全 文 ：RP-HPLC法测定狼毒中狼毒乙素和岩大戟内酯 B的含量＊
王灿坚 1, 2 ,江英桥 2＊＊ ,毕福钧2 ,林彤2 ,严小红2 ,刘东辉 1
(1.广州中医药大学 ,广州 510405;2.广州市药品检验所 ,广州 510160)
摘要　目的:建立同时测定狼毒药材中狼毒乙素和岩大戟内酯 B的 HPLC定量分析方法。方法:采用LichrospherC18(4.6mm×
250mm, 5 μm)色谱柱 ,以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱(0 ～ 5min, 40%A;5 ～ 10 min, 40%A※ 50%A;10 ～ 30 min, 50%
A※ 55%A;30 ～ 40 min, 55%A※60%A;40 ～ 45min, 60%A※ 70%A),流速 1.0 mL· min-1;检测波长 226 nm,柱温 30 ℃。结
果:狼毒乙素线性范围为 0.005 ～ 0.863μg(r=0.9999),平均回收率为 96.4%(RSD=1.4%, n=6);岩大戟内酯B线性范围为
0.003 ～ 0.496 μg(r=0.9999),平均回收率为 96.0%(RSD=2.1%, n=6)。结论:本方法专属性强 , 结果准确 , 简便可行 , 可用
于狼毒药材的质量控制。
关键词:狼毒;狼毒乙素;岩大戟内酯 B;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2011)05-0839-04
RP-HPLCdeterminationof2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-
methylacetophenoneandjolkinolideBinEuphorbiaeEbracteolataeRadix＊
WANGCan-jian1, 2 , JIANGYing-qiao2＊＊ , BIFu-jun2 ,
LINTong2 , YANXiao-hong2 , LIUDong-hui1
(1.GuangzhouUniversityofChineseMedicine, Guangzhou510405, China;
2.GuangzhouInstituteforDrugControl, Guangzhou510160, China)
Abstract　Objective:TodevelopanHPLCmethodforthedeterminationof2, 4-dihydroxy-6 -methoxy-3 -
methylacetophenoneandjolkinolideBinEuphorbiaeEbracteolataeRadix.Methods:ALichrospherC18(4.6mm ×
250mm, 5 μm)columnwasadopted.Themobilephaseconsistedofacetonitrileandwaterwithgradientelution
(0-5 min, 40%A;5-10min, 40%A※50%A;10-30 min, 50%A※55%A;30-40 min, 55%A※60%A;40-
45 min, 60%A※70%A), attheflowrateof1.0mL· min-1.Thedetectionwavelengthwassetat226nmandcol-
umntemperaturewas30 ℃.Results:Thelinearrangeof2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone
was0.005-0.863μg(r=0.9999), themeanrecoverywas96.4%(RSD=1.4%, n=6);thelinearrangeofjolk-
inolideBwas0.003-0.496μg(r=0.9999), themeanrecoverywas96.0%(RSD=2.1%, n=6).Conclusion:
Themethodisspecific, accurateandconvenient, andcanbeusedforthequalitycontro1 ofEuphorbiaeEbracteola-
taeRadix.
Keywords:EuphorbiaeEbracteolataeRadix;2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone;jolkinolide
B;HPLC;assay
狼毒为大戟科植物月腺大戟 Euphorbiaebracteo-
lataHayata或狼毒大戟 EuphorbiafischerianaSteud.
