全 文 ：·基础研究·
苗药头花蓼含药血清对巨噬细胞释放炎症因子的影响*
＊
徐 丹1＊＊，赵菲菲1，2，杨 馨1，2，刘 俊1，李 靖1，徐国波1，廖尚高1＊＊＊
(1．贵州医科大学 药学院 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州 贵阳 550004;2．贵州医科大学 贵州省药物制剂重点实验
室，贵州 贵阳 550004)
［摘 要］目的:探讨苗药头花蓼对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞(ＲAW264. 7)释放炎症因子的影响。
方法:制备苗药头花蓼水提醇沉提取物的含药血清(PCWEPS )，采用 10 μg /L脂多糖(LPS)建立 ＲAW264. 7 细
胞炎症损伤模型，Griess试剂法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量，酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上
清液中肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白介素 6(IL-6)的表达，实时荧光定量 PCＲ法(Ｒeal Time-PCＲ)检测 TNF-α及
IL-6 mＲNA的表达水平，Western blot 法检测 NF-κB通路中 I-κBα蛋白和 p-I-κBα蛋白表达水平。结果:与模型
组比较，3 种给药剂量的 PCWEPS均显著抑制 LPS诱导的 ＲAW264. 7 细胞释放 NO，TNF-α和 IL-6 (P ＜ 0. 001);
PCWEPS能够显著降低 TNF-α和 IL-6 mＲNA的表达水平(P ＜ 0. 001)，下调 p-I-κBα蛋白的表达(P ＜ 0. 001)，降
低 NF-κB通路中 I-κBα蛋白的磷酸化。结论:头花蓼抑制巨噬细胞中炎症因子释放，可能与抑制 NF-κB通路中
I-κBα的磷酸化有关。
［关键词］植物药;头花蓼;单核巨噬细胞;炎症因子;NF-κB通路
［中图分类号］Ｒ965． 2 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707(2016)06-0635-05
DOI:10． 19367 / j． cnki． 1000-2707． 2016． 06． 004
Effect of the Drug-containing Serum of Miao Medicine Polygonum
capitatum on Inflammatory Cytokines in Macrophages
XU Dan1，2，ZHAO Feifei1，3，YANG Xin1，3，LIU Jun1，2，LI Jing1，2，XU Guobo1，2，LIAO Shanggao1，2
(1． School of Pharmacy，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China;2． Engineering Ｒesearch Center for the
Development and Application of Ethnic Medicines and TCM，Ministry of Education，Guiyang 550004，Guizhou，China;
3． Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，Guiyang 550004，Guizhou，China)
［Abstract］Objective:To investigate the effect of Miao medicine Polygonum capitatum on inflamma-
tory cytokines released from Lipopolysaccharide (LPS)-induced monocyte macrophage (ＲAW264． 7)
in mice． Methods:The drug-containing serum (PCWEPS)of Polygonum capitatum was prepared by
classical water extraction and alcohol precipitation method． The inflammatory damage model of
ＲAW264． 7 cells was established by 10 g /L lipopolysaccharide (LPS)． NO content was detected by
