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狼毒大戟的不同提取工艺比较与成分分析



全 文 :狼毒大戟的不同提取工艺比较与成分分析
窦洪举,李 锋,杨宝龙,侯勇跃,哈 斯
(内蒙古农牧业科学院,内蒙古 呼和浩特 010031)
摘要:采用不同提取液、不同提取液倍数、不同提取方法对狼毒大戟进行了提取率的研究,同时对不同提取
液及提取方法所得提取物质成分进行了分析。 结果表明:以甲醇作为提取溶液采用 6倍常温浸泡后索氏提
取然后再常温浸泡的提取方法提取率最高, 以 95%乙醇作为提取液采用同样的提取方法其提取率次之;以
95%乙醇、石油醚、乙酸乙酯作为提取液采用 6 倍常温浸泡后索氏提取再常温浸泡的提取方法较其他方法
提取率高。甲醇在该方法下不仅提取率最高,而且其提取物所含成分也比较多,乙醇次之。由此可以得出,对
于狼毒大戟的粗提取,采用甲醇或者乙醇作为提取溶液比较合适,其最佳提取方法为 6 倍常温浸泡后索氏
提取然后再常温浸泡的提取方法。
关键词:狼毒大戟;提取工艺;提取成分
中图分类号:R284.1;Q949.95 文献标识码:A 文章顺序编号:1672-5190(2013)12-0020-02
Comparison of Different Extraction Technologies of Euphorbia fischeriana and Its
Components Analysis
DOU Hong-ju,LI Feng,YANG Bao-long,HOU Yong-yue,Hasi
(Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Hohhot 010031,China)
Abstract:The extraction rate of Euphorbia fischeriana with different extracting solutions, different times of extracting solutions
and different extraction methods were studied. And the components of the extracts by using different extracting solutions and
extraction methods were analyzed. The results showed that the extraction rate of using methanol as extracting solution, soaking at 6
times of room temperature, Soxhlet extraction and soaking at room temperature was the highest. And the extraction rate of using
95% ethanol as extracting solution by the same extraction method was the next. The extraction rate of using 95% ethanol,
petroleum ether and ethyl acetate as extracting solution, soaking at 6 times of room temperature, Soxhlet extraction and soaking at
room temperature was higher than that of other methods. The extraction rate of using methanol as extracting solution by the same
method was the highest and its extracts had most components, followed by ethanol. Therefore methanol and ethanol were suitable
extracting solutions for crude extraction of E. fischeriana. The best extraction method was soaking at 6 times of room temperature,
Soxhlet extraction and soaking at room temperature.
Key words:Euphorbia fischeriana;extraction technology;extracted components
大戟科狼毒包括狼毒大戟和月腺大戟,《中国药
典》1977 年版收载的狼毒即大戟科植物狼毒大戟和
月腺大戟的根 [1]。 对于狼毒大戟的提取工艺研究,最
早人们是用水煮狼毒大戟根, 将其水浸液作为药用,
后来中药用醋煮作为药用, 蒙药用牛奶煮作为药用。
当人们发现其对人体有医疗作用后,即对采用不同提
取工艺所得提取物及与之对应的不同作用进行了研
究,主要采用乙醇提取、乙酸乙酯超声提取、甲醇提
取、石油醚提取、超临界二氧化碳萃取等提取方法,同
时对其对应的提取物成分展开了研究。
狼毒大戟的有效成分主要分为萜类、 鞣质类、植
