全 文 ：网络出版时间:2016 － 9 － 22 11:14 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． Ｒ． 20160922． 1114． 056． html
头花蓼的血清药物化学研究
向文英1，2，3，梅朝叶1，3，杨 武1，3，孙 佳1，3，陆 苑1，3，陈思颖1，3，黄 勇1
(1． 贵州省药物制剂重点实验室;2． 国家苗药工程技术研究中心;3．贵州医科大学 药学院，贵州 贵阳 550004)
Serum pharmacochemistry of Polygonum capitatum
XIANG Wen-ying1，2，3，MEI Chao-ye1，3，YANG Wu1，3，
SUN Jia1，3，LU Yuan1，3，CHEN Si-ying1，3，HUANG
Yong1
(1． Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics;2． Na-
tional Engineering Ｒesearch Center of Miao’s Medicine，3．
School of Pharmacy，Guizhou Medical University，Guizhou Guiy-
ang 550004，China)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2016． 10． 028
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2016)10 － 1476 － 02
中国图书分类号:Ｒ-332;Ｒ282． 71;Ｒ284． 1
关键词:头花蓼;血清药物化学;UHPLC-Q-TOF /MS;含药血
清;指纹图谱;移行成分
Key words:Polygonum capitatum;serum pharmacochemistry;
UHPLC-Q-TOF;serum containing drug;fingerprint;compounds
收稿日期:2016 － 06 － 10，修回日期:2016 － 08 － 25
基金项目:国家自然科学基金项目(No 81260688) ;贵州省国际科技
合作计划(No 2012-7040) ，贵州省研究生卓越人才计划项
目(黔教研合 ZYＲC字［2014］J012)
作者简介:向文英(1992 －) ，女，硕士生，研究方向:药物代谢动力学
研究，E-mail:852017994@ qq． com;
黄 勇(1976 －) ，男，博士，教授，研究方向:中药活性成
分及新药开发研究，通讯作者，E-mail:Hujie51619@ sina．
cn
中药血清药物化学是以药物化学的研究手段和方法为
基础，采用现代分析方法鉴定口服中药后血清中药源性成分
及移行成分，它能够直观地分析中药口服后的血液中的形态
表现，快速寻找药效物质基础［1］。
头花蓼(Polygonum capitatum Buch． -Ham． ex D． Don)又
名四季红、石莽草等，属于蓼科多年生草本植物的干燥全草
或地上部分［2］。其味苦、辛，性凉，归肾，具有清热利湿、利尿
通淋等功效，主要用于治疗肾盂肾炎、尿道感染、膀胱炎等疾
病［3 － 5］。但其体内作用成分及代谢过程研究还未见报道，因
此本次研究采用血清药物化学研究方法，和色谱分析等手段
对头花蓼进行了初步研究，为探讨头花蓼提取物在大鼠体内
的主要药效物质基础和提高临床疗效奠定了科学基础。
1 材料
1． 1 仪器与试药 Agilent Technologies 1290 Infinity 液相色
谱系统;ESI-Q-TOF /MS(美国布鲁克道尔顿) ;Allegra 64Ｒ低
温高速离心机(美国 Beckman Coulter 公司) ;CQ 250A-TS 超
声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂) ;MTN-2800D 氮吹
浓缩装置(天津奥特塞恩斯仪器有限公司) ;EL204 电子天平
(梅特勒 －托利多仪器有限公司) ;
头花蓼药材(购自贵州施秉头花蓼 GAP种植基地，由贵
州医科大学药学院生药学教研室龙庆德副教授鉴定) ;对照
品［没食子酸(批号 MB6346)、原儿茶酸(批号 MB6312)、槲
皮苷(批号 MB6680) ，大连美仑生物科技有限公司］;金丝桃
苷、陆地棉苷对照品(自制，经 UV、IＲ、MS、1H-MNＲ、13C-
NMＲ结构确证，HPLC在多个波长检测，其峰面积归一化含
量均大于 98． 0%) ;头花蓼提取物(自制，批号:20130508) ;
乙腈、甲酸(色谱纯，德国 Merck 公司) ;纯净水(广州屈臣氏
食品饮料有限公司) ;其他试剂均为分析纯。
1． 2 动物分组及给药 健康 SD大鼠，体质量为(220 ± 20)
g，由贵州医科大学动物中心提供［批号 SCXK(黔)2002-