the Griess assay，the protein expression of TNF-α and IL-6 expression were detected by ELISA in the
cell culture supernatant，the mＲNA expression of TNF-α and IL-6 were determined by Ｒeal Time-
PCＲ，and the protein expressions of I-κBα and p-I-κBα in NF-κB pathway were measured by Western
blot． Ｒesults:Compared with the model group，the PCWEPS of 3 kinds of different doses could signif-
icantly inhibit the release of NO，TNF-α and IL-6 in LPS-induced ＲAW264． 7 cells (P ＜ 0． 001)． In
addition，PCWEPS could significantly decrease the mＲNA expression levels of TNF-α and IL-6 (P ＜
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第 41 卷 第 6 期
2016 年 6 月
贵 州 医 科 大 学 学 报
JOUＲNAL OF GUIZHOU MEDICAL UNIVEＲSITY
Vol． 41 No． 6
2016． 6
* *［基金项目］国家自然科学基金(81160516;81560570;81260688)
＊＊贵州医科大学 2013 级硕士研究生
＊＊＊通信作者 E-mail:lshangg@ 163． com
网络出版时间:2016 － 06 － 16 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /52． 5012． Ｒ． 20160616． 1725． 050． html
0． 001)，down-regulated the protein expression of p-I-κBα protein (P ＜ 0． 001)and decrease phos-
phorylation of I-κBα protein in NF-κB pathway (P ＜ 0． 001)． Conclusion:P． capitatum can inhibit
the inflammatory cytokines release from the macrophage cells，and the mechanism may be related to its
inhibition of phosphorylation of I-κBα protein in NF-κB pathway．
［Key words］plant medicine;Polygonum capitatum;mononuclear macrophage;inflammatory factors;
NF-κB pathway
头花蓼(polygonum capitatum Buch-Ham． ex
D． Don)为蓼科蓼属植物头花蓼的干燥全草具有
利尿通淋之功效，临床上主要用于泌尿系统感染疾
病的治疗［1］。研究表明，头花蓼水提物及 70%乙
醇提取物具有显著的抗炎活性［4］，其中的三萜、甾
体和黄酮类化合物与抗炎活性密切相关［5］，但头
花蓼的抗炎机制尚不明确。活化的单核 －巨噬细
胞是炎症反应中细胞因子的重要来源，当受到刺激
时，单核细胞会转移至血管外组织成为巨噬细胞，
激活后的巨噬细胞产生一氧化氮(NO)、肿瘤坏死
因子 α(TNF-α)和白介素 6(IL-6)等细胞因子，对
机体环境中的内皮细胞、上皮细胞和间质细胞产生
影响，并对宿主的免疫反应、组织重建修复等发挥
重要作用［6 － 7］。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是
诱导巨噬细胞释放炎症介质的有效物质，诱导巨噬
细胞释放炎症因子模型被广泛用于抗炎药物的筛
选评价［8 － 9］。本研究通过考察头花蓼水提醇沉提
取物含药血清(PCWEPS)对 LPS 诱导的 ＲAW264．
7 细胞释放炎症因子的影响，探讨头花蓼的抗炎作
用及其作用机制。
1 材料与方法
1. 1 试药与试剂
头花蓼药材(贵州省施秉县头花蓼 GAP 种植