的干燥根 [ 1] ,具有散结 、逐水 、止痛 、杀虫的功能 。
狼毒主要含萜类 、苯乙酮类 、鞣质类和甾醇类等化学
成分[ 2] ,而月腺大戟和狼毒大戟含有的具体成分有
所不同 ,其中苯乙酮类成分中的狼毒乙素和萜类成
分中的岩大戟内酯 B等为其共有成分 ,狼毒乙素对
结核菌有抑菌作用 [ 3] ,岩大戟内酯 B具有抗肿瘤作
用[ 4] 。狼毒乙素或岩大戟内酯 B的含量测定方法
已有文献报道 [ 5, 6] ,但同时测定狼毒药材中狼毒乙
素和岩大戟内酯 B的方法尚未见报道 ,也没有对除
中国药典收载品种外的狼毒地方习用品瑞香狼毒
—839—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)
＊
＊＊
国家科技支撑计划项目 “药品安全关键技术研究 ”课题—常见与重要药品安全标准研究(2006BAI14B01)
通讯作者　Tel:(020)26282045;E-mail:jiangyq@gzfda.gov.cn
DOI :10.16155/j.0254-1793.2011.05.012
StelerechamaejasmeL.(系瑞香科瑞香狼毒属植物)
和海芋 Alocasismacrorhiza(L.)Schot(系天南星科
海芋属植物 ,又名广东狼毒)[ 7] 中上述 2种成分进
行考察的报道。为了更全面地控制狼毒药材质量 ,
本文建立了狼毒乙素和岩大戟内酯 B的含量测定
方法 ,对狼毒药材及地方习用品的含量进行了考察 。
1　仪器 、试剂与药材
日本岛津 LC-10Avp型高效液相色谱仪(SPD-
M10Avp二极管阵列检测器 , LC-10ADvp泵 ,岛津
CLASS-VP工作站);Agilent1200高效液相色谱仪
(紫外检测器 ,脱气机 ,四元梯度泵 ,化学工作站)。
水为超纯水 ,乙腈为色谱纯 ,乙醇为分析纯 。狼毒乙
素和岩大戟内酯 B由月腺大戟中提取分离得到 ,其
结构经核磁共振光谱鉴定 ,纯度经 HPLC检测分别
为 98.5%和 98.7%。狼毒药材及地方习用品均由
广州市药品检验所侯惠婵和刘伯英主任中药师鉴
定 。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　取对照品狼毒乙素 、岩大
戟内酯 B适量 ,精密称定 ,加乙醇制成每 1mL含狼
毒乙素 6 μg、岩大戟内酯 B4 μg的混合溶液 ,即得 。
2.2　供试品溶液的制备　取药材粉末(过 4号筛)
约 1 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入乙醇
50 mL,密塞 ,称定重量 ,超声处理 (功率 400 W,频
率 37kHz)50 min,取出 ,放冷 ,再称定重量 ,用乙醇
补足减失的重量 ,摇匀 ,取上清液 ,用微孔滤膜过滤
(0.45 μm),取续滤液 ,即得 。
2.3　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱:汉邦科
技 LichrospherC18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱
柱;流动相:以乙腈 (A)-水 (B)梯度洗脱 (0 ～ 5
min, 40%A;5 ～ 10min, 40%A※50%A;10 ～ 30min,
50%A※55%A;30 ～ 40min, 55%A※60%A;40 ～ 45
min, 60%A※70%A);流速:1.0 mL· min-1;检测波
长:226 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。理论板数
按岩大戟内酯 B峰计算应不低于 4000,分离度大于
1.5。色谱图见图 1。
2.4　线性关系考察　精密称取对照品狼毒乙素和
岩大戟内酯 B适量 , 加乙醇配制成浓度分别为
0.108 mg· mL-1和 0.062 mg· mL-1的混合对照品
溶液①;精密量取混合对照品溶液①3.0 mL置 50
mL量瓶中 ,加乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得混合对照品
溶液②。分别精密吸取混合对照品溶液②2 μL、12
μL和混合对照品溶液①1 μL、2 μL、4 μL、8 μL进
样分析 ,测定峰面积。以进样量 X(μg)为横坐标 ,
图 1　对照品(A)、月腺大戟(1号样品)(B)、狼毒大戟(5号样
品)(C)、瑞香狼毒(D)、海芋(广东狼毒)(E)的 HPLC色谱图
Fig1　Chromatogramsofreferencesubstances(A), Euphorbiaebrac-
teolata(No.1)(B), Euphorbiafischeriana(No.5)(C), Stellera
chamaejasme(D), andAlocasiamacrorhiza(E)
1.狼毒乙素(2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophe-
none)　 2.岩大戟内酯 B(jolkinolideB)
峰面积积分值 Y为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得狼毒
乙素 、岩大戟内酯 B的回归方程分别为:
Y=3.06×103X+2.08　r=0.9999
Y=2.28×103X-0.0856　r=0.9999
结果表明 ,狼毒乙素及岩大戟内酯 B的线性范围分
别为 0.005 ～ 0.863 μg和 0.003 ～ 0.496 μg。
2.5　精密度试验　精密吸取狼毒乙素浓度为 6.47
μg· mL-1和岩大戟内酯 B浓度为 3.72 μg· mL-1
的混合对照品溶液 10 μL,连续进样 6次 ,测定峰面
积 ,计算 RSD值。结果狼毒乙素及岩大戟内酯 B的
—840— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)
峰面积平均值(n=6)分别为 197.3和 86.9;RSD分
别为 0.10%和 0.17%。
2.6　稳定性试验　取 1号样品粉末 ,按 “ 2.2”项下
方法制备供试品溶液 ,分别于 0, 1, 2, 4, 6 , 12, 24 h
按上述色谱条件进样分析 。结果狼毒乙素及岩大戟
内酯 B的平均含量 (n=7)分别为 0.025%和
0.016%, RSD分别为 0.2%和 1.6%。表明供试品
溶液在 24h内测定结果稳定性良好。
2.7　重复性试验　取 1号样品粉末 6份 ,分别按 “2.2”
项下方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件进样测定。
结果狼毒乙素及岩大戟内酯 B平均含量(n=6)分别为
0.025%和 0.016%, RSD分别为 1.3%和 1.4%。
2.8　准确度(以加样回收率表示)　取已知含量的
1号样品粉末 0.5 g共 6份 ,精密称定 ,精密加入狼
毒乙素(110.68 μg· mL-1)和岩大戟内酯 B(67.82
μg· mL-1)的混合对照品溶液 1 mL,按 “ 2.2”项下
方法制备供试液 ,进样测定 ,计算回收率 。结果狼毒
乙素及岩大戟内酯 B的平均回收率(n=6)分别为
96.4%和 96.0%, RSD分别为 1.4%和 2.1%。
2.9　样品测定　分别精密吸取对照品溶液和供试
品溶液各 10μL,进样测定 ,计算样品中狼毒乙素和
岩大戟内酯 B的含量 ,结果见表 1。
表 1　药材含量测定结果
Tab1　Determinationresultsofsamples
种名
(species)
编号
(No.)
