全 文 ：哈尔演医科大举学报 1 9叱年 维 4 亦
狼 毒 抗 肿 瘤 作 用 的 实 验 研 究
2
、 狼毒大戟抗肿瘤活性成分的分离 、 筛选
肿瘤研究所药物室 户本芳 舒 季风 李瑞林 李风云 郭干城 于连海
提要 狠毒大载 B样提取物 , 对 多种可 移植性动物种瘤有显著 的抑制作用 。 经 筛选 找 出杭肿
瘤活性成分 , 为进一步研究工作提供 了条件 。
关键词 狼毒大软 , 杭肿瘤成分分离
狼 毒 大 戟 ( E u p h o r b i a f i s e h e r i a n a 物 : 昆明小 鼠 ; 化学试剂 : 均系 A R 或层析用
S t e u d ) 是大戟科 ( E u p h o r b i a e e a e ) 植物 , 级别 , 紫外分析仪 : 2 5 3 7人上海顾村电光仪器
秋季在大庆地区采集 , 按全国抗肿瘤植物药初 厂 , 紫外分光光度计 U v 一 2 0 0 : 11本岛津 ; 荧
筛样品制备法 ( 草案 ) 制样 、 经可移植性动物 光分光度计 R F一 5 1 0 : 日本岛津 。
肿瘤体内筛选表明 , 狼毒大戟 B 样提取 物 , 实验方法及结果
对实体 肉 瘤 1 80 ( 51 80 ) 、 实体艾 氏 腹 水 一 、 狼毒大找 B样提取 物杭肿瘤成分的分
癌 ( E A C ) 、 大 鼠 瓦 克 癌 2 5 6 ( W 2 5 6 ) 、 离
L “ * is 肺癌等均有显著的抑制作用 (l ) . 民 间 按初筛样品制备规程 ( 草 案 ) (3) , 制 取
用于治疗消化道肿瘤 , 特别是对晚期胃癌治疗 狼毒大戟B样提取物 , 根据该样具有较小极性 /
有较显著的症状缓解 , 并有少数病例肿块缩小 的待点 , 采用中性氧化铝柱层析法分离 , 取得
或消失 ( 2 》 。 为进一步找出抗肿瘤活性 成分 , 较好效果 , 步骤如表 1 。
将狼毒大戟 B 样提取物做柱层分离 , 筛选 、 实 以上柱层分离收集 18 个流分 , 为减少工作
验方法及结果报告如下 . 量 , 便于抗肿瘤筛选 , 将 18 个流分分别取小样
实 脸 材 料 转潜成无水乙醇溶液 , 进行紫外分光法测定 、
狼毒大戟 : 本室在大庆地区采集 ; 实验动 按录大吸农相似者合并 , 各取收集样的 1邝合
E x P e r im e n t a l O b s e r v a t i o n o n t h e E f f e e t o f
’ 3
S e M e t a b o l i s m i n
R a t s F e d o n w h e a t f r o m E n d e m i e D i s t r i e t s o f K e s h a n D i s e a s e
尺云n g B a o a n e公 a l
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.
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.
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m I C 已 t e a s s h o w i n g d i f f e t e n e e s w i t h r e g u l a r p a t t e r n s
.
裹 1狼毒大戟B 样提取物的柱层分离
狼稀大峨B 样提取物
选用 l级氧化 铝桂 , 于法上样川 C H C I: 为洗脱剂洗脱
1 ~ 4 收 集样 {
CH C 。`
、
A c O tE ( 、 : l) 为洗脱剂洗脱
5 ~ 9 收案样
一
}
A Co E t为 洗“ ” “ “兑
1
1 0 ~ 11收集样
-
-
- 一一1* 。 o E t , E t 0 H ( )为洗脱剂洗脱
J一
12 ~ 14 收 集样 E
t O H为洗脱剂 洗脱
比 ~ 17 收集样
l
1 8收集样
{E
` 0 卜` · ” · ` N N a , C O , ( ` ” ) 为洗脱荆
}弃 去
并 、 将 18 个收集样合并成 4 个组分样品 , 即
B一 a ( 1 ~ 4 )
、
B一 b ( 5 ~ 9 )
、
B一 e ( 1 0~
14 )
、
B一 d ( 1 5 ~ 18 )
, 再用旋转燕发器分别
回收有机溶剂 , 并浓缩至浸膏 , 按 1 . 0 %浸膏
量分别制剂 , 供筛选寻找抗肿瘤活性部分 。
二 、 狠毒大戟 B样提取物抗肿瘤活性 成分
筛选
狼毒大戟 B样提取物对 5 1 80 动物肿瘤有显
著的抑制作用 ( ` ) , 采用此方法复筛 B 样的 4
年组分样品 , 经 2 ~ 3 次重复 实 验 , 结 果 :
B一 a 样的平均抑瘤率 5 1 . 2 % 。 经统计学处理
P < 0
.
