全 文 ：文章编号:1008-9926(2006)02-0153-03　　中图分类号:R965　　文献标识码:A
狼毒大戟提取物不同组分对结核杆菌抑制作用的比较
李秀青① ,陈珊珊 ,刘锁兰② ,李洪敏③
(①中国人民解放军第307医院　药剂科　北京　100071;②中国人民解放军总医院　中医科　北京　100850;③中国人民解放
军总医院第二附属医院　结核科　北京　100029)
摘　要:目的　比较狼毒大戟根不同提取物对结核杆菌的体外抑菌效果。方法　根据狼毒大戟根化合物的极性 , 采用系统分
离法对其进行提取 ,得到 11 种狼毒大戟根分离组分 , 采用改良 7H10琼脂培养基 22 倍稀释法进行结核杆菌培养 ,共 2 周 ,动态
观察对结核杆菌的抑制作用。结果　狼毒大戟提取物不同组分对结核杆菌均有程度不同的抑制作用 ,乙酸乙酯热提 、乙醚冷
提组分抑菌作用最强。结论　狼毒大戟根不同提取部分对结核杆菌有较明显的抑制作用 , 选择合适的提取方法分离其有效
成分 ,制备成相应的制剂 , 对结核病的治疗有一定的应用前景。
关键词:狼毒大戟;提取物;结核杆菌
The Inhibiting Effects of Euphorbia Fischeriana on Tuberculous Bacillus
LI Xiu-Qing① ,CHEN Shan-Shan , LIU Suo-Lan② ,LI Hong-Min③
(①Department of Pharmacy ,307th Hospital PLA ,Beijing　100071　China)
(②Department of Pharmacology ,Chinese People s Liberation Army General Hospital , Beijing　100039　China)
(③Deparement of Tuberculosis ,The Second Subsidiary Hospital of PLA General Hospital ,Beijing　100029　China)
ABSTRACT:Aim To compare the inhibiting effects of different extractions of root of Euphorbia fischeriana on tuberculo-
sis bacillus in vitro.Methods Eleven components were isolated from Euphorbia fischeriana using systematic extraction , ac-
cording to their polarity.Tuberculosis bacillus was cultured in improved 7H10 agarMedium by the two-fold dilution method
for two weeks , and was observed all the time.ResultsAll extractions tested had antibacterial activity on tuberculosis bacil-
lus ,but to different extents.Hot ethyl acetate extraction and cold ethyl ether extraction were most effective.Conclusions
The extraction from different parts of Euphorbia fischeriana can inhibit tuberculosis bacillus effectively.Effective compo-
nents from Euphorbia fischeriana could the separated by different extraction methods , offering a good prospect for curing
the tuberculosis bacillus.
KEYWORDS:Euphorbia fischeriana;Extraction;Tuberculosis bacillus
　　药用狼毒的来源主要有瑞香科植物瑞香狼毒
(Stellerae chamaejasm)和大戟科植物狼毒大戟(Eu-
