-
trated to mice orally once a day for 5 days.1 h after the last administration, the anti-inflammatory effects were observed by methods of xy-
lene-induced auricular swelling and acetic acid-induced peritoneal inflammation, respectively. [Results] The water extract of Isodonis
Lophanthoidis var. graciliflora could markedly decrease xylene-induced auricular swelling and inhibit acetic-acid induced increasing of
permeability in peritoneal capillary in mice. But Rabdosia serra extract had no marked anti-inflammatory effects in decreasing the
swelling of ear, and had less anti-inflammatory effects to decrease the increasing of the permeability of peritoneal capillary in less degree
than Isodonis Lophanthoidis var. graciliflora extract. [Conclusion] The water extract of Isodonis Lophanthoidis var. graciliflora has
stronger anti-inflammatory activities than Rabdosia serra extract does.
Key words:Isodonis Lophanthoidis var. graciliflor; Rabdosia serra; anti-inflammatory
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