物甾醇类、蒽醌、苯乙酮、挥发油成分、杀虫成分等几
大类,目前对于其成分的研究主要集中在对其抗癌作
用、抗白血病作用、抗菌与抗病毒作用、抗惊厥作用、
其他医疗作用及杀虫作用的研究上,对于不同提取工
艺具体对应何种成分目前没有进行过比较分析。 该研
究针对采用不同提取液、提取液不同倍数、不同提取
方法对狼毒大戟进行了提取率的比较,同时对不同提
取方法所对应的提取物质的成分进行了分析。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 材料:供试提取溶剂为 95%乙醇、甲醇、石油
醚、乙酸乙酯,都是分析纯。 供试药材狼毒大戟根购于
内蒙古呼和浩特市某药店。 所用仪器主要有 BATHS
HH-8数显恒温水浴锅、RE-52CS-1旋转蒸发仪、HC-
500A型华晨高速多功能粉碎机。
1.1.2 试验时间:试验于 2013年 3—10月在内蒙古自
治区农牧业科学院兽医所实验室和资源环境与检测
技术研究所标准实验室进行。
1.2 方法
1.2.1 狼毒大戟的粗提取比较
1.2.1.1 粉碎:将狼毒大戟根风干后,用粉碎机将其粉
碎。 狼毒大戟为多年生草本植物,其根部含有 50%左
右的纤维, 所以传统提取工艺中将其粉碎为 60 目左
右进行提取,但在实际生产中很难实施,该试验只将
收稿日期:2013-11-10
基金项目 :公益性行业 (农业 )科研专项课题 (201303040-
11);内蒙古自治区“草原英才”项目(2012001);内
蒙古自治区主席创新基金(2011CXJJMOS-1)。
作者简介:窦洪举(1956—),男,副研究员,主要研究方向为
家畜寄生虫病及经济管理。
Animal Husbandry and Feed Science畜牧与饲料科学 2013,34(12):20-21
DOI:10.16003/j.cnki.issn1672-5190.2013.12.003
其粉碎至 20目左右备用。
1.2.1.2 提取:分别采用常温浸泡、索氏提取、常温浸
泡后索氏提取、常温浸泡后索氏提取再常温浸泡的方
法提取其有效成分。
常温浸泡:分别称取粉碎后的大戟科狼毒根 30 g,
用 10 倍(300 mL)的 95%乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙
酯常温浸泡 5 d; 分别称取 30 g 粉碎后的大戟科狼毒
根 30 g用 6倍(180 mL)的 95%乙醇、甲醇、石油醚、乙
酸乙酯常温浸泡 5 d。
索氏提取:分别称取粉碎后的大戟科狼毒根 30 g,
用 6倍(180 mL)的 95%乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙酯
索氏提取 5 h; 分别称取粉碎后的大戟科狼毒根 30 g
用 10 倍(300 mL)的 95%乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙
酯索氏提取 5 h。
常温浸泡后索氏提取:分别称取粉碎后的大戟科
狼毒根 30 g,用 6 倍(180 mL)的 95%乙醇、甲醇、石油
醚、乙酸乙酯索氏提取 3 h后常温浸泡 15 h。
常温浸泡后索氏提取再常温浸泡:分别称取粉碎
后的大戟科狼毒根 30 g,用 6 倍(180 mL)的 95%乙
醇、甲醇、石油醚、乙酸乙酯常温浸泡 15 h,再索氏提
取 3 h,最后常温浸泡 20 h。
1.2.2 狼毒大戟成分分析
1.2.2.1 色谱条件:色谱柱:HP-5mas 。 载气:He 。 流
速:1.0μL/min。 柱温:初温为 60℃,保持 2 min;之后以
10 ℃/min 持续升温到 200 ℃,保持 6 min;二次升温以
5℃/min升到 280℃,保持 20 min 。进样口温度:250℃。
1.2.2.2 质谱条件: 离子化方式:EI。 电子加速电压:
70 EV。 离子源温度:230℃。检测方式:全扫描。四级
杆温度:150℃。 辅助通道温度:280℃。
1.2.2.3 进样方法:自动进样,不分流,进样量 1.0 μL。
2 结果
2.1 狼毒大戟不同提取方法提取率的比较 采用不
同提取液经不同提取方法所得的提取率结果见表 1。
从表 1 可以看出,以甲醇作为提取溶液采用 6 倍
常温浸泡后索氏提取再常温浸泡的提取方法的提取
率最高。 而以 95%乙醇、石油醚、乙酸乙酯作为提取
液,采用 6倍常温浸泡后索氏提取再常温浸泡的提取
方法较其他方法提取率高。 因此, 对以 95%乙醇、甲
醇、石油醚、乙酸乙酯作为提取液采用 6 倍常温浸泡
后索氏提取再常温浸泡的提取方法所提取的物质进
行成分分析。
2.2 狼毒大戟成分分析 对于以 95%乙醇、 甲醇、石
油醚、乙酸乙酯作为提取液采取 6倍常温浸泡后索氏
提取再常温浸泡的提取方法提取物质的成分进行全
扫描分析。
2.2.1 甲醇提取物中独有的物质:仅在甲醇提取物里
扫描到的有: 呋喃甲醛、 呋喃甲醇、 二十烷酸甲酯、
Aziridine -2 -carbothioamide、14 -Pentadecenoic acid、
cis -10 -Heptadecenoic acid、 9,12 -Octadecadienoic
acid (Z,Z)-, 2,3-dihydroxypropyl ester、(-)-Nortrachel-
