全 文 ：第 9卷第1 期
1 3 2 0年1 1 月
亚太传统医药
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21 3 0
从狭基线纹香茶菜中分离纯化阿魏酸与咖啡酸
李保珍 ,王 智玮 , 侯海若 , 刘 雪芳
(深匀;1市妇 幼保健院 , 广 东 深匀;1 5 1 8 0 0 0 )
摘 要 : 目的 : 对唇形科香茶菜属植物狭基线纹香茶菜即 中药溪黄草 中的有效化 学成分进行提取 、 分 离
和纯化 。 方法 : 采用 体积分数为 外% 乙 醇提取 , 然后将 水提混 悬液通过石 油 醚 、 乙 酸 乙 醋 、 正 丁 醇分步
苹取 , 再对 乙 酸 乙 醋苹取邵位运 用 正相硅胶 、 S eP h ad ex L什 2 0 、 O D S 等柱 层析手段联合 H P L C 进行分
离 、 纯化 。 结果 :通过分 离纯化得到 了 多个组分 ,并采用 化 学方 法及质谱分析鉴定 了所分 离成分的 结构 。
结论 :从 溪黄草中成功分 离得到 了阿魏酸 、 咖啡 酸 ,并对其结构进行 了鉴定 。
关键词 :狭基线纹香茶菜 ; 阿魏酸 ; 咖啡 酸 ;分 离纯化
中图分类号 : R 2 8 4 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 6 7 3一 2 1 9 7 ( 20 13 ) 1 1一 0 0 28一 0 2
溪黄草为唇形科香茶菜属多年生草本植物 , 是 民间常
用的中草药 , 其具有抗 菌 、 抗炎 、 清热护肝 、 化气消痰之功
效川 。 《中药大辞典产 〕等文献记载狭基线纹香茶菜为中药
溪黄草 的主要资源 , 其味苦甘微涩 、 性平 、 无毒 ,具有清热 、
利尿 、 退黄 、 去积 、 止痛 、 消 炎等功效 。 临床实验表明 , 溪黄
草的毒性低 ,市场应用广 ,尤 以华南地区 为甚 ,出现了 许多
以其为主要原料的保健品 、 茶饮料等 , 目前由该植物配制的
民 间组方制剂已得到广泛应用 。 目前 , 国 内外 医学 、 植物化
学工作者对从香茶菜属植物中寻找高效低毒的新药有着极
大的兴趣 。 一些二菇化合物如冬凌草甲素 ( or i d o in n i、 。 d。 、
in c a ic )已 申请专利 ,有的已 进行 了抗癌 临床实验 , 甚 至 有些
药物如冬凌草制剂 、炎瘤宁栓剂 、 人参香茶片作为抗菌消炎
药 ,溪黄草制剂 、 复方三姐妹作为保肝 、 护肝药等已 有商品
出售 . 们 。 为进一步阐明其药效作 用的物质基础及相关机
理 ,本文针对狭基线纹香茶菜的一 些化学成分进行了 研究
分析 ,现报道如下 。
1 材料及 方法
1
.
1 仪器与试剂
北京泰克仪器 有限公 司 X- 6 型显微熔点测定仪 (温度
未校正 ) ;核磁共振仪 : B ur k e : va a cn e 4 0 0 ; 电子天平 : 北京赛
多利斯仪器系统有限公 司 ; 2 0 2一 O 型 电热恒温干燥箱 : 上 海
锦屏仪器仪表有限公 司通州分公 司 ; 医用 控硅恒温水浴锅 :
上海锦屏仪器仪表有限公 司 ; 层析硅胶 ( 2 0 0一 30 目 )为青
岛海洋化工厂产 品 。 甲醇 、 乙醇 、 氯仿 、 石油醚 、 丙酮 、 乙酸乙
酷 、 正丁醇等试剂 ;碘 、 浓硫酸 一乙醇 、 三氯化铁 、 磷铝酸 一乙醇
及香草醛侬硫酸等显色剂 。
1
.