基地)，阳性对照药醋酸地塞米松磷酸钠注射液
(贵州光正制药有限责任公司产品，国药准字
H52020793，批号 130315)。DMEM 高糖培养基
(Gibco 公司，批号 8114410)，胎牛血清(Hyclone
公司，批号 NZE1145)，LPS(Sigma 公司，批号
102M4017V)，MTT(Sigma 公司，批号 M1959);磺
胺(批号 30172216)，N-(1-萘基)-乙二胺(批号
80088013)，DMSO(批号 302A0323)，均购于国药集
团。小鼠 TNF-α 、IL-6ELISA 试剂盒(ＲayBio 公司，
批号 0313150430、0313150413)，AxyPrep 总 ＲNA 小
量制备试剂盒(康宁生命科学有限公司，批号
12213KD1)，PrimeScriptTM ＲT reagent Kit with gDNA
Eraser(TaKaＲa，批号 AK2802)，SYBＲ Premix Ex
TaqTMⅡ(TaKaＲa，批号 AK6101)，引物(上海生物
工程公司)，SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒(碧云
天，批号 P0012AC)，哺乳动物蛋白抽提试剂盒(康
为世纪，批号 CW0889)，BCA 蛋白浓度测定试剂盒
(Solarbio，批 号 PC0020)，TＲIS (Solarbio，批 号
1128Q0713)，Glycine(Sigma，批号 WXBB6513V)，SDS
(Sigma，批号 L-5750)，I-κBα单克隆抗体(美国 abcam
公司，批号 GＲ181745 －8)，p-I-κBα单克隆抗体(美国
abcam公司，批号 GＲ98748 － 15)，羊抗兔 IgG 抗体
(美国 abcam公司，批号 GＲ209629 － 7)。
1. 2 动物与分组
Wistar大鼠 30 只，雌雄各半，体质量(200 ±
20)g，SPF级，由贵州医科大学实验动物中心提供，
动物合格证号 SCXK(黔)2012 － 0001。根据灌胃
剂量将小鼠随机分为 18、54、162 g /(kg·d)头花
蓼水提醇沉提取物组(PCWEP，分别对应头花蓼单
方制剂热淋清颗粒临床剂量的 3、9 和 27 倍)，每组
10 只。灌胃前 12 h 禁食不禁水，尾静脉采集空白
血，然后按不同剂量灌胃 PCWEP，2 次 /d，连续4 d，
末次给药后 90 min 尾静脉取血［10］。以 2 000 r /
min，4 ℃离心 10 min 分离上层血清，合并同组血
清，过滤除菌，分装，－ 20 ℃保存备用。
1. 3 方法及考察指标
1. 3. 1 ＲAW264. 7 细胞活性 ＲAW264. 7 细胞培
养于含10%胎牛血清，100 mg /L青霉素及100 mg /L
链霉素的 DMEM 细胞培养液中，置于温度为
37 ℃，5% CO2 培养箱中培养。取对数生长期细
胞，用 0. 25%胰蛋白酶消化，以 2 × 105个 /mL 的浓
度接种于 96 孔培养板中，每孔体积 100 μL，细胞
培养 24 h 后，弃去上清液。实验分为对照组:无大
鼠血清的培养基，实验组:不同体积分数(0. 5%、
1. 0%、1. 5% 及 2. 0%，V/V)的空白血清或 PC-
WEPS，培养 24 h后，每孔加入 2. 5 g /L MTT 10 μL，
继续孵育 4 h，吸弃上清液，加入 DMSO 100 μL，振
636
贵 州 医 科 大 学 学 报 41 卷
荡 10 min后，在酶标仪上于 490 nm 波长处测定
吸光度(A)，每组设 6 个平行孔。按照公式计算:
细胞存活率 = 实验组 A /对照组 A 平均值 ×
100%。
1. 3. 2 ＲAW264. 7 细胞释放 NO 的检测 前期研
究发现，当空白血清体积(V /V)为 1. 5% 时，既不
影响 ＲAW264. 7 细胞的生长，也不影响 LPS 刺激
所产生的 NO释放的检测，因此确定实验中含药血
清的添加体积(V /V)为 1. 5%。参照 1. 3. 1 项，实
验分为对照组(无大鼠血清的培养基)、模型组(终
浓度为 10 μg /L的 LPS溶液)、DEXA组(终浓度为
50 mg /L的地塞米松和 10 μg /L的 LPS混合液)及
不同剂量 PCWEPS 组(终浓度为 10 μg /L 的 LPS
和体积分数(V /V)为 1. 5%的不同剂量含药血清，
与细胞共培养，每组设 6 个平行孔)。计算 NO 释
放量。
1. 3. 3 ＲAW264. 7 细胞释放 TNF-α 及 IL-6 的检
测 参照 1. 3. 2 项，收集 ＲAW264. 7 细胞上清液，