ogenin 、 4-Penten-1-one, 1,5-diphenyl-。
2.2.2 甲醇与乙醇提取物里共有的物质:在甲醇与乙
醇提取物里共同扫描到的有苯酚 、5-羟甲基糠醛 、
2,3,5,6-四氟茴香醚、十七烷酸、十六烷酸、亚油酸、
十六酰胺、VE、β-谷甾醇、菜油甾醇、4H-Pyran-4-one,
2,3 -dihydro -3,5-dihydroxy-6-methyl - 、Vanillin、 4-
[(1E) -3 -Hydroxy -1 -propenyl] -2 -methoxyphenol、
2H-1-Benzopyran-2-one, 7-hydroxy-、9,12-Octadeca-
dienoic acid (Z,Z)-,methyl ester、2(3H)-Furanone,3,4-
bis(1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)dihydro-,(3R-trans)-、
2 (3H) -Furanone,dihydro -3,4 -bis [(4 -hydroxy -3 -
methoxyphenyl)methyl]-,(3R-trans)-、 Benzofuran,2,3-
dihydro。
2.2.3 甲醇、乙醇、乙酸乙酯提取物里共有的物质:在
甲醇、乙醇、乙酸乙酯提取物里共同扫描到的有对乙
烯基愈创木酚、2-丙基苯酚、软脂油酸、 Phenol,4,4′-
methylenebis-、 2H-1-Benzopyran-2-one, 7-hydroxy-、
5-Phenyl-2,4-pentadienophenone、 n-Octyl phenyl ke-
tone、1 -Propanone,1 -phenyl -3 -[2 -(phenyl methoxy)
phenyl]-、 9-Octadecenamide,(Z)-。
2.2.4 甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯提取物里共有的
物质:在甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯提取物里都扫
描到的有苯乙酮、 苯丙醛、 十四烷酸、2 (3H)-Naph-
thalenone,4,4a,5,6,7,8-hexahydro-4a,5-dimethyl-3-(1-
methylethylidene) - , (4ar -cis) - 、2,6,10,14,18,22 -Tetra-
cosahexaene,2,6,10,15,19,23-hexamethyl-, (all- E)-。
除以上扫描到的以外,在甲醇、乙醇与石油醚提
取物中共同扫描到的有 cis-9-Hexadecenoic acid 。 在
甲醇与石油醚提取物中共同扫描到的有 1-Decanone,
1 -phenyl - 、1 -Propanone,1 -phenyl -3 -[2 -(phenyl
提取液
95%乙醇
甲醇
石油醚
乙酸乙酯
10倍浸泡提取
12.4
15.1
2.3
10.8
提取率
表 1 狼毒大戟不同提取液不同提取方法的提取率 %
6倍浸泡提取
11.6
14.5
2.1
9.7
6倍索氏提取
12.1
14.8
2.2
9.9
10倍索氏提取
11.5
13.9
2.0
9.7
6倍索氏提取
后常温浸泡
13.0
15.6
2.4
10.9
6 倍常温浸泡后索
氏提取再常温浸泡
15.2
17.3
2.5
11.2
窦洪举等:狼毒大戟的不同提取工艺比较与成分分析 21第 12 期
methoxy)phenyl]-。 在乙醇、乙酸乙酯与石油醚提取物
中共同扫描到的有 Oxacyclopentadecan-2-one, 15-
methyl-。在甲醇、乙酸乙酯、石油醚提取物中共同扫描
到的有 Benzofuran, 2,3-dihydro-。
通过对不同提取物里的成分比较分析,发现以甲
醇作为提取液不但提取率最高, 而且其成分也比较
多,乙醇次之。 因此,下一步对于狼毒大戟的粗提取,
采用甲醇或者乙醇作为提取溶液比较合适。
3 结论
狼毒大戟为多年生草本植物,分布广泛,现在还
可以种植培养,除了有抗癌、抗病毒、提高免疫力等作
用外,还有杀虫抗菌作用。 但目前只有其对植物害虫
杀虫作用的研究,还没有其对动物寄生虫杀虫作用的
研究,而且目前对其杀虫成分研究也很少,只有 2005
年徐德昌、骆成高、张中男、陈凤芝对大戟狼毒化学成
分的定性分析发现其杀虫主要成分有十二烷酸乙基
酯、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷
酸及相应的乙基酯,这些成分在乙醇与甲醇提取物里
都有扫描到。
试验中以乙醇与甲醇作为提取溶液的提取率较
高,所以用于植物杀虫药进行研究时,可选用甲醇作
为粗提溶液;而用于动物杀虫药进行研究时,考虑到
甲醇的毒性与对皮肤的刺激性,应选用乙醇作为粗提
溶液。 进一步展开对狼毒大戟杀虫研究,广泛用于动
植物杀虫,减少化学用药的低效、高毒、高残留是今后
研究的形势所趋。
参考文献:
[1]
[2]
中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国
药典[M].北京:人民卫生出版社,1977:487.
