全 文 ：［收稿日期］ 20130228(023)
［基金项目］ 广东省科技计划项目(2010B030700001)
［第一作者］ 鲁芹飞，在读硕士研究生，从事中药新药开发研究，Tel:020-39359731，E-mail:jiayouluqinfei@ 163． com
［通讯作者］ * 黄松，博士，副教授，硕士生导师，从事中药新药开发研究，Tel:020-32503212，E-mail:hsl318@ yahoo． com． cn
狭基线纹香茶菜(溪黄草)咖啡酸
和迷迭香酸的薄层鉴别与含量测定
鲁芹飞1，唐海明1，陈玲玲1，冯泓瑞1，黄松1，2*
( 1. 广州中医药大学，广州 510006;
2. 东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东 东莞 523808)
［摘要］ 目的:建立狭基线纹香茶菜药材中咖啡酸和迷迭香酸的 TLC 鉴别及 HPLC 含量测定方法。方法:以正已烷-乙
酸乙酯-甲酸(3∶ 3∶ 1)为展开剂，展开后取出晾干，于干燥器内放置过夜后于紫外灯(365 nm)下检视;Dikma Diamonsil C18色谱
柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 3%磷酸，流速为 1. 0 mL·min －1，检测波长为 329 nm。结果:在 TLC色谱中咖啡酸
和迷迭香酸斑点清晰，分离效果好;咖啡酸和迷迭香酸分别在 0. 045 4 ～ 0. 908 0 μg(r = 0. 999 9)和 0. 219 2 ～ 4. 384 0 μg(r =
0. 999 6)具有良好的线性关系，平均回收率(n = 6)分别为 96. 57% (ＲSD 1. 32%)和 99. 48%(ＲSD 2. 53%)。结论:该方法准
确可靠，可用于狭基线纹香茶菜(溪黄草)药材质量控制。
［关键词］ 狭基线纹香茶菜;咖啡酸和迷迭香酸;薄层色谱法;高效液相色谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)22-0114-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013220114
Identification and Determination of Caffeic Acid and Ｒosmarinic Acid in
Ｒabdosia lophanthoides var gerardiana by TLC and HPLC
LU Qin-fei1，TANG Hai-ming1，CHEN Ling-ling1，FENG Hong-rui1，HUANG Song1，2 *
(1. Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China;
2. Dongguan Institution for Mathematics and Theoretics Engineering Ｒesearch，Dongguan 523808，China)
［Abstract］ Objective:To establish methods for identification and determination of caffeic acid and
rosmarinic acid in Ｒabdosia． lophanthoides var gerardiana by TLC and HPLC． Method:The developing solvent
for caffeic acid and rosmarinic acid in Ｒ． lophanthoides var gerardiana by TLC was n-hexane-ethylestate-formic acid
(3∶ 3∶ 1) ，detected under the UV light (365 nm)． HPLC method was performed on a Dikma Diamonsil C18 column
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)with a mobile phase of methanol-0. 3% phosphoric acid by gradient elution． The flow
rate was 1. 0 mL·min －1 ． The column temperature was kept at 25 ℃ and detection wavelength was set at 329 nm．
Ｒesult:Caffeic acid and rosmarinic acid could be detected with clear spots and good separated by TLC，caffeic
acid and rosmarinic acid showed good linearity in the ranges of 0. 045 4-0. 908 0 μg (r = 0. 999 9)and 0. 219 2-
4. 384 0 μg (r = 0. 999 6)with average recoveries of 96. 57% (ＲSD 1. 32%)and 99. 48% (ＲSD 2. 53%)．
Conclusion:The methods are accurate and can be used for the quality of Ｒ． lophanthoides var gerardiana．
［Key words］ Ｒabdosia lophanthoides (Buch． -Ham ex D． Don)Hara var gerardiana (Benth．)Hara;
caffeic acid and rosmarinic acid;TLC;HPLC
现作商品“溪黄草”入药的除线纹香茶菜外，还 有同属植物狭基线纹香茶菜［1-3］。现代药理研究表
