全 文 ：第 31 卷第 4 期
2011 年 8 月
林 产 化 学 与 工 业
Chemistry and Industry of Forest Products
Vol． 31 No． 4
Aug． 2011
紫外分光光度法测定白千层枝和叶总三萜酸含量
收稿日期:2011 － 04 － 06
基金项目:海南省自然科学基金项目(20804)
作者简介:范超君(1987 －) ，男，湖北孝感人，硕士生，主要从事天然药物化学研究工作;E-mail:498209577@ qq． com
* 通讯作者:毕和平，教授，主要从事天然药物化学研究工作;E-mail:bhphx@ hainnu． edu． cn。
FAN Chao-jun
范超君，鲍长余，毕和平* ，陈湛娟
(海南师范大学省部共建热带药用植物化学教育部重点实验室;
化学与化工学院，海南 海口 571127)
摘 要: 以 5 %香草醛－冰乙酸和高氯酸为显色剂，测定白千层枝和叶中三萜酸的总含量。熊果酸
对照品在0． 20～1． 60 mg /L范围内呈良好线性关系，其回归方程为 A =0． 154 8C +0． 028 6，r =0． 999 3。
结果表明白千层枝中三萜酸的总质量分数约为 1． 096 %，叶中三萜酸的总质量分数约为 1． 017 %。
关键词: 白千层;三萜酸;紫外分光光度法
中图分类号:TQ351 文献标识码:A 文章编号:0253 － 2417(2011)04 － 0075 － 04
Ultra-violet Spectrophotometric Determination of Triterpenoidic Acid
in the Stems and Leaves of Melaleuca leucadendra
FAN Chao-jun，BAO Chang-yu，BI He-ping，CHEN Zhan-juan
(Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education;College of Chemistry and Chemical Engineering，
Hainan Normal University，Haikou 571127，China)
Abstract:The total content of triterpenoidic acid in the stems and leaves of Melaleuca leucadendra Linn． was determined using
5 % vanillin-acetic acid and perchloric acid as color system． Ursolic acid had a better linear relationship in the range of 0． 20－
1． 60 mg /L and its regression equation was A = 0． 154 8C + 0． 028 6(r = 0． 999 3)． The results showed that the total mass fractions
of triterpenoidic acid in the stems and leaves of M． leucadendra were 1． 096 % and 1． 017 % respectively．
Key words:Melaleuca leucadendra Linn．;tritepenoidic acid;ultra-violet spectrophotometric method
白千层(Melaleuca leucadendra Linn．)属桃金娘科白千层属植物，又名脱皮树、千层皮、玉树、玉蝴蝶
等，原产澳大利亚，我国海南、广东、广西、福建、台湾均有分布，其精油具有镇痛、驱虫及防腐等功效，可
治牙痛、耳痛、风湿痛及神经痛等［1］。近年来已有学者对部分不同品种和不同产地的白千层叶挥发油
成分进行了研究［2－4］。三萜酸具有护肝、免疫调节、抗抑郁、降低胆固醇、降血糖、抗炎、抗菌、抗病毒、
抗 HIV、抗肿瘤等活性［5－6］。三萜酸的总含量测定多采用重量法和比色法［7］，考虑到重量法实验操作复
杂，且受试剂用量、反应时间、反应温度等诸多因素影响较为显著，本研究以熊果酸为对照品，以质量分
数 5 % 的香草醛－冰醋酸和高氯酸系统为显色剂，采用紫外分光光度法［8－13］测定白千层枝和叶中三萜
酸的总含量，旨在为白千层的开发和利用提供科学依据。
1 实验部分
1． 1 材料
白千层采自海南师范大学校园内，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴定为桃金娘科白
千层属植物白千层(Melaleuca leucadendra Linn．)的枝和叶，标本现存于海南师范大学海南省热带药用
植物化学重点实验室。
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1． 2 仪器
UV2600 紫外分光光度计(上海国美科学仪器有限公司) ;EYEL4OSB－2100 旋转蒸发仪(日本东京
理化) ;索氏提取器等。
1． 3 试剂
无水乙醇，香草醛，高氯酸，冰乙酸均为国产分析纯;熊果酸标准品购自上海顺勃生物工程有限公司
(纯度大于 99． 0 %)。
1． 4 对照品溶液的制备
参照文献［13－18］并作改进。精密称取熊果酸对照品 20． 0 mg，置于 50 mL 容量瓶中，用无水乙醇
定容得质量浓度为 0． 400 g /L的溶液，精确移取 2． 5 mL，置于 100 mL 容量瓶中用无水乙醇定容得质量
浓度为 0． 010 g /L的对照品溶液。
1． 5 样品溶液的制备
将粉碎并干燥过的白千层枝、叶各准确称取 2． 00 g，用无水乙醇浸泡 2 h，索式提取 8 h，回收乙醇
后，再用无水乙醇溶解并定容至 100 mL。枝提取物准确吸取 5． 0 mL于 100 mL容量瓶中，叶提取物准确
吸取 2． 5 mL于 100 mL容量瓶中，用无水乙醇定容得样品溶液。
2 结果与分析
2． 1 测定波长的选择
熊果酸对照品溶液(空白对照为不加对照品溶液用乙醇稀释至刻度的混合溶液)5． 0 mL 加 5 % 香
草醛－冰乙酸 0． 2 mL，高氯酸 0． 8 mL显色后，在波长范围 400～800 nm 内进行全波长扫描。结果表明，
对照品溶液在 546 nm处有最大吸收峰(见图 1) ，故选择 546 nm作为样品测定的波长。
