全 文 ：HPLC测定狼毒大戟中狼毒乙素的含量
李　兵 ,郭环娟(江门市恒健药业有限公司 ,广东 江门 529040)
摘　要:目的　建立 HPLC法测定狼毒大戟中狼毒乙素含量的方法。方法　色谱柱为 C18柱 , 流动相为甲醇 -水(70∶30), 流
速:1.0 ml/min,检测波长为 254 nm, 进样量 20 μl。结果　狼毒乙素在 9.6 ～ 48 μg/ml浓度范围内线性关系良好 , r=0.9992。
平均回收率为 100.2%, RSD为 1.1%(n=5)。结论　本方法分离度良好 , 结果准确可靠 ,可用于狼毒大戟的含量测定。
关键词:HPLC;狼毒大戟;狼毒乙素
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1673-4610(2008)01-0046-02
作者简介:李兵(1970-), 男 ,本科 , 制药工程师 ,从事药品质量管理工作。
　　狼毒大戟 EuphorbiafischerianaSteud为大戟科
植物 ,是中药狼毒的原植物之一 ,以根入药 。具有散
结 、杀虫的功效。近年来 ,更发现该药具有抗肿瘤活
性 [ 1] 。但其毒性强大(按毒性中药材管理),且现时
对该药材的验收质量标准依旧沿用 《中国药典 》
1977年版 [ 2] ,该标准中没有对药材含量进行检测 ,
致使未能有效性确保原药材质量及对毒性成分的控
制 ,是该药材未能广泛应用于临床的主要原因 。笔
者运用高效液相色谱法 [ 3]测定狼毒大戟中的狼毒
乙素的含量 ,能得到满意的结果 ,该方法简便 、灵敏 、
准确 ,能有效控制狼毒大戟的质量。
1　仪器与试药
岛津 LG-2010A高效液相色谱仪 ,浙江大学
N2000色谱工作站;SartoriusBP211D电子分析天平;
JL-180DTH超声波清洗器。
对照品:狼毒乙素(江西万基药物研究院有限
责任公司 ,纯度≥99.9%,批号:46113-0601);狼毒
大戟(3批 ,厂家批号分别为:20060312、20060620、
20060802。);甲醇为色谱纯 ,水为双蒸馏水(自制),
其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:AichromC18柱 (250 mm×4.6 mm, 5
μm,大连依利特科学仪器有限公司);柱温:30℃;流
动相:甲醇 -水(70∶30);流速:1.0 ml/min;检测波
长为 254nm,进样量:20μl;理论板数按狼毒乙素计
算 ,应不低于 2000;与杂质峰的分离度应大于 1.5,
见图 2。
　　图 1　空白色谱图 　　图 2　对照品色谱图 图 3　样品色谱图
　　T溶剂峰:2.114 min 　　T狼毒乙素峰:4.999min T狼毒乙素峰:4.978min;其它为杂质峰
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取狼毒乙素对
照品约 12mg,置 50 ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀(240 μg/ml),再精密量取 5 ml,置 50
ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对
照品溶液(24 μg/ml)。
2.2.2　供试品溶液的制备　取本粉末约 3.5 g(过
二号筛),精密称定 ,精密加入甲醇 50 ml,称重 ,摇
·46· 今日药学　2008年第 18卷第 1期
匀 ,超声 20min,取出 ,放冷 ,称重 ,加甲醇补足减失
的重量 ,用微孔滤膜滤过(0.45 μm),作为供试品溶
液 。
2.3　线性考察
分别精密吸取上述对照品溶液(240 μg/ml)
2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 m1,分别置 50 ml量瓶中 ,
加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制得含狼毒乙素
9.6、19.2、28.8、38.4、48 μg/ml的各 5个浓度的溶
液 。分别精密吸取 20 μl进样 ,按上述色谱条件测
定 ,记录色谱图。以峰面积(Y)对溶液浓度(X)进
行回归处理 ,得方程:Y=83306.09X-2858.7,相关
系数 r=0.9992。结果表明 , 狼毒乙素在 9.6 ～
48μg/ml浓度范围内线性关系良好 。
2.4　精密度试验
精密吸取对照品溶液(24μg/ml)20 μl,连续进
样 5次。考察其精密度 ,以峰面积计 , RSD=0.3%。
2.5　稳定性试验
取同一样品溶液 ,平行测定 5次 ,每次间隔 1 ～
2h,计算样品含量 , RSD=0.6%。结果表明 ,样品
在 8 h内稳定。
2.6　重复性试验
取同一批样品共 5份 ,按供试品溶液制备方法
制得 ,分别测定 ,以样品含量计算 RSD=0.6%。结
果表明 ,重复性良好 。
2.7　加样回收试验
精密称取已知含量的同一狼毒大戟样品 (批
号:20060620)1.0 g,共 5份 ,分别精密加入狼毒乙
素对照品适量 ,按供试品溶液的制备方法制备溶液 ,
按上述色谱条件测定峰面积 ,结果见表 1。
表 1　加样回收试验结果
取样量(g) 样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1.0882 0.4570 1.56 2.0508 101.7
1.1073 0.4651 1.48 1.9571 100.6
1.1004 0.4622 1.50 1.9537 99.6 100.2 1.1
0.9833 0.4130 1.53 1.9510 100.4
1.0950 0.4599 1.49 1.9234 98.6
　平均回收率为 100.2%, RSD为 1.1%(n=5)。
2.8　样品含量测定
分别取 3批样品 ,按规定方法制备样品溶液及对
照品溶液 ,分别测定狼毒乙素的含量 ,结果见表 2。
表 2　3批样品中狼毒乙素的含测结果
批号 平均含量(%) RSD(%)(n=4)
20060312 0.036 1.3
20060620 0.042 1.4
20060802 0.048 1.4
3　讨论
狼毒乙素是狼毒大戟的有效成分 ,具有毒性 ,确
立本法进行含量测定能有效地控制药材的质量 ,对
中药提取工序有积极的意义。
采用甲醇作溶剂 ,并超声 20 min,提取效果较
好。曾以三氯甲烷 、乙醇等作溶剂 ,提取效果均不及
甲醇 。以甲醇作溶剂 ,不作超声处理 ,提取效果不比
经 20 min超声处理的提取效果理想。
本方法的分离度好 ,且操作简便 ,结果准确可
靠 ,可用于狼毒大戟的含量测定 。建议标准修订时
采用 。
参考文献:
[ 1]何郁芳 ,谢秀娟 , 王美英.狼毒的药理作用和化学成分研
究进展 [ S] .河南科技大学学报(医学版), 2004, 22
(1):79-80.
[ 2]中华人民共和国药典委员会.中国药典(1977年版一部)
[ S] .北京:人民卫生出版社 , 1977:487-488.
[ 3]中华人民共和国药典委员会.中国药典(2005年版一部)
[ S] .北京:化学工业出版社 , 2005:附录 33-35.
(收稿:2007-07-27;修回:2007-10-07)
·47·今日药学　 2008年第 17卷第 1期