窦洪举,李锋,侯勇跃.狼毒及瑞香狼毒的研究进展[J].
畜牧与饲料科学,2013,34(11):43-48.
(责任编辑:钱英红)
山羊支原体山羊肺炎亚种M1601生长曲线与pH值的测定
高 珊
(内蒙古阿拉善盟畜牧研究所,内蒙古 阿拉善左旗 750306)
摘要: 为了研究山羊支原体山羊肺炎亚种分离株 M1601株在 Thiaucourt 肉汤培养基中的生长及繁殖特性,
利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度及 pH值进行了测定,并绘制了生长曲线。 结果表明,传
代稳定的 M1601在 Thiaucourt肉汤培养基中培养 6~60 h为对数生长期,pH值逐渐下降;培养 60~72 h进入
稳定期,pH值降为 6.27,培养 72 h进入衰亡期。 这为山羊支原体山羊肺炎亚种培养特性研究和疫苗生产工
艺研究提供了参考数据,以便在生产上更合理地应用其生长规律。
关键词:山羊支原体山羊肺炎亚种;pH 值;生长曲线
中图分类号:S852.6 文献标识码:A 文章顺序编号:1672-5190(2013)12-0022-03
Growth Curve ofMycoplasma capricolum subsp. capripneumoniaeM1601 and
Determination of pH Value
GAO Shan
(Animal Husbandry Research Institute in Alashan League of Inner Mongolia, Alashan 750306,China)
Abstract:In order to study the growth of Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae M1601 in Thiaucourt broth medium
and its reproductive characteristics, the growing titer in different culture stages and pH were determined by live bacteria counting
method. And the growing curve was made. The results showed that the logarithmic phase of M1601 that was stably generated was
6~60 h that was cultured in Thiaucourt broth medium and pH value gradually decreased. And it entered into stationary phase after
60~72 h and pH decreased to 6.27. And it entered into decline phase after 72 h. This provided reference data for studying the
culture characteristics of Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae and the manufacturing process of vaccine and applied
its growing laws in the production reasonably.
Key words:Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae;pH value;growing curve
山羊(接触)传染性胸膜肺炎(contagious caprine
pleuropneumonia,CCPP) 是由山羊支原体山羊肺炎亚
种 (Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae,
Mccp)引起的以呼吸道症状为特征的疾病,被世界动
物卫生组织(OIE)列为法定报告动物疫病之一[1]。近几
年,在我国甘肃、山东、内蒙古、宁夏等地区有诸多临
床病例的报道,并相继分离或检测到山羊支原体山羊
肺炎亚种的存在,说明该病在我国开始流行[2]。
做好预防工作是防治 Mccp 感染的重要手段,了
解 Mccp 的生长繁殖特性对疫苗生产工艺的研究非常
重要。为了解 Mccp在 Thiaucourt肉汤培养基中的生长
收稿日期:2013-10-20
作者简介:高珊(1986—),女,硕士,主要研究方向为白绒山
羊疾病预防、饲养管理与营养。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Animal Husbandry and Feed Science畜牧与饲料科学 2013,34(12):22-24