每组设 6 个平行孔，TNF-α 和 IL-6 的释放量采用
ELISA试剂盒提供的方法进行测定，根据标准曲线
计算 TNF-α和 IL-6 的释放量。
1. 3. 4 ＲAW264. 7 细胞 TNF-α 和 IL-6 mＲNA 表
达水平 取对数生长期 ＲAW264. 7 细胞，用
0. 25%的胰蛋白酶消化，以 2 × 105个 /mL 的浓度
接种于 6 孔培养板中，每孔体积 2 mL，细胞培养
24 h后，弃去上清液。参照 1. 3. 2 项，培养 24 h后，
采用 AxyPrep 总 ＲNA 小量制备试剂盒提取总
ＲNA，TaKaＲa 试剂盒反转录为 cDNA，按照 SYBＲ
Green试剂盒说明扩增 TNF-α及 IL-6 目的条带，每
组设 3 个平行孔。引物由上海生物工程公司合成，
TNF-α 上游引物 5-CAGGCGGTGCCTATGTCTC-3，
下游引物 5-CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG-3;IL-
6上游引物 5-CTGCAAGAGACTTCCAYCCAG-3，下
游引物 5-AGTGGTATAGACAGGTCTGTTGG-3。内
参照为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)引物，上游
引物 5-AGTATGACTCCACTCACGGCAAAT-3，下
游引物 5-GTCTCGCTCCTGGAAGATGGT-3。根据
2 －△△Ct，以 GAPDH 为参照，进行 TNF-αmＲNA 及
IL-6 mＲNA相对定量分析。
1. 3. 5 ＲAW264. 7 细胞 I-κBα 和 p-I-κBα 蛋白表
达 参照 1. 3. 4 项，ＲAW264. 7 细胞培养 6 h 后，
哺乳动物蛋白抽提试剂盒提取蛋白样本，BCA 蛋
白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度后定量，每孔为
40 μg上样。采用两步法进行实验，10%十二烷基
硫酸钠 －聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离
总蛋白，通过蛋白快速转印仪将蛋白转移至聚偏氟
乙烯膜(PVDF 膜)上，TBST 洗涤 3 次，5%牛血清
白蛋白(BSA)封闭 2 h，TBST 洗涤 3 次，用封闭液
分别按 1∶ 1 000 和 1∶ 10 000 稀释 I-κBα 和 p-IκBα
抗体，室温震荡孵育 2 h，4 ℃过夜，TBST 洗涤 3
次，用 TBST按 1∶ 5 000 稀释羊抗兔 IgG抗体，室温
震荡孵育 2 h，TBST洗涤 3 次，用 ECL 超敏发光液
显影，于凝胶成像仪中曝光并记录结果，使用
Quantity One v4. 62 软件对条带进行定量分析，并
以 β-actin为内参标化蛋白电泳条带的灰度值。
1. 4 数据分析
采用 SPSS 19. 0 统计软件进行分析，结果用(x
± s)表示。单因素方差分析(One-Way ANOVA)
后，用 Dunnetts test 分析方法比较组间差异，两组
间比较采用 T-test 法，P ＜ 0. 05 时具有统计学意
义。
2 结果
2. 1 ＲAW264. 7 细胞活性
当空白血清及不同剂量 PCWEPS 体积分数
(V /V)为 0. 5% ～ 1. 5%作用于 ＲAW264. 7 细胞
24 h时，与对照组比较，ＲAW264. 7 细胞存活率无
显著性差异，提示在此体积范围内空白血清及含药
血清对于 ＲAW264. 7 细胞本身的生长无显著影
响;超过此添加量，随着血清体积的增加，
ＲAW264. 7 细胞的生长受到显著影响。为有效反
映药物的药效，在后续实验中，血清体积分数(V /
V)设定为 1. 5%。见表 1。
2. 2 对 ＲAW264. 7 细胞释放 NO的影响
与对照组比较，模型组显著刺激 ＲAW264. 7
细胞释放 NO(P ＜ 0. 001);与模型组比较，不同剂
量的 PCWEPS均能抑制 ＲAW264. 7 细胞释放 NO，
且呈剂量依赖性(P ＜ 0. 001)。见表 2。
2. 3 ＲAW264. 7 细胞释放 TNF-α及 IL-6
与对照组比较，模型组显著刺激 ＲAW264. 7
细胞释放 TNF-α 和 IL-6(P ＜ 0. 001);与模型组比
较，不同给药剂量的 PCWEPS均能抑制 ＲAW264. 7
细胞释放 TNF-α 和 IL-6，且呈剂量依赖性(P ＜
0. 001)。见表 3。
2. 4 ＲAW264. 7 细胞 TNF-α，IL-6 mＲNA表达