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第 19 卷第 22 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 22
Nov．，2013
明狭基线纹香茶菜对小鼠的各种类型的肝损伤有很
好的作用［4-6］。狭基线纹香茶菜(溪黄草)中所含的
化学成分咖啡酸与迷迭香酸具有丰富的药理作用。
迷迭香酸具有抗氧化及清除自由基作用以及抗菌、
抗病毒、抗炎、抗血栓等活性［7］。研究表明，其对实
验动物脑、肝、肾微粒体的脂质过氧化有强抑制作
用，有促纤维蛋白溶解活性，同时对单纯疱疹病毒还
有一定的抑制作用［8］。咖啡酸亦具有广泛的抑菌、
抗病毒、抗氧化作用。两者与溪黄草的抗肝炎、抗氧
化、抗菌、抗病毒等活性一致，其药理活性提示在溪
黄草药材的质量控制中的重要意义。目前未有对狭
基线纹香茶菜药材中的咖啡酸、迷迭香酸含量测定
等的相关质量标准研究的文献。本文对狭基线纹香
茶菜药材中的咖啡酸和迷迭香酸建立了 TLC 的薄
层鉴别和含量测定方法，为狭基线纹香茶菜药材及
其提取物的质量控制提供一定的科学依据。
1 材料
Shimadzu LC-20AT 型高效液相色谱仪(SPD-
M20A 二极管阵列检测器，CTO-20A 柱温箱，
Shimadzu LC Solution 色谱工作站，日本 Shimadzu 公
司) ，Dikma Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，
5 μm) ，薄层硅胶预制板(青岛海洋化工厂生产) ，
AB204-N 型电子分析天平(METTLEＲ TOLEDO 公
司) ，甲醇、乙腈均为色谱纯(Merck公司) ，其他试剂
为分析纯。咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定
所，批号为 110885-200102)、迷迭香酸对照品(中国
药品生物制品检定所，批号为 111871-201102)。狭
基线纹香茶菜药材，经广州中医药大学新药开发研
究中心陈建南研究员鉴定为唇形科的狭基线纹香茶
菜 Ｒabdosia lophanthoides (Buch． -Ham ex D． Don)
Hara var． gerardiana (Benth．)Hara 的地上部分，标
本存放于广州中医药大学新药开发研究中心。
2 方法与结果
2. 1 薄层鉴别 取本品粉末(过四号筛)1. 0 g，加
甲醇 25 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液浓缩至干，
残渣加甲醇 2 mL溶解，作为供试品溶液。另取咖啡
酸和迷迭香酸对照品，加甲醇制成 0. 2 g·L －1的混合
溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供
试品溶液和对照品溶液各 2 μL，分别点于同一硅胶
G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶ 3∶ 1)为展
开剂，展开，取出，晾干，干燥器内放置过夜后于紫外
灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色
谱相应的位置上，显示相同的荧光斑点。
2. 2 咖啡酸与迷迭香酸的含量测定
2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取咖啡酸、
迷迭香酸对照品 2. 27，10. 96 mg，置 10 mL 量瓶中，
用甲醇溶解并稀释成 0. 227，1. 096 g·L －1的混标溶
液，作为对照品供试液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取本品(过四号筛)
1. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%乙
醇 40 mL，称定质量，超声提取 40 min，放冷，再称定
质量，用 50%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取
续滤液，即得。
2. 2. 3 色谱条件 Dikma Diamonsil C18色谱柱(4. 6
mm ×250 mm，5 μm) ，流动相 A-乙腈，B-0. 3%磷酸，
梯度洗脱(0 ～ 17 min，12% A;17 ～ 20 min，12% ～
25%A;20 ～ 50 min，25%A) ，流速 1. 0 mL·min －1，检
测波长 329 nm，柱温 25 ℃。
2. 2. 4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液
0. 1，0. 5，1. 0，1. 5，2. 0 mL至 10 mL 量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤。分别精密
吸取上 5 个浓度水平的对照品各 20 μL，注入高效
液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以
进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y) ，进行线
性回归，得回归方程分别为 Y咖啡酸 = 4. 0 × 10
6 X －
101 826(r = 0. 999 9) ，Y迷迭香酸 = 2. 0 × 10
6X － 134 274
(r =0. 999 6)，咖啡酸在0. 045 4 ～0. 908 0 μg，迷迭香酸
在 0. 219 2 ～4. 384 0 μg与面积线性关系良好。
2. 2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，进
样 20 μL，平行测定 6 次，测得 2 种成分峰面积，ＲSD
分别为 0. 96%，0. 53%。表明仪器精密度良好。
