全 文 ：第 21卷第 4期
2003年 7月
泉州师范学院学报(自然科学)
Journal of Quanzhou Normal University(Natural Science)
Vol.21　No.4
Jul.2003
赤楠茎叶果总黄酮提取与含量测定
黄晓冬1 ,刘剑秋2 ,陈炳华2
(1.泉州师范学院 教科院 , 福建 泉州　362000;2.福建师范大学 生物工程学院 , 福州　350007)
摘　要:以不同浓度的酒精 、料液比 、提取温度及提取时间等条件对赤楠茎叶果等不同器官的
总黄酮的提取进行正交设计实验 ,并用聚酰胺吸附-硝酸铝显色法测定的总黄酮含量.结果表明:
茎的最佳提取条件为 55%乙醇70～ 80 ℃提取 2 h ,含量为 1.50%;叶为 70%乙醇 90 ～ 100 ℃提取
1 h ,含量为 7.43%;青果皮为 55%乙醇 70～ 80 ℃提取 2 h ,含量为 1.28%.
关键词:赤楠;茎;叶;青果皮;总黄酮;测定
中图分类号:Q949.741 , R284.2 文献标识码:A　文章编号:1009-8224(2003)04-0072-05
赤楠 Syzygium buxi folium Hook .et .Arn 为桃金娘科蒲桃属植物的常绿灌木 ,多生于低
山疏林或灌丛中 ,分布于广东 、广西 、贵州 、湖南 、台湾 、江西 、浙江 、安徽等省 ,福建各地极常
见[ 1] ,资源极为丰富.对赤楠化学成分的研究 ,吴兆明等[ 2]报道该植物中稀土元素的含量与分
布 ,周法兴等[ 3]也分离与鉴定了根与茎的 6种化学成分.鉴于迄今为止有关赤楠黄酮类化合
物的研究未见报道 ,本文主要对赤楠植物体不同器官的黄酮类化合物进行预试 ,并以正交试
验的优化条件测定其含量.
1　材料与方法
1.1　仪器
索式提取器 、粉碎机 、恒温水浴锅 、砂芯漏斗 、721型分光光度计.
1.2　材料 、药品
阴干粉碎的赤楠茎 、叶 、青果皮粉末(植物材料采自福州鼓山),聚酰胺粉(经 70%酒精预
处理)、0.1 mg/ml芦丁标准液等.
1.3　方法
1.3.1　样品处理　足够重量的茎 、叶 、青果皮粉末三样品分别以石油醚为溶剂在索氏提取器
中抽提以去除叶绿素和脱蜡 、脱脂 ,之后自然挥去石油醚 ,粉末备用.
1.3.2　赤楠(茎 、叶 、果)化学成分预实验　称取处理后的茎 、叶 、青果皮粉末各 1.0 g ,各加
70%乙醇 ,索氏抽提 30 min ,得抽提液.取抽提液并将其作为预实验供试液 ,进行系列颜色反
收稿日期:2003-03-04
作者简介:黄晓冬(1973-　), 男 ,福建南安人 , 讲师 ,主要从事植物资源研究.
DOI :10.16125/j.cnki.1009-8224.2003.04.016
应 ,检识总黄酮化合物的有无.
1.3.3　标准曲线的制备　精确吸取 0.1 mg/ml的芦丁标准液 0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 ml
于 6只具塞试管中 ,各加 60%乙醇使成 5 m l ,加 5%NaNO2溶液 0.3 ml ,摇匀 ,放置 6 min;加
10%Al(NO3)3 溶液 0.3 m l ,摇匀 ,放置 6 min;加 1 mol/L NaOH 溶液 4 ml ,加蒸馏水 0.4 ml ,
摇匀 ,放置 15 min ,于 510 nm波长下测定消光值[ 4] ,以消光值对标样含量 mg 数作图.
1.3.4　提取条件的正交优选 　以提取剂浓度 、提取时间 、提取温度 、料液比四个因素 ,设三
个水平 ,按 L9(34)正交设计与实验.
1.3.5　茎叶果总黄酮含量测定与比较　以正交优选的最佳条件 ,提取总黄酮 ,分别以聚酰胺
吸附-硝酸铝显色法测定总黄酮含量[ 4] .计算公式为
样品中总黄酮含量(以芦丁计)(%)= CV1V3
WV2V4
×1
10
, (1)
式中:C———样液含总黄酮量(mg);V1 ———抽提倍量体积(ml);V2 ———聚酰胺处理时取样体积
(ml);V3 ———聚酰胺处理后定容体积(ml);V4 ———显色反应测定取用样液体积(ml);W ———
称样量(g).