与对照组比较，模型组显著提高了 ＲAW264. 7
细胞 TNF-α 和 IL-6 mＲNA 的表达水平(P ＜
736
6 期 徐 丹等 苗药头花蓼含药血清对巨噬细胞释放炎症因子的影响
0. 001);与模型组比较，不同给药剂量的 PCWEPS
均能降低 ＲAW264. 7 细胞中 TNF-α 和 IL-6 mＲNA
的表达水平，且呈剂量依赖性(P ＜ 0. 001)。见表
4。
表 1 空白血清及 PCWEPS对细胞
活性的影响(x ± s，n = 6)
Tab． 1 Effect of blank serum and PCWEPS on
the cell viability of ＲAW264． 7 cells
组别 体积分数(V/V)细胞存活(%)
对照 － 100. 00 ± 0. 50
空白血清 0. 5% 100. 76 ± 0. 36
1. 0% 100. 93 ± 0. 37
1. 5% 99. 62 ± 0. 25
2. 0% 94. 32 ± 0. 43 (1)
PCWEPS［g /(kg·d)］
18 0. 5% 101. 31 ± 0. 25
1. 0% 100. 76 ± 0. 25
1. 5% 100. 33 ± 0. 41
2. 0% 96. 25 ± 0. 47 (1)
54 0. 5% 101. 43 ± 0. 15
1. 0% 100. 08 ± 0. 50
1. 5% 99. 01 ± 0. 49
2. 0% 95. 99 ± 0. 38 (1)
162 0. 5% 101. 59 ± 0. 53
1. 0% 101. 09 ± 0. 45
1. 5% 99. 88 ± 0. 24
2. 0% 94. 63 ± 0. 44 (1)
(1)与对照组比较，P ＜ 0. 001
表 2 PCWEPS对 ＲAW264. 7 细胞释放
NO的影响(x ± s，n = 6)
Tab． 2 Effect of PCWEPS on NO production
in ＲAW264． 7 cells
组别 NO(μmol /L)
对照组 1. 59 ± 0. 17
模型组 16. 22 ± 0. 10 (1)
DEXA组 3. 30 ± 0. 18 (2)
PCWEPS［g /(kg·d)］
18 14. 39 ± 0. 19 (2)
54 12. 54 ± 0. 12 (2)
162 10. 25 ± 0. 24 (2)
(1)与对照组比较，P ＜ 0. 001;(2)与模型组比较，P ＜ 0. 001
表 3 PCWEPS对 ＲAW264. 7 细胞释放 TNF-α
和 IL-6 的影响(x ± s，n = 6)
Tab． 3 Effect of the PCWEPS on TNF-α and IL-6
release in ＲAW264． 7 cells
组别 TNF-α(ng /L) IL-6(ng /L)
对照组 1 265. 22 ± 34. 11 97. 94 ± 2. 71
模型组 11 428. 26 ± 27. 32(1) 959. 39 ± 3. 19(1)
DEXA组 2 741. 67 ± 31. 96(2) 175. 89 ± 1. 70(2)
PCWEPS［g/(kg·d)］
18 7 113. 04 ± 30. 71(2) 532. 29 ± 0. 98(2)
54 6 785. 15 ± 17. 90(2) 518. 69 ± 1. 33(2)
162 5 210. 87 ± 31. 09(2) 397. 94 ± 1. 56(2)
(1)与对照组比较，P ＜ 0. 001;(2)与模型组比较，P ＜ 0. 001
表 4 PCWEPS对 ＲAW264. 7 细胞 TNF-α mＲNA
和 IL-6 mＲNA表达的影响(x ± s，n = 3)
Tab． 4 Effect of PCWEPS on TNF-α mＲNA and IL-6
mＲNA expression levels in ＲAW264． 7 cells
组别 TNF-α mＲNA IL-6 mＲNA
对照组 0. 021 ± 0. 001 0. 383 ± 0. 012
模型组 1. 265 ± 0. 003(1)1. 872 ± 0. 058(1)
DEXA组 0. 382 ± 0. 003(2)0. 611 ± 0. 022(2)
PCWEPS［g /(kg·d)］
18 1. 124 ± 0. 001(2)0. 952 ± 0. 032(2)
54 0. 617 ± 0. 006(2)0. 769 ± 0. 059(2)
162 0. 444 ± 0. 003(2)0. 720 ± 0. 047(2)