来源
(source)
含量(contents)/%
狼毒乙素
(2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone)
岩大戟内酯B
(jolkinolideB)
月腺大戟
(Euphorbia
ebracteolata)
1 辽宁省药品检验所提供(providedbyLiaoning
InstituteforDrugControl)
0.025 0.016
2 江苏省药品检验所提供(providedbyJiangsuIn-
stituteforDrugControl)
0.026 0.008
3 河北安国市养生堂药业(YangshengtangPharma-
ceuticalofAnguoCity, HebeiProvince)
0.028 0.010
4 安徽省亳州市药材总公司药材公司(Medicinal
MaterialsCompanyofBozhouCity, AnhuiProv-
ince)
0.017 0.017
5 河北安国市同利中药材有限公司(Anguocity
TongliHerbalMedicineCo., Ltd.ofHebeiProv-
ince)
0.023 0.009
6 亳州百全药业有限公司(BozhouBaiquanPhar-
maceuticalCo., Ltd.)
0.014 0.010
7 安国市京兴药业(JingxingPhamaceuticalofAn-
guoCity)
0.027 0.008
8 安国市冷背药材有限公司(LengbeiMedicinal
MaterialsCo., Ltd.ofAnguoCity)
0.028 0.012
9 亳州市安格药业有限责任公司(AngePhama-
ceuticalCo., Ltd.ofBozhouCity)
0.028 0.030
10 中国食品药品检定研究院(产地:河南)(Na-
tionalInstitutesforFoodandDrugControl;Origin:
HenanProvince)
0.010 0.010
11 中国食品药品检定研究院(产地:安国)(Na-
tionalInstitutesforFoodandDrugControl;Origin:
AnguoCity)
0.025 0.006
12 江门市恒健药业有限公司(HengjianPhamaceu-
ticalCo., Ltd.ofJiangmenCity)
0.018 0.007
13 驼腰子镇药材开发中心(MedicinalMaterials
DevelopmentCentreofTuoyaoziTown)
0.029 0.010
狼毒大戟
(Euphorbia
fischeriana)
14 辽宁康辰药业有限公司 (产地:辽阳市)
(KangchenPhamaceuticalCo., Ltd.ofLiaoning
Province;Origin:LiaoyangCity)
0.004 0.032
15 辽宁康辰药业有 限公司 (产 地:辽宁 )
(KangchenPhamaceuticalCo., Ltd.ofLiaoning
Province;Origin:LiaoningProvince)
0.003 0.035
—841—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)
续表 1
种名
(species)
编号
(No.)
来源
(source)
含量(contents)/%
狼毒乙素
(2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone)
岩大戟内酯B
(jolkinolideB)
狼毒大戟
(Euphorbia
fischeriana)
16 辽阳市弓长岭采集(ColectedbyGongchangling
ofLiaoyangCity)
0.004 0.089
17 辽宁新宾铁背岭采集(ColectedbyXinbinTie-
beilingofLiaoningProvince)
0.021 0.110
18 辽宁清原英额门采集(ColectedbyQingyuan
Ying emenofLiaoningProvince)
0.011 0.155
瑞香狼毒
(Stelera
chamaejasme)
19 长安中药材有限公司(Chang anHerbalMedi-
cineCo., Ltd.)