phorbia fischeriama Steud .)、月腺大戟(Euphorbia e-
bracteolata Hayata)3种植物 。药用部位根 ,性味苦 、
辛 、平 、有毒。有逐水去痰 ,破积杀虫等功效 。中药
狼毒用于抗结核的治疗具有悠久的历史 ,早在《神农
本草经》中就有记载 。近年来 ,中药狼毒治疗结核病
在临床实践中取得一定进展。对狼毒类药材的药理
研究也有新的突破 ,赵奎君[ 1 、2] 等人曾对狼毒类中
药的 3个主流品种抗结核活性作了比较 ,证明狼毒
大戟效果最强。前人对狼毒大戟的化学成分和抗肿
瘤活性的研究报道较多。对其抗结核的活性研究较
少。为了进一步探明狼毒大戟中具有抑制结核杆菌
作用的有效成分 ,为开发新药和临床应用提供较为
可靠的参考依据 ,我们对狼毒大戟进行了体外抑制
结核杆菌作用观察[ 3、4] 。
我们采用系统溶剂提取法 ,收集不同提取组分 ,
初步观察了狼毒大戟对结核杆菌的体外作用活性 ,
结果报告如下。
1　实验材料
1.1　药材　狼毒大戟[大戟科植物狼毒大戟的干燥
根 。经原解放军军医学院药学系赵奎君主任鉴定 ,
(Euphoribia fischeriana steud),产地为辽宁] 。
1.2　标准菌株及菌液制备　H37RV标准株(北京结
核病研究所提供)。
·153·　解放军药学学报　第 22卷第 2期　　狼毒大戟提取物不同组分对结核杆菌抑制作用的比较　　　　　　李秀青　　
① 作者简介:李秀青(1966-),女 ,安徽萧县人 ,主管药师。研究方向:临床药学。Tel:(010)66947173
1.3　改良 7H10琼脂培养基(解放军总医院第二附属
医院结核科临床药理实验室配制)。
1.4　狼毒大戟根各组分提取方法及供试品的制备
(1)狼毒大戟根各组分提取方法　为进一步摸索不
同提取部位的抑菌效果 ,分别采用了冷提法:狼毒大
戟根粗粉 ,80%乙醇渗漉 ,回收乙醇 ,得乙醇提取物
浸膏 。加水稀释后 ,分别以石油醚 、乙醚 、乙酸乙酯
和正丁醇萃取 ,得到石油醚冷提物 、乙醚冷提物 、乙
酸乙酯冷提物 、正丁醇冷提物和水冷提物 ,浓缩为浸
膏;另外采用热提法制备供试液:狼毒大戟根粗粉 ,
石油醚加热回流提取 ,得石油醚提取部分 ,残渣再依
次以乙醚 、乙酸乙酯 、正丁醇 、80%乙醇和水回流提
取 ,得石油醚热提物 、乙醚热提物 、乙酸乙酯热提物 、
正丁醇热提物 、水热提物和乙醇热提物 ,浓缩为浸膏
备用 。
(2)供试品的制备　取上述方法提取的 11个组
分的提取物浸膏 ,以少量的吐温-80(<2%浓度)助
溶 ,加重蒸馏水配制成相当于含生药量为3.2g·ml-1
浓度的溶液 。然后 ,取 0.5ml此浓度的溶液 ,加相同
的溶剂到1ml ,稀释成含生药量为 1.6g ·ml-1浓度的
溶液。以此类推 ,采用 2倍稀释法 ,分别由高到低制
成每毫升含生药 3.2 、1.6 、0.8 、0.4 、0.2g 的 5个浓度
的样品 ,备用 。
2　方法与结果
2.1　培养基的制备　分别取上述稀释好的供试液
各 0.5ml ,加入改良 7H10琼脂培养基 6.5ml ,充分混
合均匀 ,每个浓度制备 2个试管 ,另以仅含 2%吐温-
80的纯培养基为空白对照 。以 8磅/20min 灭菌备
用 。
2.2　方法　在无菌条件下往上述培养基中接种结
核菌液 ,每管接种量为 10-3mg ,按照中国防痨协会
操作程序 ,于培养箱中 37℃培养 ,动态观察菌落生
长情况 ,连续观察两周 。结果见表1 。
表 1　狼毒大戟不同提取物对结核杆菌抑制作用比较
Tab 1　Comparason of the Inhibitory Effects against Tuberculosis Bacillus of different Extracts of the Roots of Euphorbia fischeriana
提取组分 第 1周各浓度组抑菌作用(生药 g·ml-1) 第 2周各浓度组抑菌作用(生药 g·ml-1)
空白 0.2 0.4 0.8 1.6 3.2 空白 0.2 0.4 0.8 1.6 3.2
石油醚冷提物 + +
石油醚热提物 + - - +
乙醚冷提物 + - - - + + +
乙醚热提物 + - - - +
乙酸乙酯冷提物 +
乙酸乙酯热提物 - - - - + + +
正丁醇冷提物 + - - -
正丁醇热提物 + + + + +