0001］。♀♂各半，随机分为 2 组(给药组及空白组) ，每组 6
只，分别给予头花蓼有效组分及蒸馏水，按每次 87 g·Kg －1
(生药量)剂量连续灌胃 3 d，每天 2 次，空白组灌胃同等体
积的蒸馏水。
2 方法
2． 1 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18 ＲＲHD(2. 1
mm × 100 mm，1. 8 μm) ，柱温:45 ℃，流动相:0. 1%甲酸水
(A)－ 0. 1%甲酸乙腈(B)梯度洗脱，进样体积为 2 μL，梯度
洗脱:(0 ～ 10 min，5% B ～ 45% B，10 ～ 14 min，45% B ～
95% B，14 ～ 15 min，95% B ～ 100% B，15 ～ 16 min，100%
B ～ 5% B。
2． 2 质谱条件 电喷雾离子源(ESI) ，扫描方式为负离子扫
描(ESI －，m/z 50 ～ 1 000) ，毛细管电压 3 KV，锥孔电压:80
V，离子源温度:110 ℃，雾化气(N2)压力:1. 2 bar，流速:8. 0
L·min －1，温度 200 ℃，脱溶剂气温度:300 ℃，气体体积流
量:50 L·h －1，脱溶剂气体积流量:550 L·h －1，准确质量测
定采用甲酸钠校正标准液，校正模式选用:Enhanced Quadrat-
ic。数据分析:Data Analysis，Metabolite Detect。
2． 3 供试品的制备 分别于末次给药后 30 min 股动脉采
血，取全血置于 37 ℃恒温水浴上，至上层有黄色液体析出，
4 ℃离心 10 min，置于 － 20 ℃保存，备用。取大鼠血清 0. 5
mL，用甲醇沉淀蛋白，加入 300 μL 50%甲醇水溶液溶解残
留物，UHPLC-ESI-Q-TOF /MS进样分析。
3 结果
在本实验色谱和质谱条件下，大鼠口服头花蓼提取物后
·6741· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2016 Oct;32(10) :1476 ～ 7
Tab 1 Total ion chromatogram of peak retention and vested of Polygonum capitatum
No． Ｒt /min ［M － H］ Productions Assignment
M1 1． 6 169． 0149 125． 0244［M-H-COO］－ Gallic acid
M2 2． 2 262． 9868
125． 0246［M-H-SO3-COO-CH2］－
183． 0286［M-H-SO3］－
Gallic acid methyl sulfated metabolites
M3 2． 5 153． 0192 109． 0295［M-H-COO］－ Protocatechuic acid
M4 5． 1 461． 1846 301． 0349［M-H-SO3-SO3］－ Quercetin double sulfate metabolites
M5 5． 3 463． 0888 301． 0361［M-H-C6H10O5］－ Hirsutrin
M6 5． 4 477． 0675 225［M-H-C6H10O5］－ Quercetin and glucose acid metabolites
M7 5． 4 463． 0872 301． 0353［M-H-C6H10O5］－ Hyperoside
M8 5． 8 491． 1898 477． 1763［M-H-CH2］－ Methyl glucuronidated metabolites of Quercetin
M9 5． 9 491． 1837 477． 1763［M-H-CH2］－ Methyl glucuronidated metabolites of Quercetin
M10 6． 1 447． 0937 301． 0349［M-H-C6H10O4］－ Quercitrin
M11 6． 7 505． 0980 329． 0676［M-H-C6H8O6］－ Two methyl quercetin glucuronidation metabolites
M12 7． 3 519． 0784 343． 0441［M-H-C6H8O6］－ Three methyl quercetin glucuronidation metabolites
M13 7． 8 519． 0761 343． 0441［M-H-C6H8O6］－ Three methyl quercetin glucuronidation metabolites
M14 8． 2 505． 0966 329． 0676［M-H-C6H8O6］－ Two methyl quercetin glucuronidation metabolites
M15 8． 7 519． 0766 343． 0441［M-H-C6H8O6］－ Three methyl quercetin glucuronidation metabolites
