全 文 ：高速逆流色谱分离青叶胆中的生物碱
Z I M
字　敏 , 袁黎明 , 刘　频 , 艾　萍 , 陈业高
(云南师范大学 化学化工学院 , 云南 昆明 650092)
摘　要:　以氯仿∶甲醇∶NaH2PO 4缓冲溶液(pH 值 4.8)3∶2.5∶1 为溶剂系统 , 上相为固定相 , 下相为流动相 ,从红河
青叶胆生物碱中分得 5 个成分 ,其中 3 个成分与碘化铋钾试剂反应显桔红色 ,还用硅胶薄层板验证了分离效
果 ,并用光谱法证实了其中一个生物碱为龙胆碱 ,含量 30%。
关键词:　生物碱;青叶胆;高速逆流色谱
中图分类号:O657.7　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:0253-2417(2002)01-0074-03
高速逆流色谱(high speed countercurrent chromatography ,简称 HSCCC),具有两大突出优点:(1)线
圈中固定相不需要载体 ,因而清除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象;(2)特别适用于制备
性的分离 ,每次进样体积较大 ,进样量也较多 。
云南獐牙菜又称青叶胆(Swert ia yunnanensis),为龙胆科獐牙菜属植物 ,产地红河。该属植物资源
丰富 ,药用价值较高 ,所以在研究与应用方面都占有很重要的地位[ 1 〗。民间用于治疗急性病毒性肝
炎 、温热黄疸 、食欲不振 、尿路感染 、带状疱疹等。龙胆宁碱(gentianine)、次龙胆碱(gentianadine)、龙胆
黄碱(gentiofavine)是青叶胆中的有效成分 ,具有抗炎 、解毒 、降压以及调节中枢神经等作用[ 2] 。字敏等
从青叶胆中提取 酮苷和内酯类化合物[ 3] 。本研究采用高速逆流色谱对红河青叶胆中总生物碱进行
分离 ,一次进样 20 mg ,得到了 3种生物碱。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
GSIOAZ 型高速逆流色谱仪;NS-1007PUMP单活塞往复恒流泵;8823A-UV 紫外检测器(均为北京
新技术研究所研制)。所用样品青叶胆采自云南省红河洲。层析用硅胶 、硅胶 G均系青岛海洋化工厂
出品 。
1.2　样品预处理
取青叶胆全草粗粉 1 kg ,用 95%的乙醇冷浸 48 h ,减压回收乙醇 ,得黄褐色浸膏 。加 2%的盐酸到
上述浸膏中 ,充分搅拌后放入冰箱中放置过夜 。随后常压过滤。用氯仿萃取稀酸溶液 ,弃掉氯仿层 。再
用氨水溶液调节 pH值 9.6 ,再用氯仿萃取此水溶液 ,弃掉水层 ,蒸发溶剂 ,得黄褐色固体 ,即青叶胆总生
物碱[ 4] 。
1.3　HSCCC溶剂系统及分离操作
溶剂系统为氯仿∶甲醇∶NaH2PO3缓冲液(3∶2.5∶1),上相为固定相 ,下相为移动相 。每次取总生物碱 20
收稿日期:2001-06-14
　基金项目:云南省教委基金资助项目(9842062)
　作者简介:字 敏(1963-),女(白族),云南昆明人 ,副教授 , 硕士生 ,从事天然产物化学研究。
第 22卷第 1期
2002 年 3 月
林　产　化　学　与　工　业
Chemistry and Indust ry of Forest Products
Vol.22 No.1
Mar.2002
mg ,溶于 2 mL的溶剂系统(上相下相各 1 mL),用注射器一次进样 ,流动相流速 2.00 mL/min ,仪器转
速 800 r/min ,检测器波长 254 nm ,记录仪灵敏度范围 1 A(吸光度),量程 50 mV ,纸速 4 mm/min[ 5] 。
2　结果与讨论
本方法的最大优点是每次进样量大 ,但分离的关键是溶剂系统的选择和优化 ,而且溶剂系统在静止
时要求能明显地分成两相 ,样品在两相中要有合适的分配系数值 ,并且固定相能实现较高的保留。为了
达到很好的分离效果 ,作者用硅胶薄层色谱将各种溶剂系统对青叶胆中生物碱的影响进行了初选 ,根据
薄层层析的分离结果 ,再用高速逆流色谱进一步对初选的溶剂系统进行测试 ,最后得到满意的溶剂系统
氯仿∶甲醇∶NaH2PO3缓冲液(3∶2.5∶1)。
用注射器一次进样 20 mg ,开始流出移动相 ,接着在色谱图上出现了分离较好的 5 个峰(图 1)所
示。按照图示在每个色谱峰的最大值处收集一定量的分离物。将所收集的各个组分在硅胶薄层板上点
样 ,用溶剂系统展开 ,以碘化铋钾显色。结果各组分在硅胶板上皆显一个单色谱点 ,而且均显橘红色。