未检测到
(notdetected)
未检测到
(notdetected)
海芋
(Alocasia
macrorhiza)
20 广州市通济堂药店(产地:广东)(Tongjitang
PharmacyofGuangzhouCity;Origin:Gangdong
Province)
未检测到
(notdetected)
未检测到
(notdetected)
3　讨论
3.1 检测波长选择　狼毒乙素的最大吸收波长分
别为 196 nm和 291 nm,岩大戟内酯 B的最大吸收
波长为 238 nm,在 226 nm波长下 2个成分均有较
强的吸收 ,因此选用 226 nm为检测波长 。
3.2 流动相的选择　考察了甲醇 -水 、乙腈 -水 、
乙腈 -0.05%醋酸作为流动相时对样品中多成分的
洗脱能力 ,发现乙腈 -水系统比较适合于样品中成
分的分离分析 ,甲醇 -水系统分析时间较长而且峰
形不如乙腈 -水系统好 ,乙腈 -0.05%醋酸系统的
基线波动较大 ,故选择乙腈 -水作为洗脱系统 。
3.3 对照品溶液配制溶剂选择　试验研究中发现
岩大戟内酯 B在甲醇溶液中和酸性条件下稳定性
较差 ,长期放置含量降低 ,经考察在不同溶剂中的稳
定性 ,选择乙醇作为对照品溶液的配制溶剂。
3.4 供试品溶液制备条件选择　在供试品溶液的
制备过程中比较了不同溶剂乙醇 、丙酮 、乙酸乙酯 、
三氯甲烷和石油醚的提取效果 ,结果表明乙醇对狼
毒乙素和岩大戟内酯 B的提取量较高。考察了超
声 、回流 、索氏提取 、冷浸等方法 ,结果显示乙醇超声
提取的方法最佳;分别比较了 15, 30, 50, 80mL乙醇
超声提取 ,发现 50 mL乙醇超声提取对狼毒乙素和
岩大戟内酯 B成分已提取完全;同时考察了超声处
理 10, 20 , 30, 40, 50, 60 min的提取效果 ,结果表明
超声 50 min已将狼毒乙素和岩大戟内酯 B成分提
取完全 。
3.5 含量测定结果　狼毒大戟和月腺大戟中普遍
含有狼毒乙素和岩大戟内酯 B, 2个成分的含量范
围分别为 0.003% ～ 0.029%和 0.006% ～ 0.155%。
瑞香狼毒和海芋不含有这 2个成分 。
参考文献
1　ChP(中国药典).2010.VolⅠ (一部):269
2　CAOXin-wei(曹新伟), FENGWei-sheng(冯卫生).Thelatest
progressinstudiesofchemicalcomponentsofEuphorbiaeEbracteolate
Radix(狼毒的化学成分研究进展).HenanColTraditChinMed
(河南中医学院学报), 2004, 19(6):81
3　ZHANGHan-qing(张涵庆), DINGYun-mei(丁云梅).Studies
ontheactivecompoundBandCintherootofEuphorbiaebracteolata
Hayata(月腺大戟根中有效成分乙素和丙素的结构研究).JPlant
ResourEnviron(植物资源与环境), 1992, 1(3):6
4　LIUWen-zi(刘文粢), HEFeng-lei(何风雷), RUANZi-yong
(阮子镛), etal.StudiesonEuphorbiafischerianaditerpenoidelac-
tonesinhibitoryefectonhumantumorcelsinvitro(狼毒大戟二萜
内酯对人癌细胞体外抑制作用的研究).JChinMedMater(中药
材), 2000, 23(10):623
5　LIBing(李兵), GOUHuan-juan(郭环娟).HPLCdeterminationof
2, 4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenoneinEuphorbia
fischerianaSteud.(HPLC测定狼毒大戟中狼毒乙素的含量).
PharmToday(今日药学), 2008, 18(1):46
6　QIAOChun-feng(乔春峰), HANQuan-bin(韩全斌), HEZhen-
dan(贺震旦), etal.HPLCdeterminationofjolkinolideAandjolkin-
olideBinChineseherbmedicine“Lang-du”(RP-HPLC法测定
狼毒中岩大戟内酯 A和B的含量).ChinJPharmAnal(药物分析
杂志), 2006, 26(9):1204
7　JiangsuNewMedicalColege(江苏新医学院).DictionaryofChinese
HerbalMedicine(中药大辞典).Vol2(下册).Shanghai(上海):
ShanghaiPeoplesPublishingHouse(上海人民出版社), 1977.
1898, 1926
(本文于 2010年 6月 28日收到)
—842— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2011, 31(5)