2. 2. 6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，在
0，8，12，18，24 h 各进样 20 μL，测得 2 种成分峰面
积，ＲSD 分别为 0. 96%，0. 85%。表明供试品在
24 h内稳定。
2. 2. 7 重复性试验 精密称取同一样品 6 份，每份
1. 0 g，照 2. 3 供试品溶液制备方法制得供试品溶
液，按上述色谱条件进样 20 μL，测定 2 种成分的含
量，ＲSD 分别为 1. 96%，1. 76%。表明方法重复性
较好。
2. 2. 8 加样回收率测定 取已知含量的狭基线纹香
茶菜药材粗粉(咖啡酸含量为 0. 247 6 g·L －1，迷迭香
酸含量为 2. 890 3 g·L －1)6份，精密称定，分别精密加
入咖啡酸(0. 227 g·L －1)和迷迭香酸对照品溶液
(1. 096 g·L －1)0. 40 mL，按供试品溶液制备方法制备
供试液，计算其加样回收率和 ＲSD。结果见表 1。
2. 2. 9 样品的测定 取狭基线纹香茶菜药材粉末，
按 2. 2. 3 项下操作，所得样品溶液经 0. 45 μm 微孔
·511·
鲁芹飞，等:狭基线纹香茶菜(溪黄草)咖啡酸和迷迭香酸的薄层鉴别与含量测定
表 1 溪黄草咖啡酸和迷迭香酸加样回收率试验
成分
称样量
/ g
样品
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
咖啡酸 0. 302 9 0. 075 0 0. 090 8 0. 164 2 98. 24 96. 57 1. 32
0. 300 4 0. 074 4 0. 090 8 0. 161 9 96. 39
0. 302 2 0. 074 8 0. 090 8 0. 160 5 94. 36
0. 301 2 0. 074 6 0. 090 8 0. 162 1 96. 39
0. 300 8 0. 074 5 0. 090 8 0. 162 5 96. 94
0. 301 5 0. 074 7 0. 090 8 0. 162 8 97. 08
0. 202 7 0. 585 9 0. 427 6 0. 996 9 96. 13
迷迭香酸 0. 201 1 0. 581 2 0. 427 6 1. 021 1 102. 87 99. 48 2. 53
0. 201 3 0. 581 8 0. 427 6 0. 998 1 97. 35
0. 201 5 0. 582 4 0. 427 6 1. 007 2 99. 35
0. 202 6 0. 585 6 0. 427 6 1. 020 0 101. 60
0. 202 0. 583 8 0. 427 6 1. 009 8 99. 62
滤膜滤过，按 2. 2. 1 项色谱条件进样 20 μL，测定并
计算咖啡酸和迷迭香酸的含量。对照品及样品色谱
图见图 1，结果见表 2。
A．对照品;B．样品;1. 咖啡酸;2. 迷迭香酸
图 1 溪黄草对照品及样品的 HPLC
从表 2 可以看出上述 5 种不同来源的狭基线纹
香茶菜中的咖啡酸和迷迭香酸的含量相差很大，其
中咖啡酸的含量范围在 0. 10 ～ 0. 30 mg·g －1，迷迭香
酸的含量范围在 2. 61 ～ 5. 93 mg·g －1，并且迷迭香酸
的含量高于咖啡酸的含量。
表 2 不同来源的狭基线纹香茶菜中的咖啡酸和迷迭香酸的含量
No． 来源
咖啡酸
含量
/mg·g － 1
珋x ± s
迷迭香酸
含量
/mg·g － 1
珋x ± s
1 广东饶平 0． 20 0. 19 ± 0. 08 2. 83 3. 74 ± 1. 44
2 广东广州 0． 30 5. 93
3 广东广州 0． 21 4. 49
4 广东潮州 0． 10 2. 83
5 广东汕头 0． 11 2. 61
3 讨论
咖啡酸、迷迭香酸在紫外光灯(365 nm)下检视
均可见亮紫色荧光，该方法主斑点清晰，易于检出，
重复性好。本实验中对咖啡酸和迷迭香酸进行分离
鉴别时，首先参考了 2010 年版《中国药典》［9］，以正
已烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶ 3∶ 0. 2)为展开系统，进行鉴
别。将展开系统分别调整为正已烷-乙酸乙酯-甲酸
(4∶ 2∶ 0. 2)、正已烷-乙酸乙酯-甲酸(2∶ 4∶ 0. 2)、正已
烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶ 3∶ 1)和正已烷-乙酸乙酯-甲酸
(3∶ 3∶ 1)进行实验，前 3 种配比的展开剂，仍未能将
咖啡酸很好地鉴别出来;用正已烷-乙酸乙酯-甲酸
(3∶ 3∶ 1)展开后，完全挥干展开溶剂，在紫外光灯
(365 nm)下检视，溪黄草药材咖啡酸和迷迭香酸斑
点清晰，同时被完全鉴别。实验中对影响薄层鉴别
的主要因素如饱和时间、展开温度、相对湿度等进行
了考察，发现展开温度、相对湿度对分离效果影响
较小，而饱和时间对展开效果影响较大，故建议展
开前最好饱和 20 min以上。
在测定咖啡酸和迷迭香酸含量时，对于供试品
溶液的制备，考察了提取溶媒、溶媒倍量和提取时
间，得出最佳提取方法，采用 40 倍量的 50%乙醇超
声提取 40 min;分别对咖啡酸、迷迭香酸在 200-800
nm进行全波长扫描，根据扫描结果，选择 329 nm为
测定波长。流动相尝试使用了乙腈配比不同浓度的
磷酸、甲醇配比不同浓度的磷酸进行洗脱，并且分别
考察了等度洗脱和梯度洗脱方法，最终选用乙腈-
0. 3%磷酸进行梯度洗脱。
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北京:中国医药科技出版社，2010:319.
［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 22 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 22
Nov．，2013