图 1　pH值 4.8 时 HSCCC谱图
Fig.1　HSCCC chromatog ram at pH value 4.8
图 2　生物碱的 TLC谱图
Fig.2　T LC chromatog rams of alkaloid
　　最后将收集到的峰 2进行光谱分析 ,结果如下:红外光谱 , νKBrmaxcm-1:1727 ,1628 , 1590 , 1564;1478 ,
1125 ,1045 。质谱 m/ e:175(M+),147 ,130 ,117 ,103 ,90 ,76 , 63 ,50 ,39(基峰)。由此可以证实该碱为龙
胆碱 ,分子式为 C10H9NO2 ,分子质量为 175。
HSCCC是一种较新的分离技术 ,它对天然产物的有效分离和制备具有很大的优势 ,特别是对进样
量较大的样品具有独特的优点 。从红河青叶胆的总生物碱中分得 5个成分 ,其中 3个成分与碘化铋钾
试剂反应显桔红色 ,还用硅胶薄层板验证了分离效果 ,并用光谱法证实了其中一个生物碱为龙胆碱 ,含
量 30%。
随着分离技术的不断完善 ,高速逆流色谱将成为分离领域中的一种新颖有效的手段[ 6] 。
参考文献:
[ 1] 宋万志.中国龙胆科药用植物概况[ J] .中药通报 , 1986 , 11(11):3.
[ 2] PURUSOTAM B S , et al.Bellidifolin:a potent hypoglycemic agent in sereptozotocin(STZ)included diabetic bats from S wer-
tia japonica[ J] .Planta Med , 1994 , 60:507.
[ 3] 字 敏 , 罗 钫 , 辛晓燕 ,等.獐牙菜属药用植物化学成分研究[ J] .林产化学与工业 , 2000 , 20(3):85-87.
[ 4] 何仁远 , 聂瑞麟.青叶胆植物中苦味甙的研究[ J] .云南植物研究 , 1980 , 2(4):480.
[ 5] SANDLIN J , BOWERS G.High-speed preparative countercurrent chromatography w ith a coil plant centrifuge[ J] .J Chro-
ma tog r , 1984 , 7(4):244.
[ 6] 袁黎明 , 傅若农 ,张天佑.高速逆流色谱分离苦参中的生物碱[ J] .北京理工大学学报 , 1997 , 17(2):244.
第 1 期 字　敏 ,等:高速逆流色谱分离青叶胆中的生物碱 75　
SEPARATION OF ALKALOIDS FROM S WER TIA YUNNANENS IS
BY HIGH-SPEED COUNTERCURRENT CHROMATOGRAPHY
ZI Min , YUAN Li-ming , LIU Pin , AI Ping , CHEN Ye-gao
(School of Chemistry and Chem ical Engineering , Y unnan Normal University , Kunming 650092 , China)
Abstract:Alkaloids from S wertia yunnanensis were isola ted successfully by high speed countercur rent chromatography with the
two phase solvent system CHCl3∶CH3OH∶NaH2PO 4(pH 4.8)3∶2.5∶1 to obtain 5 components , in which 3 components exhibited
o range-red color with bismuth po tassium iodide reagent.Results were verified by TLC and five components were isola ted pure.
One was characterized as gentianine(30%)by spectroscopic analysis.
Key words:alkaloid;Swertia yunnanensis;high-speed countercurrent chromatography
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