2　结果与分析
2.1　赤楠(茎 、叶 、果)黄酮类化合物颜色反应检识
赤楠茎 、叶 、果的黄酮类化合物颜色反应检识结果见表 1.
表 1　赤楠茎 、叶 、果中总黄酮的检识
试　剂　名　称 结　　　果茎　 叶　 青果皮
盐酸锌粉反应(微加热) 红 深橙红 橙
3%AlCl3 乙醇＊(紫外光观察) 黄绿色 黄色 黄绿色
1%FeCl3 蓝 蓝 蓝
1%醋酸铅 红色沉淀 黄色沉淀 黄色沉淀
浓硫酸 棕红 橙 棕红
1NNaOH 棕红 棕红 深橙红
　　　　　注:＊滤纸上进行.
表 1的颜色反应与黄酮类化合物的颜色反应相似 ,说明赤楠的茎 、叶 、青果皮含有黄酮类
化合物.
图 1　芦丁标准品浓度与吸光度的关系
2.2　实验测得的芦丁标准曲线
实验测得芦丁标准品浓度与吸光度的关系见图
1.以一元线性回归分析图 1 ,得标准曲线为 y =1.
245 x -0.0055 ,线性范围为 0 ～ 0.5 mg ,相关系数 r
=0.9992.
2.3　赤楠(茎 、叶 、果)总黄酮最佳提取条件优选
准确称取处理过的样品各 1.0 g ,以乙醇为提取剂 ,设四个因素三个水平 ,进行正交设计
与实验 ,提取液按制作标准曲线法处理 ,测定其消光值 ,按公式(1)求出总黄酮含量.正交设计
73　第 4期 黄晓冬等:赤楠茎叶果总黄酮提取与含量测定 　
与实验结果 、实验分析分别见表 2-4.
表 2　L9(34)因子水平
水平 因　　　　　　子
A 乙醇浓度/ % B 温度/ ℃ C 提取时间/ h D料液比/ g/ ml
1 85 50-60 3 1:25
2 55 70-80 1 1:15
3 70 90-100 2 1:35
表 3　正交设计方案与结果
A B C D 茎Ⅰ总黄酮含量(%)　Ti 叶Ⅱ总黄酮含量(%)　 Ti 青果皮Ⅲ总黄酮含量(%)T i
1 1 1 1 1 0.41 0.44 0.37 1.22 1.74 1.87 1.63 5.24 0.34 0.3　 0.27 0.91
2 1 2 2 2 0.25 0.29 0.25 0.79 1.85 1.49 1.62 4.96 0.40 0.45 0.43 1.28
3 1 3 3 3 0.57 0.63 0.51 1.71 2.68 2.67 2.65 8 0.71 0.66 0.60 1.97
4 2 1 2 3 0.96 0.86 0.99 2.81 3.63 3.61 3.59 10.83 0.85 0.82 0.79 2.46
5 2 2 3 1 1.51 1.57 1.44 4.52 5.24 5.20 5.18 15.62 0.96 1.25 1.08 3.29
6 2 3 1 2 0.99 1.09 0.89 2.97 3.39 3.38 3.34 10.11 0.62 0.57 0.54 1.73
7 3 1 3 2 0.45 0.49 0.40 1.34 1.43 1.42 1.41 4.26 0.17 0.13 0.15 0.45
8 3 2 1 3 0.85 0.87 0.86 2.58 4.75 4.72 4.70 14.17 0.95 0.99 0.96 2.9
9 3 3 2 1 0.53 0.54 0.56 1.64 7.17 8.05 7.05 22.27 0.56 0.62 0.60 1.78
K Ⅰ 1 3.720 5.370 6.771 7.380 19.58 95.46 16.77
K Ⅰ 2 10.299 7.89 5.241 5.100
K Ⅰ 3 5.559 6.321 7.569 7.101
R Ⅰ 6.579 2.520 2.328 2.280
K Ⅱ1 18.200 20.331 29.520 43.131
K Ⅱ2 36.560 34.749 38.061 19.329
K Ⅱ3 40.700 40.380 27.879 33.000
R Ⅱ 22.5　 20.049 10.182 23.802
K Ⅲ1 4.161 3.819 5.541 5.979
K Ⅲ2 7.479 7.470 5.520 3.459
K Ⅲ3 5.130 5.481 5.709 7.329
R Ⅲ 3.318 3.651 0.189 3.87
注:K 为对应的 T i之和 , R为 Kmax与 Kmin之差.