01
. 结果表明 , 合并的 4 个组分样 品中
B一 a 样有显著的抑瘤作用 .
进一步分离 B一 a 样 . 取 1 ~ 4 收集样 的
1 / 3
, 回收溶剂在氮气流下 浓 缩 至 浸 膏 , 按
0
.
5%浸膏含量制剂 。 将 1 ~ 4 收集样分 别 编
一号B一 a 一1 、 B一 a 一 2 、 B一 a 一 3 、 B一 a 一 4 4 个筛选样
品 , 再次做实验 ( 同前 ) , 结果 B一 a 一 1 的平均
抑瘤率一 8 . 7% , B一 a 一 2的平均抑瘤率 2 3 . 7 % ,
B一 a 一 3的平均抑瘤率 2 1 . 6% , B一 a 一 4 的平均抑
腐 率 5 2 . 6 % , P < 0 . 肠~ 0 . 01 . 结 果 表 明
B一 a 一 4 为狼毒大戟抗肿瘤的活性成分 . 即柱分
离的第 4 号收集样 。 取该样进行薄层 层 析 鉴
定 :
吸附剂 : 中性氧化铝 1 0 ~ 2 0 目 , 1 80 ℃
i占化 3 小时 , 展开剂 : 三氛甲烷 , 展开形式 :
干板上行展开 .
结果 B一 a 一 4的薄层层析分别在 R￡, 。 . 5 0 、
R f二 0 . 17 处各有一个黄色荧光斑点 , 证明含有
两种相似极性的成分 . 按薄层层析条件 , 再次
上柱分离 B一 a 一 4 , 并以薄层层析监测收 集 样
品 , 结果分别得到两个单一成分的祥品如图 1
厂二万;
} }
{* 一
-
}
一 ; : 二黔… _ ! ; {q
} 钻卜十一 R f 二亏云一匕二到 “
二 O
。
, C
二
O
。
1 7
气 己
图 I B· a 一连· 1、 B一 a 一峨一 2薄层层扫f盆晋
将分别收集的两个样品 , 用旋转蒸发器回
收溶剂 , 并在氮气流下浓缩至浸膏 . 按 0 . 5 %
浸膏 含 量 制 剂 , 分 别 编 号 为 B一 a 一 4一 1 、
B一 a 一 4一 2两个样品 . 经 5 18 0动物体内筛选 , 结
果 B一 a 一 4一 1的平均抑瘤率 1 6 . 4% , B一 a 一 4一2 的
平均抑瘤率 4 9 . 3% , P ( 0 . 0 5~ 0 . 0 1。
结果表明 , 狼毒大戟抗肿瘤活性成分为极
性较小的 B一 a 一 4一2单一成分 .
三 、 B一 a 一 4一 2的性状
B一 a 一 4一 2 的真空冷冻干燥品 , 为淡黄色的
疏松无定形固体 . 不溶于水 , 易溶于氯仿 、 苯
等溶剂中 . 在滤纸上点样 , 置于 2 5 3 7入紫外分
析仪下有较 强 的 黄 色 荧 光 , 溶 点 6 0 . 5 生
0
。
7℃ 。
用无水 乙醉 、 环己烷为 溶 剂 分 别 配 制
B一 a 一 4二2 溶液 , 测其吸收曲线 . 吸收光谱如图
,叫味…勺八
( 2 ) ( 3 )
图 Z B一 a一` 一 2乙醉溶 液紫外吸收光 潜
图 3 B一 a一 4一 2环 己烷溶液紫外吸收光讲
( 4 ) ( 5 )
图 4
图 5
荧光光谱 ( Em )入 m a x 3 s 7 n二
橄发光谱 ( Ex )久 m a x 3o s o m
2
、
3
.