2 药品
实验药材购自广 州致信 中药饮片有限公 司 , 经广州中
医药大学中药学院祝晨 疏研究员鉴定 为狭基线纹 香茶菜
I s o d o n l o P h a n t h o 艺d e s v a r . g e r a r d i a n u 、 的干燥全草 。
2 预试验
中草药化学成分比较复杂 , 因 此在进行提取分离之前 ,
需要通过预试验大致了解该 中草药的各类化学成分 , 从而
为狭基线纹香茶菜 的进一 步开发利用 提供一 定的研 究依
据 。 因此应首先对狭基线纹香茶菜药材进行预试验 , 预试
验的流程如 下 。
2
.
1 预试液制备
水提液制备 :样品粗粉 5 9 加蒸馏水 s o m L , 室温浸泡过
夜 ( 24 h) ,过滤 ,提取部分滤液① ;剩余的滤液和药渣加 5 0一
60 ℃水浴加热 l h ,过滤 ,得到滤液② 。
乙醇提取液制备 : 样品 粗粉 5 9 加 s o m L 乙 醇室温浸泡
过夜 ( 24 h) ,过滤 ,得到乙醇提取液 ,取 10 m L 醇液 ,加 1 % 一
3 %活性炭煮沸 , 0 . 5一 l m in 脱色过滤 ,得到乙醇液③ 。 剩余
的乙醇液水浴浓缩至 10 m L , 先取 3m L 浓缩液 ,加 s m L S%
H C I溶解过滤 ,得到滤液⑤ ;其余 7m L 加 9 5% 乙醇 s m L ,加
水 3 m L ,再加石油醚 l m L , 振动分层 , 分离保 留 乙醇液 , 加
3 o m L 9 5 % 乙醇 ,最后得到乙醇萃取液④ (约 40 m L ) 。
2
.
2 测试
预实验流程中提取 、 分 离液的化学成分 测试反应结果
如表 1 所示 (备注 : 表中符号 : + 表正反应 , 一 表负反应 , 士
表可疑 ) 。
3 分离纯化
称取狭基线纹香茶菜 sI o d o n lo P h a nt ho 叔 e 、 v ar . g er a 。
d i a n u 、 干燥全草 l o k g ,用体积分数为 9 5 % tE O H ( 40 L )室温
浸泡 ( 4 o L 又 3 / 1 0 天 ) , 减压 回 收溶剂得总浸膏 ( 4 8 2 9 ) 。 将
浸膏加水分散后 ,分别用 石油醚 、 乙酸乙酷 、 正丁醇萃取 ,萃
取液减压浓缩分别得到石油醚部位 ( 2 5 8 9 ) 、 乙酸 乙酷部位
( 40 0 9 )
、 正丁醇部位 ( 1 4 0 9 ) 。 乙酸乙 酷层浸膏 ( 4 4 8 9 ) 经常
收稿 日期 : 2 0 1 3一。 7一 2 4
作者简介 : 李保珍 ( 1 9 6 1一 ) , 广东省深圳市妇 幼保健院主管中药师 ,研 究方向为 中药饮片
第 9卷第H 期
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N 9 O
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.