2． 2 标准曲线的绘制
准确吸取对照品溶液 0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0、1． 2、1． 4 和 1． 6 mL分别置于 8 个已编号的 10 mL
容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却，各加入 5 % 香草醛－冰乙酸溶液 0． 2 mL，高氯酸 0． 8 mL，将容量
瓶放入 80 ℃ 水浴中加热 10 min，冷却至室温，用冰乙酸定容，在 546 nm波长处测定吸光度值(A) ，随行
空白对照。以熊果酸质量浓度(mg /L)为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图得到标准曲线如图 2。
图 1 对照品紫外吸收图
Fig． 1 UV absorption spectrum of reference material
图 2 标准曲线
Fig． 2 Standard curve
回归方程 A = 0． 154 8C + 0． 028 6，r = 0． 999 3，其中 C为质量浓度(mg /L) ，A为吸光度。线性范围为
0． 2～1． 6 mg /L。
2． 3 稳定性实验
取对照品和样品溶液各 5 mL，按 2． 2 节方法处理，每隔 10 min 测定一次吸光度，结果表明，本实验
方法在 1． 5 h内基本稳定。
2． 4 精密度实验
取同一批样品液，按 2． 2 节方法处理，定容至 50 mL，进行 5 次平行实验，测定吸光度，结果见表 1。
第 4 期 范超君，等:紫外分光光度法测定白千层枝和叶总三萜酸含量 77
枝和叶提取物样品溶液吸光度的相对标准偏差(RSD)分别为 0． 575 % 和 1． 096 %，精密度良好。
表 1 精密度实验
Table 1 Precision tests
提取物 extracts
吸光度(A)absorbance
1 2 3 4 5 平均值average absorbance
RSD /%
枝提取物 extract of stems 0． 2052 0． 2028 0． 2041 0． 2022 0． 2039 0． 2036 0． 575
叶提取物 extract of leaves 0． 1089 0． 1094 0． 1082 0． 1087 0． 1113 0． 1093 1． 096
2． 5 加样回收率实验
准确量取 5 份已知含量的白千层枝、叶提取液各 5． 0 mL，准确加入一定量的熊果酸对照品，按 2． 2
节方法处理，定容至 50 mL，结果见表 2。结果表明，枝提取物样品溶液三萜酸平均加样回收率为
99． 60 %，RSD =2． 450 %，叶提取物样品溶液三萜酸平均加样回收率为 100． 24 %，RSD 1． 410 %。
表 2 加样回收率实验
Table 2 Recovery tests
提取物
extracts
三萜酸 /μg
tritepenoidic
acid
加入对照品量 /μg
amount of reference
material
测得量 /μg
measuring value
回收率 /%
recovery
平均回收率 /%
average
recovery
RSD /%
1092． 8 1000 2137． 0 102． 11
1087． 3 1000 2000． 1 95． 82
枝 stems 1104． 2 1000 2077． 7 98． 74 99． 60 2． 450
1086． 5 1000 2108． 2 101． 04
1107． 2 1000 2112． 9 100． 27
1015． 7 1000 2001． 6 99． 30
1017． 8 1000 2023． 0 100． 26
叶 leaves 1013． 9 1000 2036． 5 101． 12 100． 24 1． 410
1019． 5 1000 1988． 8 98． 48
1017． 3 1000 2058． 3 102． 03
2． 6 样品含量测定
准确量取 3 份白千层枝、叶供试品溶液各 5． 0 mL，按 2． 2 节方法处理，定容至 50 mL，在 546 nm 波
长处测定吸光度值并计算含量，计算公式为 C =106 mw ×(v /100)×(5 /100)/50(mg /L) ，A =0． 154 8 C +
0． 028 6，式中 m为原料的质量(g) ，w为枝(叶)中三萜酸的总质量分数，v 为 1． 5 节吸取提取液的体积
(mL)。结果白千层枝的三萜酸总质量分数为 1． 096 %，RSD 0． 367 %;叶的三萜酸总质量分数为
1． 017 %，RSD 0． 435 %(见表 3)。
表 3 样品含量
Table 3 Determination results of samples
样品
samples
吸光度(A)absorbance measurements
1 2 3 平均值average
RSD%
三萜酸总质量分数 /%
total mass fraction of
tritepenoidic acids
平均值 /%
average
0． 1958 0． 1968 0． 1972 0． 1966 1． 085
枝 stems 0． 1998 0． 2011 0． 2012 0． 2007 0． 367 1． 112 1． 096
0． 1970 0． 1978 0． 1977 0． 1975 1． 091
0． 1050 0． 1059 0． 1053 0． 1054 0． 992
叶 leaves 0． 1092 0． 1097 0． 1093 0． 1094 0． 435 1． 044 1． 017
0． 1069 0． 1074 0． 1073 0． 1072 1． 015
3 结 论
直接以无水乙醇作为溶剂，采用了香草醛－冰乙酸－高氯酸比色法进行测定，熊果酸对照品在
0． 20～1． 60 mg /L范围内呈良好线性关系，其回归方程为 A = 0． 154 8C + 0． 028 6，r = 0． 999 3。结果表明
78 林 产 化 学 与 工 业 第 31 卷
白千层枝中三萜酸的总质量分数约为 1． 096 %，叶中三萜酸的总质量分数约为 1． 017 %。该方法简便
可靠，结果稳定，重复性好，可用于白千层的质量控制。
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