参照 1 9 7 5年版中国药典有关吸收系数测定
的规定 , 采用分份称样法 , 准确配 制 B一 a 一 4一 2
乙醇标准溶液 , 在 3 5 o n m 、 2 8 o n m 、 2 4 0 n m处
衰 2
测定吸收度 , 并计算百分吸收系数 , 如表 2 .
B一 a 一4一 2环己烷溶液 , 置 2 5 3 7人紫外分析
仪下观察 , 有淡黄色荧光 , 依此做荧光光谱扫
描如图 4 、 5 。
波 长
(
n n l
)
样品编号 浓 度
(
e
% )
吸收系数
( E {盘)
8
.
5 4
平均吸收 系数
( E }几土 SD ,度ó、产收A护.、吸
3 5 0 0
.
0 2 4 6
0
。
0 2 0 6
0
.
0 2 0 8
0
.
0 2 4 4
2 1 6 8
.
4 9土 0 。 1 3
.
1 7 8
.
1 7 4
0
.
2 0 5
8
.
6 4
8
.
3 7
8
.
4 0
2 8 0 0
.
0 2路6
0
.
0 2 0 6
0
.
0 20 8
0
。
0 2 4 4
0
.
3 8 5
0
。
3 1 4
0
。
3 1 4
0
。
3 7 2
1 5
.
6 5
1 5
.
2 4
1 5
.
1 0
飞5 。 2 4
15
.
3 1士 0 . 2 4
2 4 0 0
.
0 2 4 6
0
.
0 20 6
0
.
0 2 0 8
0
.
0 2 4 4
0
.
5 9 5
0
.
4 9 5
0
.
4 9 5
0
.
5 8 2
2 4
.
19
2 4
.
Q 3
2 3
。
8 0
2 3
.
8 5
24
.
0 Q上 0 . 1 8
讨 论
狼毒大戟抗肿瘤活性成分分离 , 筛选的工
作量很大 , 我们断断续续工作了 2 ~ 3 年 , 瘤
株来源 , 实验鼠源及操作技巧与实验效果都有
重要关系 .
狼毒大戟实验样品是在黑龙江省大庆地区
秋季采集 , 经生物学鉴定为大戟 科 ( E u p h 。一
r b i a e e a e ) 植物 , 狼毒大戟 ( E u p h o r b i a f i s e -
h e r i a n a ) 切片千燥后供实验提取原料 。
从狼毒大戟中分离、 筛选出B一 a 一 4一 2 单一
成分 , 为进一步研究其药理 、 毒理作用提供了
方便条件。
参 考 文 做
( 1 )卢本芳 , 等 . 狼琳抗肿瘤作 用的筛选 , 内部资料待发
表 .
( 2 ) 烟台地区人 民医院肿瘤防治组 . 烟台医药通讯 1 9 7 2 ,
( s ) : 10
.
( 3 ) 全国抗心药物研究协作会议 . 抗肿瘤药物体内筛选规祖
( 草案 ) 1 97 5 : l ~ 1 0 .
( 4 )骨彬 , 等 . 抗店药物啼 选中几个肿瘤模型过敏性的研
究 . 科学通报 1 9 7 5 , 6 : 2 4 2 .
( 6 ) 林启寿 , 等 . 中草药成分化学 . 第一版 . 科学 出版社 .
1 9 77 : 5 28 ~ 5 38
。
( 6 ) 南京药学院主编 . 药物分析 . 第一版 . 人民卫生出版社 ,
1 9 8 1 : 28 2 ~ 3 1 3
.