表 4　赤楠茎叶果正交实验结果方差分析
方差来源 方差茎 叶 青果皮
自由度
均　方　差 F 值　
茎 叶 青果皮 茎 叶 青果皮
A乙醇浓度 2.557 31.86 0.647 2 1.279 15.93 0.324 511.6＊＊ 455.143＊＊ 104.516＊＊
B 温 度 0.36 33.757 0.743 2 0.18 11.878 0.372 72＊＊ 339.371＊＊ 120＊＊
C 时 间 0.312 6.641 0.002 2 0.156 3.321 0.001 62.4＊＊ 94.886＊＊ 0.32
D 料 液 比 0.344 31.706 0.854 2 0.172 15.853 0.427 68.8＊＊ 452.943＊＊ 137.742＊＊
误 差 E 0.045 0.622 0.056 18 0.0025 0.035 0.0031
注:F0.05=3.55 , F0.01=6.01 , ＊代表显著水平 , ＊＊代表极显著水平.
从表 3的直观分析与表 4的方差分析可知 ,4种因素影响茎总黄酮浸提率的主次顺序依
次为A>B>C>D ,最佳组合为A2B2C3D1 ,即 25倍原料重的55%乙醇溶液 ,在70 ～ 80 ℃条件
下提取 2 h;影响叶总黄酮浸提率的主次顺序依次为 D>A>B>C ,最佳组合为 A3B3C2D1 ,即
25倍原料重的 70%乙醇溶液 ,在 90 ～ 100 ℃条件下提取 1 h;影响青果皮总黄酮浸提率的主
次顺序依次为 D>B>A>C ,最佳组合为 A2B2C3D3 ,即 35倍原料重的 55%乙醇溶液 ,在 70 ～
80 ℃条件下提取 2 h.
74 　 泉州师范学院学报(自然科学) 2003年 7月　
2.4　茎叶果总黄酮含量测定与比较
以最佳提取条件浸提茎叶果总黄酮 ,聚酰胺吸附-硝酸铝显色法测定相应总黄酮含量 ,
得出平均总黄酮含量茎为 1.50%,叶为 7.43%,青果皮为 1.28%.
3　讨论与结论
(1)实验表明 ,赤楠植物体不同器官的总黄酮含量差异较大 ,叶中的总黄酮含量最高 ,高
达 7.43%,具有潜在的研究与开发价值.
(2)探讨四个因素对不同器官总黄酮提取率的影响时可发现 ,在四个因素中提取剂的浓
度和温度是两个具有相对重要地位的因子 ,对不同器官的总黄酮提取率皆有极显著影响 ,而
其它的因子的影响则因器官不同而有所差异.
(3)实验得出 ,不同器官总黄酮浸提条件的最佳组合不同:茎为A2B2C3D1 ,即 25倍原料重
的55%乙醇溶液 ,在70 ～ 80 ℃条件下提取 2 h;叶为 A3B3C2D1 ,即 25倍原料重的 70%乙醇溶
液 ,在 90 ～ 100 ℃条件下提取 1 h;青果皮为A2B2C3D3 ,即 35倍原料重的 55%乙醇溶液 ,在 70
～ 80 ℃条件下提取 2 h ,其中叶的浸提时间只需 1 h 就足以浸提较充分.而以 25倍原料重的
70%乙醇对叶进行常温 24 h浸提 ,测得总黄酮含量仅为 2.90%,进一步说明了在时间与温度
两因子对叶总黄酮的提取率影响中 ,温度更为重要 ,这与文[ 5]的研究结果有所不同.
(4)准确称取未经石油醚脱脂 、脱色 、脱腊处理和经石油醚脱脂 、脱色 、脱腊处理的叶粉末
各1.0 g ,同时以最佳提取条件 A3B3C2D1 提取 ,测得未经石油醚处理的叶粉末总黄酮含量为
4.78%,比经处理的叶粉末总黄酮含量减少 2.65%左右 ,说明经石油醚脱脂 、脱色 、脱腊处理
可提高叶总黄酮的提取率 ,这可能是因为蜡质的破坏与脂类的消除 ,有利于极性提取剂的渗
透和黄酮类的渗出[ 6] .