M16 9． 1 329． 0664 － Two methylation of quercetin metabolites
M17 9． 8 329． 0675 － Two methylation of quercetin metabolites
M18 11． 8 343． 0822 － Quercetin three methyl metabolites
血清样本中共检测出 18 个移行成分，通过与对照品对照和
题组前期对头花蓼的化学成分研究［6］，确定 5 个为原型成
分，13 个可能为原型成分的代谢产物，其中 1 号指纹峰为没
食子酸，3 号指纹峰为原儿茶酸，5 号指纹峰为陆地棉苷、7 号
指纹峰为金丝桃苷、10 号指纹峰为槲皮苷，见 Tab 1。
4 讨论
本研究建立了 UHPLC-ESI-Q-TOF / MS 对血清的检测方
法，其具有离子传输效率高、传输离子质量范围宽、灵敏度
高、错误率低、重现性高等优点。在头花蓼提取物含药血清
中检测到大量的黄酮类成分槲皮素的葡萄糖醛酸化、甲基
化、硫酸化代谢产物，同时还存在酚酸类成分没食子酸、原儿
茶酸的甲基化、硫酸化代谢产物等，这些成分可能为头花蓼
的体内直接作用物质，对其进行深入的研究，将有助于阐明
头花蓼药效物质基础及药效机制。
参考文献:
［1］ 霍仕霞，彭晓明，高 莉． 维药没食子血清药化初步研究［J］．
中成药，2011，33(10) :1754 － 7．
［1］ Huo S X，Peng X M，Gao L． Pharmacochemistry of traditional Ui-
ghur medicine Calla Turcica［J］． Chin Tradit Patent Med，2011，33
(10) :1754 － 7．
［2］ 唐 丽，刘 跃，黄 勇，等．离体外翻肠囊法研究头花蓼提取
物中 5 个成分的肠吸收特性［J］． 中国药理学通报，2014，30
(7) :1031 － 2．
［2］ Tang L，Liu Y，Huang Y，et al． Study on absorption characteris-
tics of five com ponents from Polygonum capitatum by isolated ever-
ted intestine model［J］． Chin Pharmacol Bull，2014，30(7) :1031
－ 2．
［3］ 陆 苑，潘 杰，谢玉敏，等．头花蓼水提取物对 CYP450 酶诱
导和抑制作用研究［J］．中国药理学通报，2015，31(8) :1147 －
52．
［3］ Lu Y，Pan J，Xie Y M，et al． Inhibitory and inductive effects of
Polygonum capitatum water extract on CYP450［J］． Chin Pharma-
col Bull，2015，31(8) :1147 － 52．
［4］ 杨蓓蓓，冯 茹，王维聪，等． HPLC /DAD /MS法同时测定苗药
头花蓼中 3 种有效成分的含量［J］． 药物分析杂志，2008，28
(11) :1793 － 6．
［4］ Yang B B，Feng Ｒ，Wang W C，et al． Quantitative analysis of
three aetive consittuents in Miao regional herb，Plygonum capiatutm
by HPLC /DAD /MS［J］． J Pharm Anal，2008，28(11) :1793 －
6．
［5］ 谢 宇，张丽艳，梁 斌，等． HPLC 法检测头花蓼及制剂热淋
清颗粒中槲皮苷的含量［J］． 中国中药杂志，2009，34(8) :984
－ 6．
［5］ Xie Y，Zhang L Y，Lian B，et al． Determination of quercitrin in
Polygonum capitatum and Ｒe lin qing granules by HPLC［J］． China
J Chin Mater Med，2009，34(8) :984 － 6．
［6］ 刘 跃，胡 杰，谢玉敏，等． UPLC-MＲM-MS 法测定头花蓼药
材中 7 个指标成分［J］．天然产物研究与开发，2015，27(1) :73
－ 6．
［6］ Liu Y，Hu J，Xie Y M，et al． Determination of seven components
in Polygonum capitatum by UPLC-MＲM-MS［J］． Natural Prod Ｒes
Dev，2015，27(1) :73 － 6．
·7741·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2016 Oct;32(10) :1476 ～ 7