(1)与对照组比较，P ＜ 0. 001;(2)与模型组比较，P ＜ 0. 001
2. 5 ＲAW264. 7 细胞 I-κBα 蛋白及 p-I-κBα 蛋白
表达
以 β-actin作为内参照，ＲAW264. 7 细胞经 LPS
干预 6 h后，与对照组比较，模型组 p-I-κBα蛋白表
达显著升高(P ＜ 0. 001);与模型组比较，各给药组
含药血清均能抑制 ＲAW264. 7 细胞 p-I-κBα 蛋白
的表达，且呈剂量依赖性(P ＜ 0. 001)。见图 1，表
5。
图 1 PCWEPS对 ＲAW264. 7 细胞
I-κBα蛋白表达的影响
Fig． 1 Effect of PCWEPS on I-κBα protein
expressions in ＲAW264． 7 cells
836
贵 州 医 科 大 学 学 报 41 卷
表 5 PCWEPS对 ＲAW264. 7 细胞 I-κBα
蛋白表达的影响(x ± s，n = 3)
Tab． 5 Effect of PCWEPS on I-κBα protein
expression in ＲAW264． 7 cells
组别 p-I-κBα / I-κBα
对照组 0. 33 ± 0. 01
模型组 1. 94 ± 0. 02(1)
PCWEPS［g /(kg·d)］
18 1. 52 ± 0. 02(2)
54 1. 05 ± 0. 03(2)
162 0. 64 ± 0. 01(2)
(1)与对照组比较，P ＜ 0. 001;(2)与模型组比较，P ＜ 0. 001
3 讨论
头花蓼是贵州苗族民间常用药材，是治疗泌尿
系统感染的良药，具有突出的抗菌和抗炎作用。由
于其化学成分复杂，因此在本研究中，采用头花蓼
含药血清，研究其对 LPS 诱导巨噬细胞炎症因子
的影响，代替中药粗提物作为药物载体既避免了药
物的物理化学性质对实验结果的影响，又能够更好
的模拟药物在体内发挥作用的过程［11］。巨噬细胞
是机体炎症反应的一个重要参与者，在被感染过程
中，被激活的巨噬细胞能释放致炎因子 NO，IL-6 和
TNF-α等炎症因子，促进组织的重建修复;但过量
炎症因子的释放会加重炎症反应，导致组织损伤、
并产生病理变化［12 － 13］。脂多糖是革兰氏阴性菌菌
壁的主要活性成分，是诱导巨噬细胞释放炎症介质
最强烈、最有效的激活物，在革兰氏阴性菌感染中
发挥重要作用［14］。因此，抑制巨噬细胞中 NO，IL-
6 和 TNF-α等致炎因子的过度释放对抗炎治疗意
义重大。本研究结果证实，LPS 诱导巨噬细胞炎症
因子释放增加，PCWEPS能显著降低 TNF-α和 IL-6
mＲNA的水平，并抑制巨噬细胞中 NO，TNF-α 和
IL-6 的释放。
NF-κB是早期核转录因子，在静息状态下，NF-
κB和 I-κB形成复合体存在于胞浆中。I-κB 有多
种亚型，包括 I-κBα、I-κBβ、I-κBγ、I-κBδ、I-κBε、
p100、p105 和 Bcl-3，其中 I-κBα 尤为关键，它在核
内对 NF-κB 的抑制作用最强［15］，因此在本研究中
选取 I-κBα为考察指标，在细菌感染下，LPS 等外
源性诱导剂使 I-κB激酶(IKK)活化，活化后的 IKK
将 I-κB磷酸化(生成 p-I-κBα)，使 NF-κB 和 I-κB
解离，游离的 NF-κB迅速移位到细胞核，启动基因
如 TNF-α，iNOS 的转录和表达，导致炎症的发
生［16］。本研究发现，LPS 能够通过显著促进
ＲAW264. 7 细胞中 I-κBα 的磷酸化从而激活 NF-
κB信号通路，但 PCWEPS 能够有效地抑制这一过
程，提示头花蓼含药血清能够通过抑制 I-κBα 的磷
酸化调控 NF-κB 信号通路，进而抑制炎症因子
NO，TNF-α及 IL-6 的释放。
综上，头花蓼的抗炎作用可能与其调控 NF-κB
信号通路，降低 TNF-α和 IL-6 mＲNA的水平，抑制
炎症因子 NO，TNF-α和 IL-6 的释放有关。研究结
果为深入探讨头花蓼在泌尿系统感染中的作用奠
定了基础，也为头花蓼的进一步开发应用提供了依
据。
4 参考文献
［1］张丽娟，王永林，王珍，等．头花蓼活性组分化学成分研
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中文编辑:潘 娅;英文编辑:刘
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中文编辑:潘 娅;英文编辑:刘 华
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贵 州 医 科 大 学 学 报 41 卷