2 0 1 3
压硅胶减压柱层析( 2 0 0一 30 目 ), 洗脱剂采用极性逐渐增
大的石油醚 一乙酸乙酷 ( 5% 、 一。 % 、 2 0 % 、 2 5 % 、 3 5% 、 4 5 % )及
纯甲醇冲柱洗脱 ,每份收集 5 0 m L 为洗脱液 ,点板 ( T L C )合
并有相 同斑点的馏分 , 浓缩 , 得到一系列的馏分 , 共 16 个 ;
分别对 馏分 9 与馏 分 n 进行 分析 , 馏 分 1 过 M C I 柱 ,
M
e Z C O
,
H
Z
O 一 5 0 , 5 0 洗脱 ,再 R P一 C 。 ( M e O H , H Z O 一 4 0
,
60 )洗脱 , 得到化合物 1 ( 7 5m g ) ; 馏分 9 依次经过硅胶柱
层析 ( P E , M e Z C O 一 1 0 , 1 ) 、 S e p h a d e x L片 2 0 ( C H C 13 ,
M
e O H 一 5 0 , 5 0 )洗脱 , 得到化合物 2 ( I Om g ) 。 经 N M R 、
M S 等波谱数据分析鉴定化合物 1 与化合物 2 的结构 , 如 图
1 所示 。
表 1 分析测试结果
化学成分 测试项 目 提取液① ② ③ ④ ⑤
生物碱
+一十一十氨基酸 、 多
月太、 蛋白质
十+一十+一有机酸
十+一十酚类化合物
和辣质
十
糖 、 多糖和 苦
皂苦及昌
菇类
十黄酮类
内醋 、 香 豆素
及其苦
强心苦
葱酉昆类
挥发油及
油脂
碘化秘钾试剂
碘化 汞钾试剂
硅钨 酸试剂
双缩 服试验
茹三 酮试剂
P H 试纸检 查
澳酚 兰试剂
1 %三氯化铁试剂
明胶 试剂
重氮化试剂
斐林 试剂
a 蔡酚
氨性硝酸银试剂
醋醉 浓硫酸反应
氯仿 浓硫酸反应
盐酸 镁粉反应
1 %三氯化铝 乙醇溶液
氨熏 试验
荧光
重氮化反应
异轻朋酸铁反应
3 , 5一二硝基苯 甲酸试剂
碱性 苦味酸试剂
三氯化铁冰醋酸试验
碱液 试验
醋酸镁试验
纸上 试验
一般检查
( I H
,
d
,
J一 1 6 . 0 H z , 州 7 ) , 7 . 3 6 ( I H , d , J一 2 . 0 H z , 什
2 )
,
6
.
9 5 ( I H
,
d d
,
J 一 2 . 0 , 8 . 0 H z , 州 6 ) , 6 . 9 2 ( I H , d ,
J 一 8 . 0 H z , H一 5 ) , 6 . 5 2 ( I H , d , J 一 1 6 . 0 H z , 州 8 ) ; 1 3 C
N M R ( 4 0 0 M H
z , C D
3
O D )
:
1 2 6
.
6 ( s
,
-C 1 )
,
1 1 5
.
1 ( d
,
-C
2 )
,
1 4 9
.
5 ( s
,
G 3 )
,
1 4 7
.
0 ( s
,
-C 4 )
,
1 1 6
.
1 ( d
,
G S )
,
1 1 6
.
2 ( d
,
-C 6 )
,
1 4 4
.
6 ( d
,
-C 7 )
,
1 2 1
.
2 ( d
,
-C 8 )
,
1 6 9
.
1 ( s
,
-C
9 )
。
化合物 2 : C 。 H 。 O 。 ,无色针晶 ,硫酸乙 醇显红色 , m . .P
1 7 2一 1 7 4℃ ; 1 H N M R ( m u l t , J , H z ) ( C : D : N ) : 7 . 6 7 ( I H ,
d
,
J一 1 6 . 0 H z , H 一 7 ) , 7 . 3 5 ( I H , d , J 一 2 . 0 H z , 州 2 ) ,
6
.
9 4 ( I H
,
d d
,
J 一 2 . 0 , 8 . 0 H z , H 一 6 ) , 6 . 9 3 ( I H , d , J 一
8
.
0 H z
, 州 5 ) , 6 . 2 0 ( I H , d , J一 1 6 . 0 H z , 州 8 ) , 3 . 4 7
( 3 H
, s , O C H 3 ) ;
1 3
C N M R ( 4 0 0 M H
z , C
:
D
:
N )
:
1 2 6
.
5 ( s
,
-C 1 )
,
1 1 4
.