水冷提物 + + + +
水热提物 + + - - - +
乙醇热提物 + + + +
　　注:判断标准:以 2次实验综合结果为准 ,结果不一致者按“ +”计。“ -”未见菌落增长;“ +”菌落数 1～ 2个;“ ”菌落数 2～ 6个;“ ”菌落
数 6～ 10个;“ ”菌落数 10个以上或少于 10个但液面有菌膜生长。
2.3　结果　第一周乙酸乙酯热提物除低浓度生药
0.2g·ml-1组外 ,其余各浓度组均无结核杆菌生长;
乙醚冷 、热提取物 、正丁醇冷提物和水热提物四部分
3个高浓度(含生药 3.2 、1.6 、0.8g·ml-1)组 ,也无结
核杆菌生长;石油醚热提物 2 个高浓度(含生药 3.2
和1.6g·ml-1)组 ,无结核杆菌生长 ,以上提取物均表
现了对结核杆菌完全抑制作用。其余提取物低浓度
组与对照组相比较也有较明显的抑菌作用。
第二周结核杆菌有不同程度的生长 ,其中乙酸
乙酯热提物 、乙醚冷提物(生药 0.8 ～ 3.2g·ml-1)3个
浓度组只有 1 ～ 2个菌落 ,与空白对照组比较抑菌作
用明显。其余各组也有不同程度的抑制作用 ,且高
浓度作用强于低浓度 ,但作用较弱 。
以上结果表明狼毒大戟确实有体外抑制结核杆
菌的作用 ,不同提取部位作用强度不同 ,综合指标以
乙酸乙酯热提物效果最强。其次为乙醚冷提物 。而
且抑菌效果具有一定的量效关系 ,高浓度作用强于
低浓度。
3　讨论
3.1　狼毒大戟主要含有树脂 、硬性橡胶 、甾醇 、酚性
成分 、氨基酸 、三萜类及有毒的有机酸等。狼毒从明
代开始使用一直延续至今 ,现代药理研究表明 ,瑞香
狼毒 、月腺狼毒和狼毒大戟 3种狼毒均具有较好的
·154· 　解放军药学学报　2006年 4月　第 22卷　第 2 期　　　Pharm J Chin PLA　Vol 22　 No2　Apr 2006 　　　　　
抗结核活性[ 5、6] 。传统的治疗各种结核的含狼毒的
方剂如治淋巴结结核方 、愈合淋巴结结核伤口方 、治
睾丸结核方及治疗脏腑内一切虫病方等均具有较好
的临床疗效。研究表明 ,狼毒在各种癌症治疗及抗
结核方面具有较好的前景 。曾有人提出狼毒甲 、乙
素及三萜类成分具有抗结核活性。本组实验结果也
证明了狼毒提取物对结核杆菌有一定的抗菌活性 。
3.2　根据狼毒中三萜类成分亲脂性强 ,而一些酚酸
类成分亲水性强的性质 ,我们系统考察了不同的提
取工艺对药效的影响 ,从而为进一步跟踪分离有效
成分提供依据。我们根据实验结果对抑菌作用最强
的乙酸乙酯部分进行了初步的分离 ,确定此类化合
物为芳香类化合物。
3.3　同一提取物组分因浓度的不同抗菌活性存在
着显著的差异 ,随浓度的提高 ,抗菌活性增强 。各组
分的抗菌活性与浓度呈正相关 。
3.4　近年来 ,结核病人对目前临床使用的药物因长
期使用和不合理用药产生严重的耐药现象 ,而且常
用的一线药物对肝 、肾的毒性较大 ,为此 ,寻找和开
发新的抗结核药物是目前临床研究的重要课题 ,狼
毒抗结核活性的研究结果表明 ,将其开发成抗结核
的新药 ,具有很好的前景 。
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(收稿日期:2004-12-13;修回日期:2005-06-16)
(本文编辑　魏　萍)
(上接 126 页)
的连翘苷均应超过 3.5mg·g-1 ,但并未出现这种趋
势。出现的可能原因:(1)萃取过程中连翘苷的丢失
(粘仪器壁上或容于气体中等);(2)萃取条件下连翘
苷被破坏 ,从表 4中可知萃取温度 、分离温度对连翘
苷含量有显著影响 ,故可能会在实验条件下破坏少
量的连翘苷 ,至于确切的原因有待进一步研究 。
4.3　提取物残渣的再利用　因连翘为常用药材 ,连
翘苷具有较强抗菌 、抗病毒等药理活性作用[ 10] ;所
以 ,青翘萃取剩余物或其中富集的连翘苷具有进一
步开发与研究的价值 。
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(收稿日期:2005-05-08;修回日期:2005-07-18)
(本文编辑　梁爱君)
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·155·　解放军药学学报　2006年 4月　第 22卷　第 2 期　　　Pharm J Chin PLA　Vol 22　 No2　Apr 2006