( 19 5 6年 2 月一7 日收稿 )
6 8
哈尔演医科大学学报 衷9 8 6年 第 4期
人骨髓红系 、 混合系造血祖细胞
无E PO试剂体外培养
二院血液病研究所 吴 占河
红系造血祖细胞 (C U F一E 、 BU F一E ) 及
棍合造血祖细胞 (C FU 一M i x) 培养技术对 于
某些血液病的发病机理的研究 、 造血 细 胞 分
化 、 增殖及调控方面的研究均有理论上和实践
宋 悦 齐笑庸 洪 宝 源
上的意义 (` , .
红系及混合系祖细胞体外培养的集落形成
依赖于红细胞生成素 ( E P O ) 的 存 在 , 在 我
国对 E P O 供应主要依靠进 口 , 且价格昂贵 ,
大大限制了此项研究的开展 . 已有研究资料表
明 , 真性红细胞增多症及再生障碍性贫血患者
血及尿中 E P O活性升高 ( 2 ) . 因此我们选用再
障患者血清并加以处理 , 作为 E P O等刺激因子
劝勺来源 , 培养了人骨髓红系及混合系集落 。 目
前条件下此法的建立 , 对红系等造血祖细胞的
培养具有实用价值 .
材料 和方法
一 、 选 骨健及血象 在正常范围的骨髓液
用 F i e o l l一H y p a q u e 分离液分离和收集单个
核细胞 、 再用培养液冲洗 , 离心后计数 .
二 、 再障血清的处理 所选再障患者一般
以血红蛋白在 3 ~ g6 或近 日内未输过血和初诊
人为好 , 将血清置于低温冰箱内 4 小时后 , 再
真空冷冻 、 干燥 , 制成干粉末 .
三 、 P H A 一 L C M 的制备 取正常人外周
血 , 抗凝后用 F ic ol l一H y p a q u e 分离液收集单
个核细胞 , 加入小牛血清及 R P M l l 6 4 o培养液
于 37 ℃培养 1 小时 , 收集非贴壁细胞再进行培
养 , 加入此种细胞 1 0 “ / m l , 20 %小牛血 清 ,
i % P H A ( 植物血凝素 ) , R P M l l 6 4 o 培 养
液 8 m l , 放在 6 % C O Z 、 37 ℃条件下 培 养 7
天后 , 用 0 . 45 户m 孔径过滤器 过 滤 后 即 为
P H A 二 L C M
.
四 、 培养体 系及方法 加入人骨髓单个核
细 胞 2 x 10 “ / m l , 小 牛 血 清 20 % , P H A -
L C M 20 %
, 再障血清 10 写 , 凝血酶 I U /m l ,
纤维蛋白原 0 . s m g / m l 混匀并凝固后 注入直径
35 m m 培养皿 内 , 在饱和 湿 度 、 5 % C O Z 、
37 ℃条件下培养 .
五 、 集落的观 察 培养 3 ~ 4 天 后 计 数
C F U 一 E 集落 , 1 0 天后计数 C F U 一 M i x ,并用
C u r a t i v e
A n im a l s
E f f e e t o f L a n g d u o n C a r e i n o m a i n t h e
: 2
.
S e P a r a t i o n a n d S e r e e n i n g o f A e t i v e
E x P e r im e n t a l
I n g r e d i e n t o f
t h e A n t i
一
e a r e i n o m a S u b s t a n e e
L
u B e n f a ” 9 e t a l
S e P a r a t i o n
a n d s e r e e n i n g o f a n t i一 e a r e i n o m a a e t i v e i n g r e d i e n t w e r e p r e s e -
n t e d t h i s P
a p e r
.
I t w a s n a m e d B一 a 一 4一 2 a f t e r t h e p r o e e d u r e o f i t s s e p a r a t i o n
a n d r e f i n e nt e 红 t
.
R e s u l t
s s h o w e d t h
a t B一 a 一 4一 2 h a d s i g n i f i e a n t i n h i b i t o r y
e f f e e t s o n e a r e i n o nt a , S i a o
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W
Z 。 。 ,
L
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u n g e a n e e r e t e
.
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