参 考 文 献:
[ 1] 　福建植物志编写组.福建植物志(第四卷)[ M] .福州:福建科学技术出版社 , 1990.78-100.
[ 2] 　吴兆明 ,汤锡珂 ,高小霞 ,等.稀土元素对农业增产作用的研究 1.稀土元素在植物体内的含量和分布规律初探[ J] .中
国稀土学报 , 1983 , (1):70.
[ 3] 　周法兴 ,梁培瑜.赤楠化学成分研究[ J] .中国中药杂志 , 1998 , 23(3):164-165.
[ 4] 　元晓梅 ,蒋明蔚 ,胡正芝.聚酰胺吸附-硝酸铝显色法测定山楂及山楂制品中的总黄酮含量[ J] .食品与发酵工业 ,
1996 ,(4):27-32.
[ 5] 　苏燕评 ,刘育梅 ,刘剑秋 ,等.红花桑寄生茎叶总黄酮提取工艺[ J] .亚热带植物科学 , 2002 , 31(2):21-24.
[ 6] 　翟梅茎 ,张凤云 ,高绍棠 ,等.核桃叶总黄酮提取方法研究[ J] .陕西林业科技 , 2000 ,(1):5-8.
Extraction and Determination of Total Flavonoids from Stem ,
Leaf and Unripe Fruit of Syzygium buxifolium
HUANG Xiao-dong1 , LIU Jian-qiu2 , CHEN Bing-hua2
(1.Institute of Educational Science , Quanzhou Normal University , Fujian 362000 , China;
2.Bioengineering Co llege , Fujian Normal University , Fuzhou 350007 , China)
Abstract:This paper repo rts the studying on total flavonoids ext racted w ith different ext ract ing
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conditions f rom stem , leaf and unripe fruit of Syzygium bux ifolium Hook.et.Arn , purified by
polycaprolactan , produced color w ith aluminium ni trate and determined , and the optimum ex-
tracting condit ions of f lavonoid by the orthogonal experiment.Results show that the optimum
conditions of ext raction are as follow s :from stem —ext racted by 55%ethanol at 70 ～ 80 ℃ for 2
hours , f rom leaf—ex tracted by 70%ethanol at 90 ～ 100 ℃ for 1 hour , f rom pulp of unripe fruit —
ex tracted by 55%ethanol at 70-80 ℃ for 2 hours.Extracted by the optimum extracting condi-
tions , flavonoid content in the stem is 1.50%, in the leaves is 7.43%, in the pulp of unripe f ruit
is 1.28%.
Key words:Syzygium buxi fol ium ;stem;leaf;pulp of unripe fruit ;total f lavonoid;determina-
tion
泉州师院数字图书馆简介
在图书馆有关工作人员的不懈努力下 ,人们盼望已久的泉州师院数字图书馆已初具规
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图书馆将为我校教学科研的进展提供强大的知识“能源” .
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会的一朵奇葩 ,她改变了传统图书馆的服务范围和静态书本式文献服务方式 ,实现了网络传
输 、智能化检索 、多媒体存取 、跨库链接等功能 ,使超时空利用文献信息梦想成真.
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数据库;④中国基础教育资料库;⑤影音媒体.其中 ,超星数字图书馆种数多达 50 万 ,包括数
十年来自然科学 、社会科学各学科的图书全文.CNKI 数据库收录 1994年至今的 5 300余种
期刊全文 ,分为理工 A(数理科学)、理工 B(化学化工能源与材料)、理工 C(工业技术)、农业 、
医药卫生 、文史哲 、经济政治与法律 、教育与社会科学综合 、电子技术与信息科学 9大专辑.
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利通用的分类方法划分为人类生活必需(农 、轻 、医)、作业与运输 、化学与冶金 、纺织与造纸 、
固定建筑物(建筑 、采矿)、机械工程 、物理 、电学等八个专辑.万方数据库包括学位论文全文 、
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期刊和高校学报论文全文;科技信息包括中国科技成果 、国内外各种标准 、中国科研机构 、科
技名人 、政策法规等;商务信息包括国内企业及其产品信息.中国基础教育资料包括语文 、数
学 、英语 、物理 、化学 、政治 、生物 、历史 、地理 、体育健康 、艺术教育 、教学管理 、第二课堂教研资
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义经典故事片 ,以及学术讲座录像和多媒体课件资源 ,内含丰富多彩的课件 、动画 、图片 、音
频 、视频 、文本等教学教研资料.目前已装有万余片光盘.
图书馆　吴力群供稿
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