4 ( d
,
-C 2 )
,
1 5 0
.
2 ( s
,
-C 3 )
,
1 4 7
.
4 ( s
,
G 4 )
,
1 1 5
.
5 ( d
,
G S )
,
1 1 6
.
5 ( d
,
-C 6 )
,
1 4 5
.
7 ( d
,
-C 7 )
,
1 2 1
.
9
( d
,
-C 8 )
,
1 6 7
.
6 ( s
,
-C 9 )
,
5 1
.
2 ( q
,
-C I O )
。
4
.
2 化合物 鉴定
化合物 1 : 淡黄色结晶 , 遇三氯化铁显黑色 。 m . p . 1 8 8
一 1 9 0 0C ; 1 3 C N M R 中 己1 6 9 . 1 ( 、 )显示化合物 1 具有 1 个共
骊碳基信号 , I H N M R 己H 7 . 8 2 ( I H , d , J 一 1 6 . O H z ) , 6 .
5 2 (l H
,
d
,
J 一 1 6 . 0 H )z 提示化合物 1 具有 Z 型双键 。 将
其 N M R 数据与咖啡酸对照 ,基本一致 ,确定化合物 1 为咖
啡酸 。
化合物 2 : 无色针晶 , m . p . 1 7 2一 1 7 4 ℃ ; 将其 N M R 数
据与阿魏酸对照 , 基本一 致 , 只是多了 一 个甲氧基信号 , 确
定 2 为阿魏酸 。
5 讨论
实验结果表 明 ,经过 提取 ,分 步萃取 , 运用 正相 硅胶 、
s eP h
a d e x L什 20 、 O D s 等柱层析手段联合 H P L C 可以从狭
基线纹香茶菜中分离 、 纯化 阿魏酸 、 咖啡酸 ,且能通过化学
方法及质谱分析鉴定其结构 。
为了更好地达到分离纯化 目的 , 首先对狭基线纹香茶
菜药材进行了预试验 , 初步探索证明基线纹香茶菜药材中
含有机酸 、 酚类化合物和赣质等化学成分 。 分离纯化时用
硅胶层析法对提取物 进行纯化富集 , 并对其 中主要两个馏
分采用 柱 层析 进 行洗 脱 , 最 后得 到 两个 化合 物 , 并通 过
N M R
、
M S 等波谱分析鉴定其分别为阿魏酸和咖啡酸 。 综
上所述 ,本法操作简单 ,结果可信 ,值得推广应用 。
H 3 C O
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厂|
H O
H O方~ C O 。 日 参考文献 :乃~ c 。 。 日
工阿魏酸 2 咖啡酸
图 1 阿魏酸与咖啡酸结构
4 结果
4
.
1 物 理常数 与波谱数据
化合物 1 : C 。 H 。 O 。 , 淡 黄 色 结 晶 , 三 氯 化 铁显 黑 色 。
m
.
p
.
1 88一 1 9 0 0C ; I H N M R ( m u l t , J , H z ) (C D 3 O D ) : 7 . 8 2
张鹰 , 施鉴芝 . 溪黄草水提取物 及 其抑菌效 果 研究 [ J习. 包装
与食 品机械 , 2 0 1 2 ( 2 ) : 2 1一 2 4 .
江苏新医学院 . 中药大辞典 (下 册 ) [ M习. 上海 : 上海科学出版
社 , 1 9 7 7 : 2 5 2 2 5 .
程培元 , 郭跃伟 , 许美娟 . 香茶菜属植物的研究概况 及药 用 前
景展 望 [ J习. 中药通报 , 19 8 7 ( 1 2 ) : 5一 1 0 .
陈林蛟 , 李植华 , 赖小 平 . 世 界香茶菜属植物地理分布及 其药
用前景 [ J习. 中药材 , 1 9 9 6 ( 4 ) : 1 6 9一 1 7 4 .
(责任编辑 : 尹晨茄 )